Способ получения -пироглутамил -гистидил- -пролинамида Советский патент 1976 года по МПК C07K5/97 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ и-ПИРОГЛУТАМИЛ-1-ГИСТИДИЛ- L -ПЮЛИКАМИДА

Эталацегатный .раствор промывают растворюм бикарбоната натрия и водой, сушат сульфатом натрия и концен-фируют в вакууме. Остаток распфаюг с эфиром и Jaтьepждeнный продукт отсасывают. Выход Зй,1 г (80%). Т.пл. 123-12б С. С помощью TOfiKocjjoHHOM хроматографии может быть обнаружено He3Wi4MiejibHoe количество Z - про - NH. Для ОЧНС1КИ переосаждают из зганола водой. Выход 36,65 г (77 %); Т.пл. 119-122° С.

la)Q - 5,1° (с 1, диметилацетамид); Выщ1слено,%: С70,88; Н 6,34; N5,92. С28Нзо 2О5 (мол.В. 474,6). Найдено, С 70,8; Н 6,1; N 5,9. И- нро- NH- Мб|.

Через раствор 29,2 г (61,6 моля) Z - про NH -Мог в 200 NUI метанола, к которому добавлен кагализатор нз гидроокиси палладия ка сернокислом барии, пропускают водород. этом Д1)баилением i и метанольного раствора хлористого воя(1|К)да с помощью автотитратора поддерживается рИ 4,5. После ,Ц1гидрироват-;я смесь отсасьшают через слой снлнкагеля, фильтрат концентрируют и остаток распределяют между 60 мл 2 и. раствора соды и 150мл этилапетата. Этиланетатный раствор сушат над сульфато.м натрия и концентрируют. Остаток закристаллизовывается при растирании с петролейным зфиром. Выход 18,8 г (90%),-т.пл. 95-98°.

(Q)Q - 31,6° (с- 1, диметилацетамид).

BM4HCieHo,7f: С 70,57; Н 7,10; N 8,23.

C2oH24N203 (мол.в.340,4). Найдено,7г: С 70,00; Н7,00; N 8,60.

, Z-гис-нро-NH-мбг(lli)K охлажденному до -5° С раствору 13,6 г 45 мл Z - гис - NHNHj в 110 мл 1 н. HCI добавляют 75 мл этилааетата и при перемешивании прикапывают охлажденр)ый льдом раствор 3,15 г нитрита натрия в небольшо.м количестве воды. Черз 5 мин добавляют насыщенный охлажденный до 0°С раствор соды до щелочной реакции реакционной смеси. В предварительно охлажденной делительной воронке этилацетатный слой отделяется и водная фаза еще раз экстрагируется холодным этилацетатом. Объедине1тый зтилацетатный раствор сушат при 5.° С над сульфатом натрия. Затем к нему при 0°С добавляют 6,8 г (20 ммолей) Н - про - NH - Мбг. Смесь оставляют на ночь в холодильнике, на следующий день продукт высаживают петролейным эфиро.м. Смесь растворителей декандируют с выпавшего в виде масла вещества. С помощью масло превращается в аморфное вещество. очистки его хроматографируют . в тстраг идрофуране на 40 г осповной А120з (степень активности 1). Выход 10,5 г (86 7г) ,

(Q:)Q - 31,6° (с- 1, димети-чацетамид). Вышс.чено,: С 64,88; Я 6.25; N 11,12. C34H3-.Ns06 nijO (мол.в. 629,7). Найдено, С 65,00; Н 6,30; N 11,20. д) Z - глн (Мбг) - гис- про- NH - Мбг (I. R, R ХМбг)

По вар.чанту а.

Через расгвср о,30 г (Ю «мо.).ей) Z - i ис - лро -NH Мбг Н2О (ill) ь iuGMJi меганола, к ксаиро.-,;добавлен катализатор из га (ОН) 2 (ijaSO4; пропускают Бодород, при jfCM нршсалыаанием i н. метанолького раствора хлористого водорода с помощью автотитратора рН сыеси поддерЖ11вае1ся 4,5. По окошинил гидрирования мобавляют i,/ мл 1 н. метанольного растьора хлористого водорода. Каталйзаюр О1сасьшаю7 и фильтра концентрируют. Остаток paciBO(:nKJV Б 2G мл дьметилформамвд. К раствору добавлишг i ,63 мл iV

