Способ получения пептидов Советский патент 1979 года по МПК C07K5/83 C07K1/06 

Изобретение относится к способам получения пептидов, содержащих хромофорную группу. Известен способ связывания хромо форной группы с С-концевой аминокис лотной группой 1 путём конденсаци защищенной по eiL -аминогруппе аминокислоты с изоцианатом. В пептидной химии широко используют при конденсации пептидных фраг ментов метод активированных эфиров 2 и различные способы снятия концевых N-защитных групп 3. , Целью изобретения является получение новых пептидов с хромофорной группой, которые могут найти применение в биохимии. Предлагается способ получения пе тидов общей формулы: R - глицин-Z пролин-Z аргинин - -NH - R HY где R - водород, п-толуольная-,2-нафталин- етан- или бензол- сульфонильная группа.и ацильная группа формулы: R - С (О)- где R - алифатический углеводородный остаток с 1-7 атомами углерода, фенилалкиловый остаток с 1-3 атомами углерода в алкильном остатке, циклогексиловый или алкилокси остаток с 1-5 атомамы углерода в алкильном остатке4 метокси-2-нафтиламид, п-нитроанилид, 2-нафтиламид; анион минеральной или органической кислоты. Способ заключается в том, что соединение формулы R -Z-аргинин-ОН . HY 2) где R - блокирующая л -аминогруппу защитная группа; имеет значения, указанные ранее; подвергают взаимодействию с иэоцианатом формулы , N - R-, где значения R указаны в триамиде гексаметилфосфорной кислоты в присутствии одного эквивсшента третичного органического основания, при комнатной температуре в безводной среде; полученное при этом Соединение формулыR -2-аргинин-ЫН-К -НУ (4) обрабатывают 2н. НВг в ледяной уксусной или во трифторуксуснойгИли в .водной муравьиной кислоте, или газообразным хлористым-водородом в диоксине, , в безводной среде, при комнатной температуре; полученный при этом продукт формулы Н-2-аргинин-ЫН-Е 2HY (5) обрабатывают в диметилформамиде экви Вс1лентнь м количеством третичного органи.ческого основания при комнатной температуре и полученное при этом соединение формулы {Н-2-аргинин-ЫН-Е -НУ (6) подвергают взаимодействию с соединением формулы Н -глицин-2-пролин-Н . (7) где R - активная сложноэфирная груп па; :.. - К - одна из групп, обозначенных через R , значение которой указано ранее, иглй алкоксикарбонильная группа, алкиль ный остаток которой имеет, по крайней мере, один атом водорода у t -атома углерода и содержит до 10 атомов углерода, полученное при этом соединение формулы R -глицин-Z пролин-2-аргинин- t -NHrR HY обрабатывают если в ледяной уксусной или трифторуксусной, или в безводной муравьиной кислоте, или газообразным хлористым водородом в диоксане в безводной среде при ком натной температуре и получают Н-глицин-Z пролин-Z аргинин-NH-RI 2 НУ. (9 последнее соединение, растворенное в диметилформамиде, при обработке эквивалентным количеством третичного органического основания при комнатной температуре переводят в соединение формулы , {Н-глицин-Z пролин-Z аргинин-NH-R ) . НУ , (10 Которое подвергают взаимодействию с соединением формулы R.(11 где значения R указаны ранее; R имеет те же значения, что и R означает хлор или бром, причем если R - хлор или бром, то третичное органическое основание применяют в ко личестве, эквивалентном количеству соединения (11), процесс ведут в ди метилформамиде при температуре от -10 до . Элюаты анализируют путем тонкослойной хроматографии с При этом при меняют гелем двуокиси крем ния Ф 254 {фирма Мерк) стеклянные пластинки. Для проявления тонкослойных хроматограмм используют етгеттующие снеге растворителей: А хлор9Форм-метанол (9:1) Б н-пропанол-этиловый эфир уксус ной кислоты-вода (7:1:2) В н-бутанол-уксусная кислота-вод (3:1:1). 