Способ определения производных бис-( @ -хлорэтиламина) Советский патент 1983 года по МПК G01N31/08 

Изобретение относится к аналити ческой химии, а именно к способам анализа производных бис-1р-хлорэтил амина, и может быть использовано в заводских, контрольно-аналитических лабораториях и в аптеках . Известен способ определения произ водных. би5-(о- хлорэтил Ьамина путем обработки анализируемой пробы раствором 1-изониконил-изопропилгидр зина при рН 10-11 и 90-100°С Cl. Недостаток способа состоит в его относительно невысокой точности. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ определения производных бис-(-хлорэтил}-амина путем тонкослойной хроматографии анали- . зируемой пробы в смеси растворителей содержащей хлороформ, метанол с последующим проявлением хроматограммы реактивом Драгендорфа 2. Недостатком способа является его нелесективность, связанная с тем, что продукты его гидролиза дают аналогичную реакцию, и невысокая чувствительность (0,20-0,28 мг/мл ). Цель изобретения - повышение селективности и ч-увствительности способа. Поставленная цель достигается согласно способу определения производных бис- (ь-хлорэтил )-амина путем тонкослойной хроматографии анализируемой пробы в смеси растворителей н-бутиловый спирт, уксусная кислота и вода в соотношении 1-3:1:4-6, с п следующей обработкой хроматограммы 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридином при 99-100°С и рН 11-12, в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды в соотношении (1-3) :1: (4-6 ), в качестве реагента используют 2-метил-З-окси-4 , 5-ди-(оксиметил j-пиридин и .обработку ведут при 99-100°С и рН 11-12 Пример. Определение сарко лизина. Реактивы и растворители: 5% раствор 2-метил-3-окси-4,5 ди-(.оксимет -пиридина гидрохлорида, 20%-ный рас твор едкого натра, смесь н-бутилово спирта,. уксусной-кислоты, воды в со отношении 2:1:5, ацетон, 1%-ные рас творы сарколизина, хлорбутина, допа асалия, циклофосфана в ацетоне. На линию старта хроматографическ бумаги, диаметром 8 см на расстояни 23 см один от другого наносят 0,5 м 1%-ного раствора исследуемых препар тов. Выс т1 ивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, про ходящего через центр круговой хрома тограммы. Через 10-15 мин хроматограмму вы нимают из камеры, отмечают положание растворителя и подсушивают. Высушеннь.е хроматограммы просматривают в УФ-свете и отмечают положение пятен, затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20%-ный раствор едкого натра на 20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100°С и отмечают положение пятна. На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения им, что соответствует глюконовому альдегиду. Измеряют на спектрометре СФ-4Л оптическую плотность им. П р и м е р 2. Определение хлорбутина . Реактивы и растворители: 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )пиридина гидрохлорида, 20%-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон, 1%-ные растворы сарколизинаJ хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне. На, линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят 0,5 мл 1%-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика , проходяи.его через центр круговой хроматограммы. Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы.просматривают в УФ-свете и отмечают положение пятен, а затем, проявляют путем последовательного п.огружения в 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил -пиридина гидрохлорида и 20%-ный раствор едкого натра на 20-30 с. Хроматогра1 1мы высушивают в сушильном шкафу при и отмечают положение пятна. На хроматограмме имеется пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет .полосу погло-. щения сДтс1.ЗбО нм, что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность при .нм. П р и м е р 3. Определение допана. Реактивы и раств.орители: 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(окси метил.Ьпиридина гидрохлорида, 20%-ный. раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон, 1%-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне. На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстояНИИ 23 см один от другого наносят 0,5 мл 1%-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы просматривают в УФ-свете и отмечают положание пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ны раствор 2-метил-3-окси-4., 5-ди-{оксиметил -пиридина гидрохлорида и 20%-ный раствор едкого натра на 2030 с.Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100°С и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения нм, что соотГП Сл X

ветстбует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность приА 360 нм.

П р и м е р 4. Определение асалея

Реактивы и растворители: 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксимети;. )-пиридина гидрохлорида , раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5,ацетон, 1%-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.

На линию старта хроматографичес- кой бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят 0,5 мл 1%-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и-в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.

. Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. ВысушенМые хроматограммы.просматривают в УФсвете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(ЬксиметилJ-пиридина гидрохлорида и 20%-ный раствор едкого натра на 20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100°С и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятн наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полбсу поглощения им, что соответствует

глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность нм.

Пример sT Определение циклофосфана.

Реактивы и растворители 5%-ный раствор -2-метил-3-окон-4,5-ди-(окси метил J-пиридина гидрохлорида,20%-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон,1%-ны растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне .

На линию старта хроматографическо бумаги диаметром 8 см на растоянии 2-3 см один от другого наносят 0,5 м 1%-ного раствора исследуемых препаратов . Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой xpoMaTorpaNw.Kj.

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы просматривают в УФ-свете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20%-ный раствор едкого натра на 2030 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения с 360 им, что соответствует глютаконовому альдегиду.. Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность при

Vax 360 нм.

Результаты спектрофотометрического определения алкилирующих препаратов приведены в табл. 1.

Данные чувствительности реакций приведены в табл. 2.

Сравнительные данные количественного содержания противоопухолевых препаратов и продуктов из гидролиза при выборе оптимального соотношения растворителей приведены в табл, 3.

Использование предлагаемого способа анализа препаратов противоопухолевого назначения по сравнению с известным способом обладает большей селективностью и чувствительностью. 51027608 1. . Препарат Сарколизин Хлорбутин Допан Асалей Циклофосфан ПрепаратЧувствитель известному Сарколизин0,20 Хлорбутил0,18 Допан0,17 Асалей0,28 Циклофосфан0,26 Количественное препарат °°-«° -1 т 7е Ц1с SopSeактивного продуквещества та гидролиза

1:1:6

91,7

1:1:6 90,9

1:1:6 92,7

1:1:6 93,2

1:1:6 90,5

16,4+7,3% 98,7

2:1:5 97,9 2:1:5 99,1

2:1:5 99,0 2:1:5

80,52,734,517,8

90.15,339,421,8 91,43,840,218,5 92/15,242,415,1 91,46,245,311,4

7,8+8,2%49,5+10,6%

91.2.7,743,954,2 90,08,253,746,1 88,811,059,340,2 86,212,260,639,1 ,6 ОГаблица 1 Содержание, % 98,73 97,97 99,13 99,02 98,15 Т а б л и ц а 2 ность, по способу, мг/мп предлагаемому 0,033 0,040 0,010 0,084 0,025 Таблица 3 содержание при о истекшим оро„см годности активноНпродук- активно- продук- го ве- та гид-- го веще- т.а гидщества ролиза ства ролиза

Продолжение, табл. 3

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БИС- (/i-ХЛОРЭТИЛ ;-АМИНА путем тонкослойной хроматографии в смеси растворителей с последующей обработкой полученной хроматограммы химическим реагентом, отличают ийс я тем, что, с целью повышения селективности и чувствительности способа, в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды в соотношении ( 1:

Циклофосфан 2:1:5

98,1

91,2

53,5

43,2

7,5