Способ получения производных пироглутамил- -гистидил-3-алкилпролинамида Советский патент 1978 года по МПК C07C403/14 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

L-ПИРОГЛУТАМИЛ- L -ГИСТИДИЛ-3-АЛКИЛПРОЛИНАМИДА ется проведение конденсации соединений формулы П и формулы 1| карбод имидным методом в присутствии оксибенэотриазола. . Пример. Ь -Пироглутамил- It -гистидил-транс-3-метил- L -пролинамид, N-трет-Бутоксикарбомил-транс-3-метил- L -пролин. Смесь триэтиламина (3,5 мл) и тре -бутил-2,4,5-трихлорфенилкарбоната (3,5 г) добавляют к раствору транс-3-метил- Ь,-прелина (1,25 г) в трет -бутадодв(12 мл) и воде (8 мл). Смесь нагревают 2 ч при 60°С, упаривают, остаток растворяют в 1 н. раст воре бикарбоната натрия (50 мл), раствор промывают эфиром. Добавив избыток твердой лимонной кислоты, продукт экстрагируют этиладетатом, объединенные экстракты сушат над сульфатом натрия и упаривают. Получают 1,6 г сырого кристаллического продукта, после перекристаллизации которого из смеси этилацетата.и петролейного эфира (40-бОс) получают 1,33 г целевого продукта, т,пл. 146ISO C; tlJ20.. 60,1° (с 1,0; хлороформ) . N -трет -Бутоксикарбонил-транс-3-метил- L, -пролинамид N -Метилморфолин (6,0 мл) добавляют к раствору N -трет-бутоксикарбонил-транс 3-метил- Ь -пролина (1,1 в ;тетрагидрофуране (50 мл) при -20 Затем riD каплям вводят свежеперегнан ный изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты (0,8 г). Смесь перемешивают 10 мин при . После Добавления концентрированного раствора аммиака (5 мл) реакционную смесь перемешиваю 2 ч, упаривают, остаток растворяют в этилацетате (100 мл). Раствор npoNSaiвают 10%-ным водным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют, остаток перекристаллизовывают из смеси этилацетата и петролейного эфира (40-60°С), получают це левой продукт (0,91 г), т.пл. 100101 С; ,7° (с 1,0; хлороформ) . Гидрохлорид транс-3-метил- L -про линамида Раствбр хлористого водорода в диоксане (7,5 н.,5 мл) добавляют к рас вору N -трет-бутоксикарбонил-транс -3-метил- U -пролинамида (0,65 г) в диоксане (10 мл). Кристаллический продукт через 2 ч отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси этанола и эфира. Шлход 0,47 г; т.пл. 235-237C; oL3 °. -14,8°(с 1,0; вода L-Пироглутамил- L -гистидил-транс-3-метил- L. -пролинамид Гидрохлоридтранс-3-метил- L -про линамида (0,50 г) в диметилформамиде (ДМФА) (5 мл) добавляют к раствору . азидаL -пироглутамил- L, -гистидина риготовленного из гидразина и дипепида (0,9 г), в ДМФА (15 мл) при -20°С уда же вводят триэтиламин (0,45 мл). месь выдерживают при комнатной темературе 12 ч, фильтруют, упаривают, статок растворяют в 1%-ном водном астворе пиридина и пропускают через олонку, заполненную Сефадексом 25 (50 г смолы во влажном состояии; диаметр 2 см) и уравновешенную %-ным водным раствором пиридина. Элюирование проводят градиентным етодом 5%-ным водным раствором пиидина через сферический смеситель мкостью 1 л, наполненный 1%-ным водым раствором пиридина. Фракции, соержаьоие продукт (контроль по велачиe ci.J,p и данным ТСХ) , объединяют, паривают, остаток обрабатывают эфиом. Получают 0,7 г продукта (моноидрата) в виде аморфного твердого ещества, ot |,° е -46,7°(с 1,0; вода); Чг (3 В) 0.48; т.