54 Для обнаружения хроматограмм ис-пользуют вначале ультрафиолетовый свет, потом реакцию со смесью хлор-толуйдин. В данном описании применяют следующие сокращения: арг - Z-аргинин гли - глицин про - Z-пролин кбо . - карбобёнзокси гмптА - триамид N,N,N,N) -гексаметилфосфорной кислотыНА - нафтиламид МеО - метокси ОпНП - п-нитрофенокси пНА - п-нитроанилид - 2-нафтиламид / Пример 1, N -кбо-гли-про-арг-пНА HCf а)кбо-арг-пНА НС, В круглодонной .трехгорлой колбе . емкостью 250 мл растворяют 16,0 г (47,0 ммоль) высушенного над пятиокисью фосфс а кбо-арг-ОН - HCt в 90 мл абсолютного ГМПТА без доступа влаги при К полученному раствору прибавляют при комнатной температуре сначала раствор 4,74 г (47,0 ммоль) тркзтиламина в 10 мл ГМПТА и затем 16/4 г (100 ммоль) п-нитрофенилизоцнаката (100%-ный избыток) по порциям. После выдержки в течение. 24 ч при ГМПТА болыаей частью отгоняют в эакууме. Продукт экстрагируют неоднократно 30%--ной уксусцой кислотой. Остаток выбрасываюТг Объединенные экстрак-пл уксусной кислоты для дальнейшей очистки на уравновешенную 30%-ной уксусной кислотой колонку Сефадеке Г 15 и продукт элюируют 30%-ной уксусной кислотой,Фракцию элюата,содержащую продукт,-которьгй 4О жет быть расщетшен обработкой трипсином с освобождение п-нитроанилика., подвергают С5П.-5К8 выморажяванлем.Полу™ чешзт 12,6 г аморфного порЛ; ка, который однороден в тонкослойной хромалограмме в. системе растворт-гтелей В. Вычислено %; С 51,б7 И 5,42,N 18,08, а 7,63 Сго Нг5Ыб05« Найдено, 51,29; Н 5,8; N 17,92| Ct 7,50 . б)N -кбо-гли-про-арг-пНА HCf 4,65 г (10 л.моль) соединения кбо- арг-рНА -HCt обрабатывают 40 гиот 2 н, НВг в ледяной уксусной кислоте без доступа влагая при перемеыквании 1 ч при 20°с. Пептидное произ эодное при этом растворяется с выделением COj. Реакционный раствор при сильном перемейшвании прибавляют по каплям к 250 МП абсолютного эфира, в осадок выпадает 2 НВг) Н-арг ПНА,Осадок отфильтровывают, прозывают абсолютным эфиром (4x100 мл) ДЛИ улаления образующегося в качестве побочного продукта бен зил бромида , а также избытка НВг и уксусной кислоты. Продукт сушат в вакууме над пластинками NaOH, выход количественный. Сухо Х21Шг) . Н-арг-рНА растворяют в 25 м диметилформамида. К охлажденному до -10 С раств ору прибавляют 1,40 мл (10 ммаль) триэтиламина. Образуювдй ся осадок триэтиламина-НВг отфильтровываюту промывают небольшим количеством холодного диметилформамида. Фильтрат охлаждают до -10 С и приба ляют к нему 4,70 г (11 ммоль) кбо-гли-про-ОпНП. Через несколько часо температура реакционного раствора поднимается до 20С. Раствор вновь охлаждают до и буферируют 0,35 мл (2,5 ммоль) триэтиламина. Еще через 16 ч прибавляют 0,35, мл гриэтиламинапри -10°С. Спустя 24 ч реакционный раствор концентрируют в вакууме досуха. Остаток растворяют 50 мл метанола. После прибавления 0,8 мл (10 ммоль) концентрированной соляной кислоты раствор упариваиот досуха в вакууме при 20°С. Эту операцию повторяют три раза с целью пе ревода гидробромида трипептида в ги рохлорид. Сырой гидрохлорид трипепт да растворяют в 50 мл метанола и предварительно очищают при помощи гель-фильтрации через уравновешенную колонку с Сефадекс ЛХ-20. Для дальнейшей очистки концентрируют в вакууме ту фракцию метанола, котора содержит продукт, поддающийся расще лению обработкой трипсином с освобождением п-нитроанилина. Остаток растворяют в 30%-ной уксусной кисло те. Раствор чистят гель-фильтрацией на уравновоиенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15 Фракций элюата, содержащую продукт, поддающийся расщеплению трипсином с освобождением п-нитроанилина, после прибавления 0,80 мл (Ю ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. Получают 3,64 г (58,8 % от теоретического) аморфного Легкого порошка, который однороден в тонкослойнойхрома тограмме в системе растворителей В. Вычислено,%: С 52,38; Н 5,70; N 18,10 Cf 5,73 . Найдено,%: С 52,09 Н 5,83; N 18,33; се 5,75. Анализ аминокислот дает ожидаекыё аминокислоты в правильном соотношении : арг 0,96; гли 1,00; про 0,96. Пример 2. Н-гли-про-арг-пНА 2НСе. 61,91 г (0,1 моль) полученного по примеру 1 соединения N -кбст -гли-про-арг-пНЛ НСЕ без доступа вла ги обрабатывает 300 мл Зн.соляной 656 . к и ел рты в л ед я Н ой у к су с н ой кислоте с переманиванием в течение 2 ч При . Пептидное производное при этом растворяется с выделением СОд. Реакционный раствор при сильном перемешивании прибавляют, по каплям к 2 л абсолютного эфира, в осадок выпадает Н-гли-про-арг-пНА 2HCt в виде хлопьев. Осадок отделяют и прозывают аб;солютным эфиром (4x500 мл) с целью удаления образовавшегося в качестве :Продукта расщепления бензилхлорида и избытка соляной и уксусной кислот. |Осадок сушат в вакууме над пластинами NaOH, получают деблокированный продукт с количественным выходом. Для дальнейшей очистки растворяют высушенный продукт в 900 мл 30%-ной уксусной кислоты. Раствор чистят путем гель-фильтрации на уравновешенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г 15 При этом разделяют элюат уксусной кислоты ма две фракции, обе могут быть расщеплены обработкой трипсином с освобЬждением п-нитроанилина. Главная фракция содержит желаемый продукт, а побочная фракция - исходный материал. После прибавления 8 мл (0,1 моль) концентрированной соляной кислоты к главной фракции ее. сушат вымораживанием. По-лучают 43,5 г (83,4 % от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. Вычислено,%: С 43,77 и 5,-оС; N 21,49 се 13,60 - С (9 Изо NJ OsCf. Найдено,%: С 43,3В; Н 5,88; N 21,72; се 13,41 . Анализ аминокислот дает ожидаемьле аминокислоты в правильном соотнаиении:арг 0,95-гли 1,00-про 0,94. , -Пример 3. N -2-фенилаиетил-гли-про-арг-пНА НСС . 2,09 г (4 ммоль) получень ого согласно примеру 2 н-гли-про арг-пНЛ- нй растворяют в 25 мл диметилформамида. После охлаждения до -10°с прибавляют 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и непосредственно после этого 1,13 г (4,4 ммоль) п-нитрофекклоБОГО фира фенилуксусной кислоты (т.шт. 61,5-62с). Реакционный проукт перерабатывают дальше, как описано в примере 1. Очистка: гель-фильтрация на уравноветиенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15. Фракцию элюата уксусной кислоты, которая может быть расщеплена обработкой трипсином с освобождением п-нитроа илииа, после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. Выход: 1.,99 г (82,5% от теоретиеского) аморфного поралк. .котог-ь й 7 однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В, Вычислено,%: С 53,77; Н 5,85; N 18,58; се 5,88 Cj, Hjj NjOgCL . Найдено,%: С 54,06 Н 5,68; N 18,83; С1 5,79, . Анализ аминокислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотношении:арг 0,99 - гли 1,00 - про 0,87. , Пример 4. N -3-фенилпропионил-гли-про-арг-пНА НС{. 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг пНА 2нсЕ растворяют в 25 мл диметилформамида После охлаждения до -Юс прибавляю 555.мкл (4 ммоль) триэтиламина и не посредственно после этого 1,19 г (4,4 ммоль) п-нитрофенилового эфира 3-фенил-пропионовой кислоты(т.пл.9 98,5°с). Продукт реакции обрабатывают дальше согласно примеру 1. Очистка: гель-фильтра1-1,йя на урав новешенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс. Г-15- . Ту фракцию элюата уксусной кислоты, ко торая может быть расщеплена трипсином с выделением п-нитроанилина, по ле прибавл.