Способ количественного определения солей нуклеозидфосфорных кислот Советский патент 1977 года по МПК G01N31/16 

(54) СПОСОБ КОЛИЧЬ-СТВЕННОГО ОПРЕ ОЕЛЕНИЯ СОЛЕЙ НУКЛЕОЗИДФОСФОРНЫХ КИСЛОТ

ворение достигается без нагревания и растепления нуклеотицов.

Растворение и дифференцирование обеспечиваются только в следующих соотношенияхметилцеллозольв/ диметилсульфоксид,: равное 1:2-10 по объему. При более низких соотнопгениях не достигается полное растворение определяемого образца и продуктов титрования. Разложение полностью при более высок х соотношениях не проводится и не обеспечивается дифференцирование.

Способ заключается в следующем. Навеску определяемого образца (0,01-О,ОЗг) в ячейке титрования обрабатывают с 1-2 мл хлорной кислоты в метилцеллозольве и 2 мл диметилсульфоксида. Раствор перемешивают до полного растворения навески. Затем в раствор добавляют еще 2-8 мл диметилсульфоксида, погружают в раствор пару элек Тродов (например, стеклянный-каломельный) и проводят потенциометрическое титрование стандартным раствором сильного основания, например гидроокисью калия, гидроокисью тетраэтйпаммония в спирте. На кривых потенциометрического титрования появляются 3-4 скачка потенциала. Первый скачок всеГ да соответствует оттитрованао остатка хлорной кислоты, а последующие - дифференцированному титрованию кислотных групп нуклеозидфосфорных кислот. Ошибка ± .. Пример. Определение смеси пикалиевой соли аденозин-5 -монофосфорной кислоты с аденозин-5 -монофосфорной кислотой.

Навеску образца величиной 0,О2О75 г обрабатывают точно 1,ОО мл 0,1233 н, хлоной кислоты в метилцеллозольве, добавляют 2 мл диметилсульфоксида (х ч) и раствор перемешивают в течение 5-7 мин до полного раствбрейия навески. Затем добавляют еще 5 мл диметилсульфоксида и раствор потенциометрически титруют 0,15О7 н.раствором гидроокиси калия в этаноле. На кривой титрования появляются 3 скачки потенциала. Первый соответствует оттитрованию непрореагировавшего остатка хлорной кислоты. По сривой находят, что при этом израсходовано 0,45 мл титранта. По формуле

X ( - 0,45 (мл) находят,

что О,37 мл титранта соответствуют определению динатриевой соли нуклеотида (мол.в. 423), т.е. содержание нуклеотида в смеси 5%. Последукнцие два скачка соответствуют последовательному оттитрованию двух фосфорнокислых групп, причем на титрование обеих израсходуются одинаковые объемы титранта - по 0,39 мл. Истользуя объем, прошедший на титрование

ЛИЯ, определяют, что на титрование каждой фосфорноки:;лой группы израсходуются 0,17 мл титранта. По известной формуле (мол.в. 347), найдено, что содержание аденозин-5 - монофосфорной кислоты в смеси составляет 42,7%.

Пример 2. Определение смеси динатриевой соли цитидин-2, З-монофосфорной кислоты с гидроокисью натрия.

Навеску образца величиной 0,02241 г

обрабатывают 2,00 мл 0,0995 н.хлорной кислоты в метилпеллозольве, добавляют 2 мл диметилсульфоксида и перемешиваюа раствор в течение 5-7 мин до полного растворения. Затем в раствор погружают

пару электродоВр цобав,пяют eiiie 4 NS.T пиметиле ульф оке и да и тятругст Oj 1825 н.раст ворБК5 гидроокисн тетраэтилак;1 Ю11Мя в наопропаноле. На кривой тнтровання появляютея 3 скачка потенциала. По второму и третьему сй;ачкаМ; кс-торые соответствуют оттитрованию qSocфopнoкиcлыx т-рупп- опргзпеляют одинаковый раехоа тнтраита --0,28-.;л Иехоц из этого объема по извеетной формуле, вычисляют еодержанис о 1рецеляемой

еоли нуклеотица - 83,7%, объем титранта, пошещинн на титрование оетатка хлорной: киелоты (0,О7 мл) и объемы, израсхоцовапмь:е на тятровампе oGe-fx фосфор9(

нокиелых групп по формуле Х- п 0,08 -0,28-2, определяК1Т; что на определение гидроокиеи натрия расходукггся 0,45 мл титранта, По известной формуле вычисляют содержание гицроокиси натрия в смеся - 14,6.,.

