Способ получения протеаз Советский патент 1978 года по МПК C12D13/10 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕАЗ

Изобретение относится к производству ферментных препаратов и может быть П1 1менено в медицине и микробиологической промышлешюста.

Известен способ получения протеолитического фермента, обладающего казеииолитическим и фибри нолитическим действием, предусматривающий совместное культивирование на питательной среде микроорганизмов Act inomyces двух видов rimosus и Actinomyces violaceus активного и неактивного в отношении образования протеаз с последующим выделением их из культуральиой жидкости.

Недостатком шособа является то, что выход целевого продукта недостаточно высок.

Целью изобретения является повьпиение выхода протеаз, обладающих казеинолитичесжим, фибринолитичгским и тромболитическим действием.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве активного в отношении образования протеаз микроорга1шзма ишользуют культуру плесневых грибов Aspergithjs Kanagawaensis, а в качестве неактивного - культуру плесневых грибов Aspergit4iswentii.npi зтом микроорганизмы вносят в питательную среду в равных количествах, а выращивание их проводят при 28-30° С в течение 48-72 час.

Способ поясняется конкретным примером его осуществления.

П р и М е р. В известную синтетическую среду (глюкоза - 0,36%, сахароза - 0,72%, KNOa - 0,2%, M9SO4 - 0,123%, К2НРО4 - 137%)посда стерилизации вносят 5% по объему двухсуточного жидкого посевного материала Aspergilhis kanagaewaensis, выращенного на жидком 4 бал. сусле и 5% по объему двух-трехсуточного жидкого вегетативного матертала Aspergillus wentu, выращенного на иотестной синтетической среде. Культивирование смепинной культуры осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со 100 мп среды на качалках при 28°С в течение 56 часов. По истечении зтого времени культуралыая жидкость содержит 1160 усл. ед/мл фибринолитической активности и растворяет тромб за 3 часа. Казеинолитическая ак;тивность культуральной жидкости равна 9,8 каз. ед/м Дня вьвделения фермента клетки отделяют от культуральной жидкости центрифугированием и провоР1ЯТ высаливание фермента серисжислым аммонием ярт насьвдешш 0,7 в течение 32 часов аря 4° С. Выпавший осадок растворяют в воде, диализуют в течение 24 часов при 4° С против 0,01 М трис-буфеjga рН 7,4 с 0,005 М CaClj или CoClj, после чего

прово 1ят лиоффильное высушивание и получают препарат, обладающий отецифической активностью J120 ед/мг белка.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в смешанной культуре грибов происходит образование протеаз с казекнотштическим действием в 3 раза больше, а с фибрмнолитическим и тромболитическим действием в 2-2,5 раза больше, чем в чистой культуре Aspergillus kanagaewaen sis. Увеличение ферментативной активности сопровождается столь же интенсивным в 2-2,5 раза воз растанием продуцирующей способности клеток.

Формула изобретения

Оюсоб получения протеаз путем совместного вырашивания на питательной среде двух видов микроорганизмов - активного и неактивного в отношении образования протеаз и их последующего выделения из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве активного в отношении образова1шя протеаз микроорганизма используют культуру плесневых грибов Aspergillus kanagaewaensis, а в качестве неактивного - культуру плесневых грибов Aspergillus wentii, при зтом микроорганизмы вносят в питательную среду в равных количествах.

Источники информации, принятые во внимание

5 при экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР № 436086, кл. С 12 D 13/10, 1974.