ения 320 мкл (4 ммоль) ко центрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. Выход 2,06 г (83,5% от теоретического) аморфного йорошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. / Вычислено,%: С 54,50; Н 6,04; N 18,16; се 5,75 с;« Нз7 , : Найдено,%: С 54,25; Н 5,98; N 18,29; Cf 5,63 Анализ аминоАислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотношении:арг 1,02 - гли 1,0 - про 0,98. Пример 5. -циклогексил карбонил-гли-про-арг-пНА HCt. 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНА 2HCt растворяют в 25 мл диметилформамид После охлаждения до -10°С прибавляю 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и н посредственно после этого 1,10 г (4,4 ммоль) п-нитрофенйлового эфир циклогексилкарбоновой кислоты (т.пл. 49-50 С). Продукт реакции п рерабатывают дальше согласно приме ру 1.. Очистка: гель-фильтрация на ура новояенной 30%-ной уксусной кислот колонке с Сефадекс Г-15 . . Фракц злюата уксусной кислоты, которая м жет быть расщеплена обработкой три сином с освобождением п-нитроанили после прибавления 320 мкл (4 ммоль концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. 58 Выход: 1,87 г (78,6% от теоретического) аморфного пораака, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В, В.1числено,%: С 52,47; Н 6,61: N 18,83; се 5,97 c eHjgNaOjCC. Найдено,%: С 52,70; Н 6,72; N 19,03; С 5,83. Анализ аминокислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотнсшёарг 0,96 - гли 1,00 - про 0,96. Пример 6 . -каприлоил-гли-про-арг-пНА НС . 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНАп 2НСГ растворяют в 25 мл диметилформамида. После охлаждения до прибавляют 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и непосредственно после этого 1,17 г (4,4 ммоль) п-нитр.офенилового эфира каприловой кислоты. Реакционный продукт перерабатывают дальше согласно, примеру 1. Очистка: гель-фильтрация на уравновеизенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15. Фракцию элюата уксусной кислоты, которая может быть расщеплена путем обработки трипсином е освобождением п-нитроанилина, после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. Выход: 1,99 г (81,4% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. вычислено,%: С 53-,06;Н 7,09; N 18,34; се 5,80 , .Ci7 Hoj NjOeCf, Найдено,%г С 52,84; Н 7,15; N 18,58; се 5,73. Анализ аминокислот дает ожидаемае аминокислоты в правильном соотношении : арг 0,95 -гли 1,00 -про 0,99. Пример 7. N. -тозил-гли-про-арг-пНА HCf. 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНА 2НС растворяют в 25 мл диметилформамида. После охлаждения до прибавляют 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и неЙосредственно после этого 840 мг (4,4 моль) хлорангидрида п-толуолсульфоновой кислоты (тозилхлорида) (т.пл. 67-79 0). Продукт реакции перерабатывают согласно приме- РУ 1./ Очистка; гель-фильтрация на уравновешенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15. фракцию элюата, содержащую продукт, который может быть расщеплен обработкой трипсином с освобождением п-нитроанилина, после- прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты 3 подвергают сушке выморажипаиием. Вы ход: 2,17 г (84,9% от теоретическог аморфного пораика, который однороде в тонкослойной хроматограмме в сист ме растворителей В. Вычислено,%: С 48,86; Н 5,52; N 17,53; S 5,02; СЕ 5,55 Сге Нз5 NeO,sa. Найдено,: С 48,50; Н 5,61; N 17,73; S 5,19; СЕ 5,49. Анализ аминокислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотнесен арг 0,99 - гли 1,00 - про 0,93. ; Пример 8.N -бензолсульфо нил-гли-про-арг-пНА НС. 