СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДАНТОИЛ1-ВАЛИЛ5-АНГИОТЕНЗИНА П Советский патент 1970 года по МПК C07K7/14 

Изобретение относится к области получения гидантоил -валил -ангиотензина П - нового высококачественного аналога природного полипептидного гормона валил5-ангиотензина П, который применяется в медицине так же, как и его производные.

Известны многочисленные способы синтеза ангиотензина П и его аналогов конденсацией защищенных пептидов соответствующей длины карбодиимидным методом с последующим удалением защитных групп. Недостатками всех этих способов получения биологически высокоактивных синтетических аналогов ангиотензина являются: использование таких дорогостоящих оптически активных N-концевых аминокислот, как L-аспарагиновая, D-acпарагиновая, L-аспарагин и др.; сложность защиты трифункциональных аминокислот; опасность рацемизации и а- -р-транспептидации во время присоединения производного аспарагиновой кислоты и удаления защитных групп.

Предлагается способ получения гидантоил валилз-ангиотензина П конденсацией гидантоиновой кислоты с «-нитробензиловым эфиром со-нитро-аргинил-валил-тирозил-валил-гистидил-пропил-фенилаланина (все аминокислоты L-ряда) в присутствии N-гидроксисукцинимида карбодиимидным методом с последующим гидрированием.

Целью изобретения является разработка упрощенного синтеза нового высокоактивного аналога ангиотензина П с использованием дешевых и легкодоступных исходных материалов. Это достигается применением в качестве N-концевой аминокислоты оптически неактивной и дешевой гидантоиновой кислоты (карбамоилглицина). Гидантоиновую кислоту с хорошим выходом и в простых условиях можно получать из глицина и цианата калия. Введение остатка гидантоиновой кислоты в молекулу С-защищенного г.ептапептида ангиотензина П методом К ,Н-дициклогексилкарбодиимида с добавкой N-гидроксисукцинимида не требует применения дополнительных защитных груип. Отпадает также опасность рецемизации и а- р-гранспептидации.

Для удаления защитных групп производное октапептида гидрируется над палладиевым катализатором, и полученный гидантоил валилз-ангиотензин П очищается на полимерной смоле «Сефадекс G-15.

Предлагаемый способ получения гидантоил1-валил5-ангиотензина апробирован в лабораторных условиях.

Пример. п-Нитробензиловый эфир гидантоил-со-нитро - аргинил - валил - тирозил-валилгистидил-пропил-фенилаланина.

дил-пролил-феиилаланина, 0,036 г (0,3 лШ) гидантоиновой кислоты и 0,069 г (0,6 лШ) N-гидроксисукцинимида растворяют в 1,0 льг сухого Ы,М-диметилформамида; к охлажденному до -30°С раствору добавляют 0,062 г (0,3 лгуИ) М;К-дициклогексилкарбодиимида. Смесь нерсмешивают в течение 15 лшн при -30°С, затем оставляют на 18 час при комнатной температуре. После выдержки отфильтровывают выпавшую М,М-дицнклогексилмочевину, к фильтрату добавляют 30 мл насыщенного раствора хлористого натрия, осадок отфильтровывают, на фильтре трижды промывают по 10 мл дистиллированной воды и сушат в вакуумном эксикаторе над пятиокнсью фосфора и гидроокисью калия. Полученный продукт на хроматографической бумаге марки «С Ленинградской бумажной фабрики № 2 в системе н-бутиловый спирт - вода - уксусная кислота (4:5:1) при проявлении реагентом Эрлиха, дает одно пятно с Rf 0,85.

Выход 0,186 г (81%), т. пл. 170-174°С (разлагается), |а|ц 18°±:2° (с 1,6; диметилформамид).

Найдено, %: С 56,61; Н 6,39; N 17,32.

CssHysOisNis-HsO.

Вычислено, %: С 56,45; Н 6,46; N 17,95.

Гидантоил1-валил5-ангиотензин П.

0,210 г (0,18 мМ} п-нитробензилового эфира гидантоил-ю-нитро-аргинил-валил-тирозилвалил-гистидил-пролил-фенилаланина гидрируют в течение 36 час над палладиевой чернью в 5 мл раствора метанол - вода - уксусная кислота (6:1:1) при комнатной температуре. После гидрирования катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают в вакууме. Полученный продукт очищают на полимерной смоле «Сефадекс G-15 в растворе «-бутиловый спирт - вода - уксусная кислота - пиридин (30:24:6:20). Фракции, содержащие

гидаптоил1-валилз-ангиотензин П (идентификация при помощи бумажной хроматографии в вышеуказанных условиях, Rf 0,57), объединяют, унаривают в вакууме, растворяют в воде и лиофилизируют. Полученный гидантоил1-валилз-ангиотензин П сушат в вакуумном эксикаторе над пятиокисью фосфора.

Выход 0,120 г (65%), т. пл. 150-160 С (разлагается), г -42°±4° (с 0,4;

20%-ная уксусная кислота).

Найдено, %: С 54,83; Н 6,81; N 17,91. C48H680iiNi4 СНзСООН НгО. Вычислено, %: С 54,98; Н 6,93; N 17,56. Аминокислотный состав: глицин 0,93; аргиНИН 1,01, валин 2,08; тирозин 1,08; гистидин 1,00; пролин 1,00; фенилаланин 1,22.

Гедантоил1-валил5-ангиотензин П по своей прессорной и миотропической активности превосходит природный гормон-валил -ангиотензин П - в 1,3-1,4 раза.

Предмет изобретения

1. Способ получения гидантоил1-валил -ангиотензина П, отличающийся тем, что гидантоиновую кислоту конденсируют с л-нитробензиловым эфиром со-нитро-аргинил-валилтирозил-валил - гистидил - пропил-фенилаланина (все аминокислоты L-ряда) в присутствии N-гидроксисукцинимида карбодиимидным методом с последующим гидрированием образовавшегося продукта и выделением конечного продукта известными способами.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что гидрирование проводят в присутствии палладиевого катализатора.

3. Сиособ по пп. 1 и 2, отличающийся те.м, что конечный продукт выделяют с ирименением сефадвкса G-15 и последующей лиофилизацией.