П р н м е р 3, Опререление смеси мононатриевой соли урицнн-Е; З -цнклофосфорной кисЛОты и аннатри.звой соли уриаин -б - г.;онофосфорной кислоты.

Навеску образца 0,02563 г обрабатывают 1,ООкш 0,211 н. и раствора хлорной кислоты в метилцеллюлозальве и 2 мл циметалсульфоксида (хч). Перемешивают (5-1О мнн) цо полного растворения образца, затем добавляют еще 8 мл циметилсулт фоксица, погружают электроды и осуществляют пот-епцнометрическое титрование ОД825 н.раствором .гидроокиси тетраметиламмон1 я в изоиропаноле. На кривой титрования появляются 3 скачка поте П1иала: первый соответствует оттитрованию остатка хлорной кислоты и соответствует 0,53 мЛг второй соответствует титрованию сильных фосфорных грутп обоюс нуклеотидов и составляет 0,40 мл, третий совместному титрованию одной фосфорнокислой группы монофосфорной кислоты и кислотных групп пиримишгаового гетероцикла .х нуклеотицов и составляет 0,64 мл. Но оаз ности объемов титранта, израсхопованных

на -.второй и третий скачки пот-енциала НРЙдено, что на титройание ни штриевой соли урицин-б -монофосфорной кислоты и расходовано 0,23 мл титранта, содержание этой соли вычисляют по известной формуле и составляет 6О,2%, По разности объемов 0,40- j Результаты определения см 0,23 мл находят, что на титрование другой соли нуклеотиоа расходуется 0,17 мл титранта. Вычисляют содержание натриевой соли уридин-2 ,3-циклофосфорной кислоты в сМеси - 39,6%. сей представлены в таблице.

В-3 , 5.-ЦФ калиевая соль + У-2 , З-ЦФ калиевая соль

-МФ цикалиевая соль + + КОН

МФ цинатриевая соль + - туанозин

Т-2 (3 )-МФ цикалиевая

1:7 соль + КОН

A-S ТФ тетранатриевая

1:8 соль+аденозин

Примечание : Л-5 -МФ -аденозин-5 -монофосфорная кислота, А-2 ,3 - ЦФ-ааенозин-2,3-цикяофосфорная кислота, У-5 -МФ-уродинмонофосфорная кислота, У-2 ,3-11Ф-уриаин-2, зихиклофосфорная кислота, Т-2(З)-МФ тимидин-2 (з)-монофосфорная кислота, Г-5 -МФ-гуанозин-5-монофосфорная кислота, -ТФ-аденознн-5 -трифосфорная кислота.

Формула изобретенияботки пробы анализируемого вещества изСпособ количественного опрецеления со-рованием полученной смеси основным титлей нуклеозндфосфориых кислш- путем Ьбра- рантом в среде органического растворителст.

бытком хлорной кислоты с последующим тит78

отличающийся тем, что, с целью1. Губен-Вейпь, Методы органическ

расширенна области применения способа, &химии. М,, Химия , 1967, с. 910-9И качестве органического растворителя используют смесь метилцеллоаольва и диметилсуль2. Крешков А. Ц Быкова Л, Н. и

фоксица, i вэятых в соотношении 1:2-10.jКаэярян Н, К. Кислотно-основное титроваИсточннки информации, принэтые во вни-ние в неводных растворах. М,, Химия,

манне при экспертизе:1967, с. 141-159.

577459