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНА 2НС( растворяют в 25 мл диметилформамида После охлаждения до -Юс прибавляю 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и нё посредственно после этого 780 мг (4,42 ммоль) хлорангидрида бензблсульфоновой кислоты (т.пл. 16-17 С) Продукт реакции перерабатывают даль ше согласно примеру 1. Очистка; гель-фильтрация на уравновешенной 30%-ной уксусной кислото колонке с Сефадекс. Г-15, Фракцию элюата, содержащую продукт, который может быть расщеплен обработкой трипсином с освобождением п-нитроанилина, после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вы морс1живанием. Выход: 1,95 г (78% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. . Вычислено,%: С 48,03; Н 5,32; N 17,93; S 5,13; С 5,67 Сг5 Нзз NsO,SCe. Найдено,%: С 47,69; Н 5,40; N 18,11; S 5,06; се 5,61, Анализ аминокислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотношении:арг 1,01 - гли 1,00 - про 0,96. Пример 9. N -метансульфонил-гли-про-арг-пНА- HCf, 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНА 2ttCt растворяют в 25 мл диметилформамида ПосЛе охлаждения до прибавляю 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и не посредственно после этого 345 мкл (4,44 ммОль) хлорангидрида метансульфоновой Кислоты, Продукт реакции перерабатывают дальше согласно примеру 1. Очистка: гель-фильтрация на урав новешенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15, Фракцию элюата, содержащую продукт, который может быть расщеплен обработкой трип сином с освобождением п-нитроанилин после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты, 16-;to подг ;ргают сучине вымзрлживанием, . 1,70 т (7Г,. от теорстнческого) аморфного пораика, кото1л-;Я олмородеи в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. Вычислено,%: С 42,66; Н 5,55; N 19,90; S 5,70; Cf 6,30 CjoH NjO,Ce. Найдено,: С 42,88; Н 5,63; N .20,08; S 5,62; CI 6,21 . Анализ аминокислот дает ожидаемэ1е аминокислоты в правильном соотноглеарг 0,99 - гли 1,00 - про 0,96, Пример 10. N -2-нафталиксульфонил-гли-про-арг-пНА ЕС(. 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНА 2НСР растворяют в 25 мл диметилформамида, |после охлаждения до прибавляют 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и непосредственно после этого 1,0 г (4,41 ммаль) хлорангидрида нафталип-2-сульфоновой кислоты (т,Ш1. 74 76°С). Продукт реакции обрабатывают дальше согласно примеру 1. Очистка: гель-фильтрация через уравновешенную 30%-ной уксусной кислотой колонку с Сефадекс Г-15, Фракцию элйата уксусной кислоты, которую можно расщепить обработкой трипсином с освобождениемп-нитроанилина, после прибавления 320 мкл (4 ммапь) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. Выход: 1,81 г (66,8% от теоретического.) аморфно т- порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. вычислено,%: С 51,59; Н 5,23; N 16,60; S 4,75; сЕ 5,25 Cj9 Н55 NgOgSCf. Найдено,%: С 51,88; Н 5,19; N 16,75; S 4,62; С 5,12. Анализ аминокислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном cooTHOuieнии: , арг 1.,02 - гли 1,00-про 0,98, Пример 11. N -изобутилоксикарбонил-гли-про-арг-пНА НСЕ,. 2,09 г (4 ммоль) полученного по примеру 2 н-гли-про-арг-пНа 2НСf растворяют в 25 МП диметилформамида. После охлаждения до -Юс пркбавлянот 555 мкл (4 ммоль) триэтиламина и непосредственно после этого 650 мкл (5,0 ммоля) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты. Реакционный продукт перерабатывают дальше согласно примеру 1. .Очистка: гель-фильтрация Ч1ерез уравновешенную 30%.