-эт шморфол:ина (1,27ммоля; 2,7 i (20 ммолей; 1

-гйдроксибензгриазола и 5,05 г (10 молей) Z ГЛН (Мбг) - ОН (II, R - Мбг). Смесь охлаждают до

0°С и затем добавляют расгъор 2,1 г ДЦК в 5 мл диметилформамида, оставляют перемешивать 1 час при 0°С и 1 час при комнатной температуре, отсасьшают образовавишйся осадок и фильтрат концентрируют. Остаток распределяют между этилацетатом и 2н. раствором соды, промешают водой, высушивают и упаривают. Осгаток растирают с эфиром и затвер:жденный продукт отсасьшают. Получается аморфное вещество. Выход 8,25 г (87 %). Дня очистки вещество хроматографируют в тетрагидрофуране на 25 г основной окиси алюминия (степень активности 1). Выход 6,35 г (67 %). (а) Q - 21,4° (с - 1, диметилацетамид). Вычислено,%: С 65,60; Н 6,13; N10,12. -CsaHsTNvOio IHjO (мол.в. 970,1).

Найдено,%: С 66,10, Н 6,30; N 10,00. По варианту б;

К раствору 3,4 г (10 ммолей) Н - про - (МН -Мбг и 2,7 г (20 ммолей) 1 - гидроксибензтриазола

в 40 мл диметилформамида добавляют 6,45 г (10

ммолей) Z - глн (Мбг) - гис-ОН (IV) и при

холодный раствор 2,2 г ДЦК в диметилформамиде.

Оставляют перемешиваться при 0°.С в течение

часа. При этом образуется мелкий студенистый

осадок, которьй путем добавления новой породи

(40 мл) диметилформамида при комнатной те.шературе в течение часа опять растворяется. Смесь

отфильтровывают от нерастворимого остатка и

фильтрат кощентрируют в вакууме. Остаток переводят в этиладетат, и полученный раствор дважды встряхивают с 2 н. раствором соды и один раз с шсыщенным раствором NsCI, сушат над сульфатом натрия и кощентрируют. Остаток после упаривания

растирают с эфиром. Пол чают 9 г аморфного вещества (94,5%). Для очистки оно хроматотрафкруется на основной окиси алюмигшя в тетрагидрофуране (степень, активности )).Выход 7,4 г (78 %). (а) Q -- 22,00° (с 1, дамeгилaцeтa 5ид).

L - пироглюмитил - L - П стидил - L - проли ;амид.

2,04 г (2,1 ммоля) Z - глн (Мбг) - гис - про -NH - Мбг кипятят с 1 мл ан:изола в Ш мл трифтор ксусной кислоты с обрат} ым хологильинком в

течение 1,5-2 час. Затем смесь ко1щентрируют, остаток растирают с зфиром и затвержден} ый проокспкарбог;ил)1ый остаток, обычными в химии пепглдов методами конденсации, предпочтительно с помощью дициклогексилкарбодаимида в присутствии .идрокснбензотриазола или 3 - гидрокси - оксо - 3/1 - днгидро - 1,2,3 - бензтриазина, или его ак1,1В ро: лгьые эфиры, такие как N - нитрофениловыГ:. N - гицроксисукцинимидный или 1 - гидро(:сн5скзо;риаз1шовый эфиры,

кондтк-ир т с соединением общей формулы

NH2-CH-CO-M 2 l 2iTi

СН- ь гСИ;

i

CO-NH-Мбг С - N

ii |

НС СН

/

N

Н

б) соединение формулы

AC-H-CH-CO-NH-CH-COOH IV СН2СНг

СОНС СН

ын-мбг н

где Ас имеет укагааное значение,

обычными в химии пептидов методами конденcanjiH, предаочтительяо с помощью дидиклогексилкарбоди(.ида в присутствии 1 - гидроксибензтриазола, N - гидроксисукди П1Мида или 3 - гидрокси 4 - оксо - 3,4 - дигадро - 1,2,3 - бензтриазина

конденсируют с N - полиамидом или N - пролин 4,4 - дпметокси беизгидриламидом.

П|)еимущество предложенного способа за- ключается в том, что предварительная защита амидогрупп глютамина и пролинамида такими остатками, как 4,4 - диметокси бензгидрил; 2,4 ди.метоксибснзял; 2,4,6 - триметоксибензил или ксашил, когоры е легко отщепляются трифторуксус гой Kiic;ioTori, приводит к тому, что получаются трудиорастворимыс промежуточные продукты синтеза, которые могут легко вьзделены.

