Стимулятор репродукции парагриппозных вирусов Советский патент 1978 года по МПК C12K7/00 

(54) СТИМУЛЯТОР РЕПРОДУКЦИИ ПАРАГРИППОЗНЫХ

ВИРУСОВ 7,560 UDjo/0,1 мл, a в параллельном контроле 5,33 tg- UDjo /Of 1 Добавление в питательную среду эмульсии липидов из ткани печени крысы повьшает выход инфекционного п%рагр;.ппозного т ируса 1 типа на 2,17EgUD t.e. в 14о раз-., « Пример 2. Применение липидного экстракта из печени крысы для стимулирования репродукции парагриппозного вируса 1 типа. К 5 г гомогената печени крысы добавляют 5 мл дистиллированной воды и 10 мл смеси 96%-ного этилового спир та и хлороформа, взятых в отношении 1:3. Образец встряхивают 30 мин, центрифугируют, отделяют нижний слой (хлороформный экстракт) и испаряют ег до объема ,1 мл. К полученному концентрированному экстракту липидов добавляют ГО мл холодного () ацетона и оставляют при этой температуре на 24 час. Выпавший белый осадок липидов отделяют центрифугированием при 1000 об/мин в течение 1 мин и растворяют в 5 мл хлороформа. Хлороформ непаряют в стерильных условиях и эмульг руют сухой сэстаток в 5 мл . рас вора гемогидролизата., В опытные пробирки с культурой клеток первично- трйпсинизированной почки .эмбриона человека вносят по 0,1 мл вирусосодержащейжидкости парагриппа 1 типа (штамм ) с исходным титром ./0,1мл,0,1мл эмуль гированных липидов в Ё$азвеДении 1:5 на растворе 5%-ного гемогидролизата и 0,8 мл раствора 5%-ного гемогидролизата. В контроле липидный экстракт заменяют раствором 5%-ного гемогидролизата. На пятый день инкубирования при 37 С пробирки подвергают трехкратному замораживанию и оттаиванию и титруют инфекционность полученных образ цов в объеме 0,1 мл на ткани первично-трипсинизированной почки эмбриона человека. В образцах с добавлением эмульсии липидов инфекционный титр вируса сос тавляет 6,77 §С1В,уо, 1 мл, а в контроле 5,33gg-tJD5jj /0,1 мл. Добавление. в культуральную жидкость экстракта липидов из печени крысы повышает выход инфекционного вируса парагриппа 1 типа на l 44Cg-UD т.е. в 28 раз. П р им ер 3. Применение липидно го экстракта из почки крысы для стим лирования репродукции парагриппозног вируса 3 типа. К 5 г гомогената почки крысы доба ляют 3 мл дистиллированной воды,,2 м 96%-ного этилового спирта, 1 н. раствор КОН до рН 12 и помещают на кипящую водяную баню на 2 час. К получен ному образцу добавляют 5 мл петролей ного эфира, встряхивают 5 мин и удаяют органическую фазу. Экстракцию етролейным эфиром повторяют, органическую фазу удаляют, а к водной (гомогенату) приливают 10 мл смеси 96%-ного этилового спирта и хлороформа (1:3). Пробирку встряхивают 30 мин, центрифугируют, отделяют нижний прозрачный слой (хлороформ) и испаряют его в стерильных условиях. Сухой остаток эмульгируют в 5 мл раствора поддерживающего гемогидролизата. В пробирки с культурой клеток первично-трипсинизированной почки эмбриона человека вносят по 0,1 мл парагриппозного вируса 3 типа (штамм ВОК с исходным титром О, SBgUD/O, мл i 0,1мл эмульгированного липидного экстракта в разведении 1:10 и 0,8 мл раствора поддерживающего гемогидролйэата. После 5-дневного инкубирования при пробирки трижды замораживают и оттаивают и титруют инфекционность полученных образцов в объеме О,1 мл на монослое первично-трипсинизированной почки эмбриона человека. В образцах с добавлением эмульсии липидов инфекционный титр вируса равен 5,33CgUD5o/0,1 мл, в контроле 3,23 g-uD5/0,l мл. Добавление в культуральную жидкость экстракта липидов из йочки крысы повышает выход инфекционного вируса парагриппа 3 типа на 2,lEgtji)5o, т.