-ной уксусной кисотой колонку с Сефадекс Г-15, Ту фракцию элюата уксусной кислоты, которая может быть расщеплена обработкой трипсином с освобождением п-нитроанилина, после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке BtJмораживанием. Выход: 1,71 г (73,1% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. Вычислено, %: С 49:, 27; Н 6,37; 19, 15; C.f б, Об Сгч H37N,o,cr. ;; : Найдено,%: С 49,06; Н 6,42; 19,33; Cf 5,98. Анализ аминокислрт дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотношении : арг 1,01 - гли 1,00 - про 0,94. и м е р 12. N -кбо-гли-про -арг-2-НА HCt а) N -кбо-арг (N0 ) -2-ЙТТ 3,53 г (10 ммоль) хорошо высушенного кбо-арг(NOa)-ОН без доступа вла ги растворяют в 150 мл смеси тетр гидрофурана и диметилформамида (3;1) После охлаждения до к раствору прибавляют 1,39 мл (10 ммояь) триэтиламина и потом по каплям в течение 15 мин раствор 1,35 г (10 ммоль изобутилового эфира хлормураввиной кислоты в 20 мл тетрагидрофурана, температуру поддерживают при -10- . К полученному раствору прибавляют по каплям раствор 1,72 г (12 ммоль) ;8-нафтиламина в 15 мл тетрагидрофурана, причем соблюдают указанную температуру. Реакционную смесь оставляют стоять в течение 24 ч при комнатной температуре. Пос ле отгонки растворителя .в вакууме остаток обрабатывают три раз.а подряд Дистиллированной водой, три раза 5%-ным раствором едкого натра и опять три раза дистиллированной водой . После сушки в вакууме растворяют сырой продукт в метаноле и рас вор хроматографируют через уравнове шенную метанолом колонку с Сефадекс ЛХ-20. Из одной фракции элюа получают 3,75 г кристаллического со динения № -кбо-арг(НО)-2-НА (78,4 от теоретического), т.пл. 173-174,5 кЬторое однородно в тонкослойной хр матограмме в системах растворителей А и Б. ..:...,-:-.. .-. ..... . . -: -... . :.. .. . . Вычислено,%: С 60,24; Н 5,48 16,72 Найдено,%. С 60,82; Н 5,63; . N 17,48 б) Н-арг-2-НА-НСЕ. 957мг (2 ммоль) N -K6o-apr(NOj( -2НА помещают в J)eaкциoнный сосуд гтарат Сакакйвара, куЖ Тс6н1:Шсируют 15 мл высушенного газообразног фтористого водорода. Смесь переметии вают 1 ч при , при этом отщепляю 1ШтрозаЩт ю Wyffily арг ар Собензоксигруппу. Сконденсированный газообразный фтористый водород отго няют в вакууме из реакционной смеси 6512 и остаток растворяют в диметилформамиде.Для перевода производного аминокислоты в солянокислую соль прибавляют 0,5 мл (примерно 6 ммоль) концентрированнрй соляной кислоты и раствор упаривают досуха. После двухкратного повторения этой процедуры остаток растворяют в 50 мл 40%-ной уксусной кислоты. Раствор вносят в уравновешенную 30%-ной уксусной кислотой колонку с Сефадекс Г-15 и продукт элюируют 30%-н.ой уксусной кислотой. Ту фракцию элюата, которая может быть расщеплена обработкой трипсином с освобождением п-нитроанилина, после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты, подвергают сушке вымораживанием. Выход: 473 мг (63,5% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроМатограмме в системе раетворителей В. Вычислено,%: С 51,62; Н 6,23; N 18,81; с 19,05 С,е HisNsOCti Найдено, %: С 51,82, Н 6,18; N 17,081СГ 18,75 N -кбо-гли-про-арг-2-НА HCt. 372 мг (1ммоль) Н-арг-2НА HCfcorласно примеру 1 подвергают взаимодействию с 470 мг (1,1 ммоль) кбо-гли-про-ОпНП, получая соединение (12). Очистка: гель-фильтрация на уравновешенной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15. Фракцию элюата, которая может быть расщеплена обработкой трипсином с освобождением jB -нафтиламина, после прибавления 80 мкл (1 ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сугике вымораживанием. Выход . 