Способ получения нуклеозид-5"-дифосфатов Советский патент 1977 года по МПК C07H19/10 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИЯ-5-.ДИФОСФАТОВ

I

Изобретение относится к усовершенствованию способа получения соединений, которые применяют в биохимии при исследовании синтеза нуклеиновых кислот и при использовании ферментативных систем.

Известен способ получения нуклеозид-5-дифосфатов путем превращения нуклеизид-5- ч монофосфатов в бопее реакционно-способ- ные нукаеозид-5-фосфоморфолиды, обработки их трибутиламмониевой солью ортофосфорной кислоты в диметилсульфоксидё и последующей очистки целевого продукта хроматографией на анионообменных смолах. Нуклеозид-5-фосфоморфолиды получают при температуре 8О-90°С в течение 4 час взаимодействием нуклеозид-5-монофосфатов и морфопина в среде дицикпогексилкарбодиимида, воды и трету-бутилового спирта.

К основным недостаткам известного способа относится проведение процесса попучения нуклеозид-5-фосфомо1эфолидов при температуре 8О-90 С, а также использование на этой стадии в качестве конденсирующего агента дорогостоящего дициклогексилкарбодиимида, обладающего сильно выраженными

аллергенными свойствами-.-и вследствие этого требующего применения специальных средств защиты.

Для упрощения процесса предлагается способ, по которому в реакцикэ с морфопино вводят активное мсномерное производное нуклеозид-5-монофосфата. Его получают путем взаимодействия аципированного нукпеозид-5-монофосфата с -п-гопуолсупьфохлоридом в смеси пиридина и ацетонитрила при комнатной температуре. Добавление к реакционной смеси lO-кратного избытка морфолина приводит к количественному образованию нуклеозид-5-фосфоморфолида. Последующее получение иуклеозид-5-дифосфата проводят известным способом.

Пример. Синтез уридин-5-диофосфат

1 г 3-2-О-диацетипуридин-5-фосфата и 1,14О г-п-голуолсульфохлорида выдерживают в течение 45 мин при комнатной температуре в 12 мл смеси; ацетонитрил и пиридин (2:1), после чего добавляют к 3,1 мл морфолина. Из реакционной смеси отбирают апиквоту, обрабатывают концентрированным аммиаком в течение 1 часа

и хромагографируюг на бумаге в системе эrairtoil-1 М ацетат аммония (5:2). Результаты анапйЬа показывают копичественное образование уридин-5-фосфомс фопвда. Затем реакционную смесь упьривают до полу чения масла на ротационном нспарител упарцваютсбензолом (ЗхЗОмл) для удапення следов пиридина добавляют 10 ммопей трибутиламмонвевой сопи ортофосфорной киспоты в диметилсупьфоксиде. Реакционную смесь Q . термостатируют в течение 18 час при 37 С, затем высаживают в 2ОО мп смеси: ацетон концентрированный аммиак (100:1). Выпавший осадок фипьтруют, промывают ацетоном (3x50 мп), растворяют в 20 мп З.М аммиа-6 ка, через час аммиак удаляют упариванием на ротационном испарителе; продукт растворяют в 20 мл воды и хроматографируют на колонке с анионообменной смолой ДЭАЗмолсепектом (1ОО мл) в линейном градиен-чЗО те концентраций бикарбоната аммония (0 0,5 М). Объем элпюата 800 мп, скорость элюции 100 мл/час. Фракции основного пика объединяют, концентрируют и удаляют бикарбонат аммония упариванием водой25

(3x50 мл). Полученный маспообразный осадок растворяют в 5 МП воды и высаживают в ацетон (100 мл). Замаслившийся осадок промывают ацетоном, затем растирают в спирте до получения осадка. Осадок сушат в вакууме над Pj Oj. Анализ проводят методом хроматографии на бумаге в сист&ме изомаспяная киспота - концентрированный аммиак - вода (66:1:33). Продукт хроматографически однородный, выход 8О%, содержание нукпеотидного материала 8О-9О

Формула изобретения

Способ получения нуклеозид-5-дифосфатов, включающий получение нуклеозид-5-- осфоморфолкдов с обработкой последних трибутиламмониевой солью ортофосфорной кислоты в диметилсупьфоксиде с последующим выделением целевого продукта, о тличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, нуклеозид-5-фосфоморфолид получают последовательной обработкой аципированного нукпеозид-5Ц)осфата -п-толуопсульфохлоридом и морфолином.