пл. 145-148°С. Найдено,%: С 52,5; Н 7,0; N21,3. С.7 4 04 0Вычислено, %: С 51,8;Н 6,7; N21,3. При мер 2. L -Пироглутамил- L -гистидил-транс-3-этил-df -пролинамид. Диэтиловый эфир бензилоксикарбониламиномалоновой кислоты (11,5 г, 38 мл) растворяют в безводном этаноле (50 мл), к раствору добавляют натрий (150 мг) в безводном этаноле (10 мл). При перемешивании в смесь по каплям вводят пент-2-енал (3,2 г, 38 мл) и перемешивают 1 ч. Добавляют раствор уксусной кислоты (0,29 мл) в этаноле (1 мл). Реакционную массу подвергают гидрогенолизу в течение 2 ч при атмосферном давлении, применяя палладий на угле (5%) в качестве катализатора. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в хлороформе, раствор промывают рассолом, содержащим небольшое количество бикарбоната натрия, сушат над сульфатом натрия, упаривают. Остаток перегоняют при 15 мм рт.ст. и получают 4-ЭТИЛ-5,5-дикарбоэтокси-2-пирролин (5,65 г) в виде бесцветного масла, т.кип. 115-120°С/15 мм рт.ст.; в ИК-спектре полосы 1715, 1610 . К смеси 1 М гидроокиси натрия (80 мл) и этанола (80 мл) добавляют пирролин (4,68 г-, 19,5 мл), перемешивают 4 ч при , охлаждают, добавляют боргидрид натрия (1,0 г) и перемйяивают 10 ч при 25 С. Реакционную смесь аккуратно подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 4, концентрируют и концентрат помещают в колонку, заполненную смолой Дауэкс 50W х8 (Н зформа, 10 мп) . Продукт элюируют водным аммиаком (2М), элюат упаривают, получают транс-3-этил- -пролин (2,1 г), т.пл. 208-209°С; Т (ЗВ) 0,43. При анализе аминокислот на анализаторе Джеола 6АН (колонка 50 см, буфер-цитрат натрия 0,2 н., рН 3,25, температура 57°С) обнаружен единственный пик (элюирование проводят в течение 117 мин). трет-Бутилоксикарбонил-транс-3-этил- dC -пролин получают из транс-3-этил-de -пролина (1,72 г) аналогично примеру 1 в виде масла. Выход (2,82 г) ; Я (ЗА) 0,92. трет-Бутилоксикарбонил-транс-3-этил- d2 -пролинамид готовят из трет -бутилоксикарбонил-транс-3-этил- dC -пролива (3,5 г), как в примере Ь После хроматографии на колонке с силикагелем получают трет-бутилоксикарбонил-транс-3-этил- dC -пpoлинa 4ид (3,1 г) в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 78-80°С. Гидрохлорид транс-З-этил-dE -пролинамида получают из трет-бутилоксикарбонил-транс-3-этил- d -пролинамнда (3,0 г), как в примере 1, в виде белых кристаллов, т.пл. 20б-207°С; R (ЗА) 0,22; Rj (ЗВ) 0,72. Гидрохлорид транс-З-этил-dC -пролинамида (0,5 г) растворяют в воде, раствор пропускают через колонку, заполненную смолой ДЕАЕ-Сефадекс (в Он -форме). Фракции, содержащие продукт (контроль по данным ТСХ), объединяют, упаривают досуха и получают гидрат транс-З-этил-dE -пролинамида (0,45 г) в виде твердого вещества белого цвета, т.пл. 89,5-91°С; (ЗА 0,22; R (ЗВ) 0,72. транс-3-Этил-d -пролинамид (288м 2 мл), бутилкарбонил- Ь -пироглутами - L -гистидин (822 г, 2 мл) и оксибензотриазол (550 мг, 4 мл) растворяют в ДМФА (6 мл). Раствор охлаждаю до 0°С, добавляют к нему дициклогексилкарбодиимид (480 мг, 2,2 мл) и пе ремешивают 18 ч. Осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают. Полученное масло растворяют в смеси тетрагидрофурана и воды (1:1,80 мл), к раствор добавляют палладий на угле (10%, 60м и смесь гидрируют 4 ч при атмосферно давлении. Катализатор отфильтровываю фильтрат упаривают досуха. Полученну смолу распределяют между этилацетатом (50 мл) и водой (ВО мл). Водную фазу отделяют, упаривают досуха,.остаток растворяют в водном растворе, содержащем 1% уксусной кислоты и 0,05% пиридина. Раствор пропускают через колонку с Сефадексом Q 25 (в пиридиновой форме), которую уравновешивают водным раствором, содержащим 1% уксусной кислоты и 0,05% пиридина. Продукт элюируют градиентным методом, применяя водный раствор, со.