425 мг (68,1% от тeopeтичeckoгo) аморфного порошка, котоЕ 1й однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. Вычислено,%: С 59,65; Н 6,14,N J5,71; се 5,68 Сз, Нз4 N,OjCt Найдено,%: С 60,11; Н 6,25; N 16,07; Cf 5,59; АНалиЭ аминокислот дает oжидae fJe аминокислотыв правильном соотношении : арг 0,98 - гли If00 - про 0,97. Пример 13. N -тознл-глипро-арг-2-НА -HCt. 625 мг (1 ммоль) соединения (пример 12) деблокируют согласно примеру 2 и растворгаот в 8 мл диметилформамида. После охлаждения до прибавляют 140 мкл (1 ммоль) триэтиламийа и нёпосредйтвенно после этого 210 мг (1,1 миоль) хлорангидрида п-толуолсульфоновой кислоты (т.пл.67- , ). Реакционный продукт перераба бывают дальше по примеру 1. Очистка: гель-фильтрация на уравновшденной 30%-ной уксусной кислотой колонке с.Сефадекс Г-15. Ту фракцию элюата уксусной кислоты, которую можно расиепить отработкой трипсином с освобождением -нафтиламина, посл прибавления 80 мкл (1 ммоль) концент рированной соляной кислоты подвергаю сушке вымораживанием. Выход: 500 мг (77,6% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе раст ворителей В. Вычислено,%: С 55,93; Н 5,95; N 15,22; S 4,98; Ct 5,50 CjoH NjOjSCe Найдено,%: С 56,73; Н 5,86; N 15,48; S 5,07; Cf 5,39. Анализ ар нокислот дает ожидаемые аминокислоты в правильном соотношении : арг 0,95 - гли 1,00 - про 0,96. Пример 14. N -кбо-гли-про-арг-4-МеО-2-НА НСС а)N- -K6o-apr(NOj)-4-MeO-2-HA 3,53 г (10 ммоль) K6o-apr(NOj5)-OH соггасно примеру 12,а, подвергают взаимодействию с 2,17 г (12,5 ммоль) 4-метокси-2-нафтиламина и перерабатывают, как там указано. Очистка: гель-фильтрация на уравнозешенной метанолом колонке с Сефадекс ЛХ 20 Из одной фракции элюата получают 3,35 г (65,9% от теоретического) отчасти кристаллического соединения N -кбо-арг(ЫОг)-4-МеО-2-НА., которое однородно в тонкослойной хррматогргил ме в системах растворителей А и Б, Вычислеко,%: С 59,05; Н 5,55; N 16,23 CzsH aNeOj Найдено,%: С 59,18; Н 5,43; N 16,49 б)Н-арг-4-МеО-2-НА 2НС . 1,02 г (2 ммоль) соединения N -K6o-apr-(NO2 )-4-МеО-2-НА согласно примеру 12,6 подвергают взаимодейстВИЮ, получая соединение Н-арг-4-МеО-2-НА 2HCt. Очистка гель-фильтрация на уравновоиенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15. Ту ( цию элюата уксусной кислоты, которая может быть расщеплена обработкой трипсином с освобождением 4-метокси-2-нафтиламина, после прибавления 320 мкл (4 ммоль) концентрированной соляной кислоты подвергают сушке вымораживанием. Выход: 570 мг (71,0% от теоретического) аморфного порошка который однороден в тонкослойной хро матограммё в системе растворителей В Вычислено,%: С 50,88; Н 6,03; N 17,45; Ct 17,67 Сп Нгч NfCijCia Найдено,%: С 51,08; Н 5,98; N 17,75; Ct 17,55 в) N -кбо-гли-про-арг-4-МеО-2 НА нее . 402 мг (1 ммоль) соединения Н-арг -4-МеО-2-НА 2НСГсогласно примеру 1,6, подвергают, взаимодействию с 470м (1,1 ммоль) кбо-гли-про-ОпНП, получая соединение N -кбо-гли-про-арг-4-МеО-2-НА net . Очистка; гель.фильтрация на уравновешенной 30%-ной уксусной кислотой колонке с Сефадекс Г-15. Ту фракцию элюата уксусной кислоты, которая может быть расцеплена трипсином с освоЗождёкием 4 -метокси-2-нафтиламина, яосле прибавления 80 мкл (1ммоль) концентрированной соляной кислоты сушат вымораживанием. Выход: 493 мг (75,4% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе раст.ворителей В. Вычислено,: С 58,75; Н 6,16; N 14,90; Cf 5,72 С}гН.,оН,0«СЕ Найдено,%: С 59,01; Н 6,10; N 15,19; се 5,35. Анализ аминокислот дает ожидаемле аминокислоты в правильном соотношении арг 1,02 - гли 1,00 - про 0,95. Пример 15.N -тозил-гли-про-арг-4-МеО-2-НА НС. 655 мг (1 ммоль) полученного по примеру 14 соединения XIV деблокируют согласно примеру 2 и растворяют в 8 мл диметилфорйамида..