Способ получения активных производных динуклеотидов Советский патент 1979 года по МПК C07H19/04 C07H21/00 

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения активных производных , динуклеотидов, которые могут быть использовзг ны для наращивания олигонуклеотидной цепи блоками и для синтеза нуклеиновых кислот. Известен способ получения активного производного динуклеотида путем взаимодействия динуклеотида с избытком арилсульфохлорида триизопропилбензолсульфохлоридз 1. Полученное активно производное затем может быть использовано для наращивания олигонуклеотидной цепи Существенным недостатком известного способа является необходимость использования больщ го избытка триизопропилбензолсульфохлорида, что щ)иводит к накапливанию в реакционной сме си окращенных примесей, загрязняющих целевой продукт, усложняет отделение олигонуклеотидов от продуктов превращения и вызьгаает частичное сульфонилирование нуклеозидной компоненты. Целью изобретения является упрощение процесса. Указанная цель достигается использованием в качестве арилсульфохлорида полистиролсульфохлорйда,, что позволяет избежать сульфонилирования нуклеозидной компоненты и исключить доюлнительные стадии очистки целевого продукта. Предлагаемьш способ получения активных производных динуклеотидов заключается во взаимодействии соответствующего динуклеотида в абсолютном пиридине с полистиролсульфохлоридом. Пример 1. Синтез 5-0-тритил-(тимидилил3 -j-S)-тимидилил-( )-тммидина (TrdTpdTpdT). 174 мг (0,2 ммоль) 3-0-ацетил-(тнмидилил 3 -«-5)-тимидина dtpdT (Ас) в 8 мл абсолютного пирндина и 700 мг (3 ммоль) полимерного сульфохлорида (полистиролсульфохлорида) перемешивают 15 ч, фильтруют в колбу с 48 мг (0,1 ммоль) 5-0-тритилтимидина (TrdT) в сухой камере. Реакционную смесь упаривают на ротационном испарителе в условиях исключающих попадание влаги, до объема 2 мл. Через 3 ч вводят 70 мг (0,3 ммоль) полимерного сульфохлорида и перемещивают 10ч. Реакционную смесь обрабатывают последовательно 2 мл воды в течение 1 ч при комнатной температуре и 5 мл 10%ного раствора аммиака в течение 2 ч при комнат3666ной температуре, упаривают, маслянистый остаток растворяют в 50 мл 2( этанола, наносят на колонку J,5 X 20 см с ЛЕАЕ-молселектом А-25 и хроматографируют в градиенте концентраций триэтиламмонийбикарбонатного буфера (ТЕАБ) от 0,05 до 0,45 М (1 л х 1 л). Продукт реакции элюируют при концентрации буфера 0,37 Выход TrdTpdTpdT 1500 о.е. (70% в расчете на TrdT), Пример 2, Синтез 5--О-трития--(3- 5)тимидилил-()-тимидалил-(3 - 5)-дезоксиаденилил- ( 5)-3-О-дезоксиаденина (TrdTpdTpdApdA). 140мг (0,11 ммоль) 5-фосфорил-Ы-бензоилдезоксиаденилил-()-N-бензоил-3-0-дезрксиаденина , pdA (Ас) в 1,2 мл абсолютного пиридина и 0,4 г (1,7 ммоль) полимерного сульфохлорида перемешивают, отделяют раст вор от голимера и добавляют к 0,5 мл раствор а дициклогексипмочевинного производного TrdTpdT полученного из 43 мг (0,05 ммоль) TrdTpdT и 103 мг (0,5 ммоль) дициклогексилмочевиньь Реакционную смесь вьщерживалт 20 ч при комнатной температуре, обрабатывают 2 мл воды в течение 24 ч при комиатиой температуре для удаления дициклогексилмочевиниой защиты, осадок отфильтровывают, промьшают 50%-ным пиридином (3x5 мл). Фильтраты объединяют, упаривают, маслянистый остаток обрабатывают концентрированным раствором аммиака при 50° С в течение 3 ч и упаривают досуха. Остаток обрабатывают 30 мл смеси хлороформ-вода (1:5). Е(одный слой наносят на колонку ( 2 х 25 см) с ДЕАЕ молселектом А-25 и хроматографируют в градиенте концентрацией ТЕАБ в 20%-ном этаноле от 0,1 до 0,6 М (1 л X 1 л). Продукт реакции злюируют при концентрации буфера 0,45 М. Выход TrdTpdTpdApdA 600 о.е. (54% в расчете на TrdTpdT) при 260 нм. Формула изобретения Способ получения активных производных динуклеотидов путем взаимодействия соответствующего динуклеотида с арклсульфохлоридом в абсолютном пиридине, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве арилсульфохлорида используют полистиролсульфохлорид. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Бадашкеева А.Г. и др. Активнь1е фосфорилирующие производные в олигонуклеотидном синтезе. ДАН222, NM,c. 97 (1975),