держащий 1% уксусной кислоты и 1% пи ридина, с помощью сферического смеси теля емкостью 500 мп, наполненного водным раствором, содержащим 1% уксусной кислоты и 0,05% пиридина. Фра ции, содержащие продукт (контроль по данным ТСХ), объединяют, упаривают досуха, получают L -пироглутамил- I -гистидил-транс-3-этил- df -пролнмлмил (205 мг) в виде твердого аморфного вещества белого гвета, т.пл. 156160С; Т (ЗА) 0,27; R (ЗВ) 0,50. Аминокислотный анализ после кислотного гидролиза продукта показывает следующее: гистидин 0,95, глутаминовая кислота 0,99 и З-этилпролин 1,06. Примерз. L -Пироглутамил- L -гиcтидил-3,3-димeтил-dE -пролинамид. Раствор дизтилового эфира бензилоксикарбониламиномалоновой кислоты (3,09 г, 10 мл) в безводном этаноле (15 мл) добавляют к раствору этилата натрия (из 100 мг натрия) в этаноле (3 мл). В полученную смесь вводят З-метилбут-2-енал (840 мг, 10 мп) в этаноле (6 мл) и перемемшвают 24 ч при 25с. Затем добавляют уксусную кислоту (0,28 мл) и гидрируют 24 ч, используя в качестве катализатора палладий на угле (10% 500 мг). Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, остаток хроматографиру т на колонке с силикагелем, применяя в качестве элюента смесь эфира и петролейного эфира (40-60 с) (1:1), получают 2,2-дикарбоэтокси-З,3-диметилпирролидин (0,9 г). Полученный продукт (850 мг) нагревают 4 ч с 5 М соляной кислотой (Юмл) выпаривают, получают порошкообразное вещество белого цвета, кристаллизация которого из смеси метанола и эфира дает гидрохлорид 3,3-диметил-dC -пролина (451 мг) в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 110-112 С. трет-Бутилоксикарбонил-3,3-диметил-dE -пролин готовят из гидрохлорида 3, 3-диметил- Jf -пролина (1,07 г), как в примере 1. Получают 1,45 г кристаллов белого цвета, т.пл. 107-109,Sc. трет-Бутилоксикарбонил-3,3-лиметил- 3 -пролинамид получгиот из трет-бутилоксикарбонил-3,З-диметил-dC -пролина (901 мг) аналогично примеру 1 в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 115-117 С; выход 375 мг. Гидрохлорид 3,3-диметил-df -пролинамида получают из трет-бутилоксикарбонил-3,З-диметил-dC -пролинамида (300 мг), как в примере 1,в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 220-223 С; выход 175 мг. 3,3-Диметил-dC -пролинамид готовят из гидрохлорида (170 мг) подобно примеру 1. Выход твердого продукта 135 мг; (ЗА) 0,19; Rj (ЗВ) 0,70. L-Пироглутамил- U -гистидил-3, 3-диметил-dC -пролинамид получают из 3, З-диметил-clt -пролинамида (100мг 1 как в примере 2. Получают 195 г белого порошка, т.пл. 180°С (размягчается при ); Т (ЗВ) 0,65. Аминокислотный анализ после кислотного гидролиза показывает следующее: гистидин 1,02, глутаминовая кислота 0,89, , 3-диметилпролин 1,02. ai. 45 , 9° (с 1,0; ДМФЛ). Пример4. Ь -Пироглутамил-N -метил-1-гистидил-транс-3-мегил-L -пролинамид. N -метил- L -гистидин (428 мг) н карбонат натрия (288 мг) в воде (5 мл) с рН 8,5 смешивают с N -оксисукцимидоэфиром бенэилоксикарбонил-d- -пироглутаминовой кислоты (933мг) в диоксане (5 мл) и перемешивают 15ч при 22°С. Раствор упаривают, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (15x330 мм), применяя для -элюирования смесь изопропанол , -этил ацетат-уксусная кислота-вода (3:1:1: по объему) . После упаривания соответ ствующей фракции получают бензилоксикарбонил- LI -пироглутамил- N -метил- L -гистидин (615 мг) в виде тве дого вещества белого цвета, т.