После охлаждения до прибавляют 140 мкл (1 ммоль) тризтиламина и непосредственно после этого 210 мг (1,1 ммоль) хлорангидрида п-толуолсульфоновой кислоты. Продукт реакции перерабатывают дальше согласно примеру 1, Очистка: гель-фильтрация через ураановешенную 30%-ной уксусной кисло/ой колонку с Сефадекс Г-15 Ту ФРИКЦИЮ элюата уксусной кислоты, которую можно расщепить трипсином с огвобаждением 4-метокси-2-нафтилам .нз, после прибавления 80 мкл (1 ) концентрированной соляной ккслоты, сушат вымораживанием. Выход: 465 мг (69,0% от теоретического) аморфного порошка, который однороден в тонкослойной хроматограмме в системе растворителей В. Вычислено,%: С 55,22; Н 5,98; N 14,54; S 4,76; се 5,26 Cj, Н,о N,OGjCt Найдено,%: С 55,75; Н 6,01; 14,89; S 4,59; Ct 5,16 . Анализ аминокислот дает oжидae Ь e аминокислоты -в правильном сооткилеИИ:арг 0,98 - гли 1,00 - про 0,96Формула изобретения Способ получения пептидов общей формулы R -глицин-2-пралин-7,-аргииин-NH-B lHY,П) где R - водород, п-толуольная-,2-нафталин-, метан-или бек .-)15 .. нильная группа или ацильнаягруппа формулы V. :: ч;: ::,: - - :г.. - ,;. . --- /г-к - С(0)где R - алифатический углеводородный остаток с 1-7 атомами углерода , фенилалкиловый остаток с 1-3 атомами угле рода в алкильном остатке, циклогексиловый или аЛкилркси остаток с 1-5 атомами углерода в алкильном остат 0 ке, - 4-метокси-2-нафтиламид, п-нитроанилид, 2-нафтиламид, анион минеральной или орга нической кислоты, отличающийся тем, что соедийение формулы ,j аргинин-ОН HY, (2 где R - блокирующая i -аминогруппу защитная группа, Y : имеет значения, указанные ранее; подвергают взаимодействию с изоцианатом фор мулы--. ;- - О С N - (3 где значения R указаны в триамиде гексаметилфосфорной кислоты в присутствии одного эквивалента третичного органического основания, при KbMHaTHiirfl TeMniepatype, в без водной среде; полученное при этом соединение формулы R -Z аргинин-NH-R -HY(4 обрабатывают 2д. НВГ в ледяной уксусной или во трифторуксусной, или в безводной муравьиной кислоте, или газообразным хлористым йодородом в диоксане, в безводной среде при ком натной тететературе; полученный при этом продукт формулы - . H-Z арГИНИН-NH-R 2HY(5 обрабатывают в диметилформамиде зкви валентным ксхличеством третичного ор ганического основания при комнатной температуре и полученное при зтом соединение формулы Н -Z аргинин-NH-R -HY подвергают, взаимодействию с соедине нйем формулы R -глицин-Z-пpoлин-R 5 где R - активная сложноэфирная группа; R - имеет значения R, указанные ранее, или алкоксикарбонильная группа, алкильный остаток которой имеет, по крайней мере, один атом водорода у . -атома углерода и содержит до 10 атомов Углерода, полученное при этом соединение формулы R -Глицин 2-прапин-2-аргинин -NH-R.HY(8) обрабатывают, если ; 2н.НВГ в ледяной уксусной или трифторуксусной, или в безводной муравьиной кислоте, ИЛИ газообразным хлористым водородсм в диоксане в безводной среде при комнатной температуре, и полученное соединениеН -глицин-Z пролин-Z аргинин-NH-R.2HY, растворенное в диметилформамиде, при обработке эквивалентным количеством третичного органического основания при комнатной температуре переводят в соединение формулы Н -глицин-Z пролин-Z аргинин-NH-R -HY,(10) которое подвергают взаимодействию с соединением формулы R-R,(11) где значения R указаны ранее; R имеет те же значения, что и R, или означает хлор или бром, причем, если R - хлор или бром, то третичное органическое основание прменяют в количестве, эквивалентном количеству соединения (11), процесс ведут в диметилформамиде при температуре от -10 до 20С, Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1.М. Bodanrki, М.А. Ondetti. Peptide Synthesis , Jnfcersclence Publishers/ 1966, с. НО. 2.Там же, с. 163. 3.Э. Шредер, К. Любке. Пепти.цы, ч, 1,М.,Мир , 1967, с. 112.