е. в 126 раз. П р и м е р 4. Применение липидного экстракта из подсолнечного масла для стимулирования репродукции парагриппозного вируса 1 типа. К 1 г подсолнечного масла добавляют 2 мл 1н. раствора NolOH,2 мл 96%-ного этилового спирта, помещают образец на кипящую водяную баню на 2 час. Верхний слой образовавшейся двухфазной системы удаляют и к оставшейся водной фазе добавляют 5 мл петролейного эфира, встряхивают 5 мин и удаляют верхний слой образовавшейся двухфазной системы (органическая фаза). Экстракцию петролейным эфиром повторяют, удаляют органическую фазу, до:водят рН водной фазы до 7 и добавляют 10 мл смеси 96%-ного этилового спирта и хлороформа, взятых в соотношении 1:3. Пробирку встряхивают ЗОмин, центрифугируют, отделяют нижний слой (хлороформный экстракт) и испаряют его в стерильных условиях, сухой остаток эмульгируют в 5 мл 5%-ного раствора гемогидролизата. ВПробирки с культурой клеток первично-трипсинизированной почки эмбриона человека вносят по 0,1 мл вируса парагриппа 1 типа (штамм СС 1889) с исходным титром 0,5е иОдУ0,1 мл, 0,1 мл эмульсии липидов в разведении 1:5 на 5%-ном растворе гемогидролизат 1. 0,8 мл 5%-ного раствора гемогидролиза та. Через 5 дней инкубирования при 37 С образцы три раза замораживают и оттаивают, титруют инфекционность в объеме 0,1 мл, В образцах вируса, прошедшего инку бацию в присутствии эмульсии липидов подсолнечного масла, инфекционный титр равен , мл. В контроле (без добавления эмульсии) титр вируса составляет 3,67egUD,o /0.1 мл. Культивирование вируса в присутствии липидов из подсолнечного масла поввпиает его титр в 21 раз. Примерз. Применение липидног экстракта из почки кролика для стимулирования репродукции парагриппозного вируса 2 типа. К 5 г гомогената почки кролика добавляют 5 мл воды и 20 мл смеси этило хлороформа (1:3) , встря ,кивают 30 мин, центрифугируют, отделяют НИЖНИЙ СЛОЙ (органическ фазу 2ухой о«Г ° терильных условиях. СУХОЙ Образец эмульгируют в 5 мл раст вора поддерживающего гемогидролизата «вносят его в Объеме 0,1 мл в про вамно«п первично-тригтсинизи24 час 2. зараженные па я Г вирусом парагриппа 2 типа, для заражения клеток в пробирки вирусосодержащую жидкость с исходным титром l,33EgUD,/o,l мл и 0,8 мл поддерживающего гемогилролизата. Пробирки инкубируют при в течение 4 дней, извлекают, подвергают Трехкратному замораживанию и оттаиванию и титруют инфекционность полученных образцов в объеме 0,1 мл на ткани первично-трипсинизированной почки эмбриона человека.. В образце с добавлением эмульсии липидов инфекционный титр вируса составляет 4,77 и в контроле 3,,1мл. Добавление в культуральную жидкость экстракта липидов из почки кролика повышает выход инфекционного вируса парагриппа 2 типа в 19 раз. Применение липидных экстрактов в качестве стимуляторов репродукции парагриппозных вирусов позволит увеличивать урожаи вирусов в 10-1000 раз по сравне нию с вариантами без стимуляторов. Формула изобретения Применение липидных экстрактов в ачестве стимулятора репродукции паагриппозных вирусов. Источники информации, принятые во нимание при экспертизе: l.Casaeevitxperimentiae medicihe 9, 1954, р.429-449.