пл. 192-195 С; IRr (ЗА) 0,21; «КЗВ) 0.69 oLj.%-1,3 (с 1,0; ДМФА) . I, -Пироглугамил- N -метил- L -гистидил-транс-3-метил-1-пролинамидготовят, как В примере 2, из бензилоксикарбонил- L -пироглутамил- N- -метил- Ь -гистидина (207 мг) и тран -3-метил- Ь -пролинамида (77 мг). Получают 1игроскопическое твердое ве щество (90 мг) , т.пл. 135-140°С; Т (ЗВ) 0,60; dj :г -23,9° ( с : 1, О ; ДМФА) Найдено,%: С 55,0; Н 7,0; N 21,2 С.вН.. Вычислено, %: С 55 , 4, Н 6 , 7 ; N 21,5 Пример5. Ь-Пироглутамил Ь -гистидил-транс-3-метил- L -пролинциклогексиламидтрет-Бутил окси кар бор1ил-тран с-3-метил- L -пролинциклогексиламид получают из трет-бутилоксикарбонил-транс-3-метил- Ь -пролина (1,15. г) и циклогексиламина (2,85 мл), как в примере 1, в виде твердого вещества белого цвета. Выход 1,3 г, т.пл. 130 134°С; Kf (IF) 0,53. транс-З-Метил-1- L -пролинциклогексиламид готовят из трет-бутилокси карбонил-транс-3-метил- L -пролинциклогексиламида (9DO мг) аналогично примеру 1. Получают твердое вещество белого цвета (410 мг), т.пл. 111-113 Т (2А) 0,33. U -Пироглутамил- L -гистидил-транс-3-метил- L -пролинциклогексил амид получают по методике примера 2 из бензилоксикарбонил- Ь -пироглутамил- U -гистидина (565 мг) и транс-3-метил- U -пролинциклогексиламида (300 мг) в биде твердого вещества белого цвета (272 мг), т.пл, 145ISO C; (ЗА) 0,43; 1 f (ЗВ) 0,78 oL -14,9° (с ,0; ДМФА); Rf (4А 0,50. Примере. L -Пироглутамил- L -гистидил-транс-3-метил- L -про1лингексиламид. Указанный продукт готовят подобно имеру 5. Получают порошкообразный родукт белого цвета, R f (ЗВ) 0,82. Пример7. L -ПироглутамилL -гистидил- N -этил- Ь -пролинмид получают, как в примере 5. Я , ЗА) 0,26; Т (ЗВ) 0,49. Пример8. U -ПироглутамилЬ -гистидил-3-изопропил- L -проинамид получают аналогично примеу 2. -R (ЗА) 0,19; -Rj (ЗВ) 0,75. Пример 9.. L -ПироглутамилL -гистидил-3-метил- N, N -диметилU -пролинамид получают, как в приере 5. R. (ЗА) 0,27; Kf (ЗВ) ,75. В приведенных примерах для ТСХ исользуют пластины, покрытые Кизельелем G F254 системы раствориелей:IE метанол-хлороформ (1:4) IF метанол-хлороформ (1:9) 2А хлороформ-метанол-уксусная кисота (18:2:1). ЗА хлороформ-метанол-уксусная кисота-вода (80:18:2:3) ЗВ хлороформ-метанол-уксусная кисота-вода (30:20:4:6) 4А бутанол-этилацетат-уксусная ислота-вода (1:1:1:1) 6С бутанол-пиридин-уксусная кисота-вода (30:20:6:12) 7С этилацетат-пиридин-уксусная ислота-вода (120:20:6:11). Формула изобретения 1. Способ получения производных Ь -пироглутамил- Li -гистидил-З-алил-пролинамида общей формулы rN-co-ин-сн-СО-тя J-R -W/IV R2 сн, т COKRR где К - водород, метил; К - алкил (С. 3 ) ; водород, метил; В - водород, алкил (C.g) циклоалкил (Cg ) ; R - водород, метил, тличающийся тем, что единение общей формулы С О-КН-С Н - С О-Т где В - водород, бензилоксикарбонил ; 9 6191 Н - водород, метил; V - гидроксил или азогруппа, конденсируют с соединением формулы HjR inupBRt силк IV где 8, R, R и указано вьиие,карбодиимидным или азидным методом, с последующим, в случае если 0110 В - бенэилоксикарбонил, гилрироранием полученного продукта, 2, Способ по it.l, о т я и ч л ю щ и и с я тем, что, когда Y -гидроксил, конденсацию проводят карбодиимидным методом в присутстрин оксибензотриазола. Источники информагши, гринятые во внимание при экспертизе: 1.Шредер К., Любке .,Пептиды, чЛ, М.,Мир, 1967, с. 116.