П р ; м с р 1. L - Пироглутамил - L - гистрдил - L - пpoJIИиa fflд 1 (вариант б). . 1) Из Z - глн (Мбг) - гис - про - NHj (l,Ri , Й2 И, Z - бензилоксикарбонил),

Z - глнОМбг) - гис - Оме.

16,5 г Z - гли(Мбг) - Он (II, R - Мбг), 7,85 г Н ГНС - О.Ме-2НС1, 8,8 1 - гидроксибензтриазола и 9,0 мл триэтиламина растворяют в 220 мл хлороформа. При 0°С добавляют 7,2 г дициклогексилк чрбош1и.мида в 12 мл хлороформа и перемащивают в теч-7Нг;е 3 час при комнатной температуре, отгопяюг хлорофор.м и остаток обрабатывают 60 M;J теплого даметилформамида. Отфильтровывают от гСрастворившейся дидиклогексил.мочевины и вылинагот раствор в 400 мл воды. Студенистый осадок отсасывают, промывают водой и эфиром сущат на воздухе. Выход 21,3 г.

Z - глн (Мбг) - гис-оН - (IV)Растворяют 20,5 г Z - глн(Мбг) - гис - ОМе в в смеси 40 мл метанола, 65 мл воды и 160 мл диоксаш и омьшяютпри рМ 12,7, прикапыванием 45,2мл I н. NaOH в автотитрагоре и при рН - контроле. Затем добавляют 45,2 MJT Ш. HCI, концентрируют в вакууме до небольшого объема и добавляют значительное количество воды. Осадок дважды кипятят с этанолом. Выход 11,5 г, т.пл. 186-189°С ,

Z - глн(Мбг) - гис-про-NHj (1).

К раствору 96,5 г Z глн(Мбг) - гис - ОН в 1 л диметилформамида добавляют 22,6 г Н - про - NHj 2HCI, 40,5 г I - гидроксибензтриазола, 19,2 мл N - этилморфолина и при 0°С холодный раствор 31 г

дициклогексилкарбодиимида в 150 мл диметилформамида. Оставляют на 1 час при 0°С и затем в течение нощ1 перемещивают при комнатной температуре.- Выпавший осадок на день отсзсы-. вают и фильтрат кош ентрируют в вакууме.Остаток растворяет добавлением 1,5л этилацетата, небольшего количества воды и этанола и раствор промывается насыщенным раствором бикарбоната натрия и водой, после чего сушится над Na2 SO. Затем этилацетатный раствор когщентрируют в вакууме. Остаток растворяют с эфиром и затвердевший продукт отсасывают. Выход сырого продукта 97,2 г. Этот продукт для очистки дважды кипятят с этилацетатом. Выход 73 г.

(а:)о - 23,1° (С- 1, 90%-ная уксусная кислота).

L - Пироглутамил - L - шстидил - L - проликамид.

Л,8 г Z - глн (Мбг) - гис- npo-NH растворяют в 520 мл 90 %-ной уксусной кислоты и гидрируют

над палладневым катализатором в течение 3 час. Катализатор отсасьшают и фильтрат ковдентрирутот в вакууме. Остаток многократно растирают с эфиром и кипятят в 500 мл смеси трифторуксусной кислоты с анизолом (9:1) с обратным холодильником в течение 90 мин. Трифторуксусную кислоту отгоняют в вакууме. Остаток растирают с эфирок и затверждепный отоасьгвают. Вещество растворяют в 120мл воды и раствор наносят на колонку с 400мл амберлита IR - 45. Элюируют

водой. Элгоат ковдектрируют до небольшого объема, нагревают с небольшим количеством активированного угля, отсасьшают через осветляющий фильтр и лиофилизируют. Выход 17,0 г (67 %). (а)о -63° .(с -, вода;;

2) Из Z - глн (Мбг) - гис - про - NH - Мбг (1,

RI , R2 M6r) по вариантам а и б: Z- про- NH- Мбг.

К раствору 25 г (0,1 моля) Z - про - NHj и 24 г (0,1 моля) 4,4 - диметоксибензгидрола в

200 мл ледяной тчсусной кислоты добавляют 1 .мл концентрированной серной кислоты, оставляют смесь стоять при ко.миатной температуре на 2 дня. С помощью 800 мл воды высаживают масло, которое быстро кристаллизуется. Осадок отфильтровьшают,

промывают водой и растворяют в этилацетате.