(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИПЕПТИДОВ
Изобретение относится к способу получения новых трипептидов, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в медицине.
В химии пептидов широко применяется способ получения их путем деблокирования защитных групп l J. Отщёпление защитных групп проводят широко известными Методами, например бензилоксикарбониль ные группы отщепляют гидрированием- в присутствии катализатора, а трет-бутокси- карбонильные - обработкой защищенного пептида в умеренно кислой среде ij.
Целью изобретения является синтез новых трипептидных производных с ценными фармакологическими свойствами.
Цель достигается описываемым способом получения трипептидов общей формулы
H-L-P o N(R)CH(2) CO-y-R (I) где R - водород, метил- или диметилами- когруппа; R - водород или группа формулы СН СЩСНз ;
R J - аминогруппа, этиламиногруппа или группа формулы МН(СН„) NH-i
У - глицил
или R - метил;
1 РУппа формулы (CH) ;
R аминогруппа;
У и аланил
при условии, что, если R - водород ш диметиламиногруппа, то R - этиламиногрупа ипи группа формулы Н N (CH;)/fNH.i,
заключающимся в том, что проводят деблокирование соответствующего соединения общей формулы
R L-P|-o-N(R) СН (Rg) CO-y-Rj где R.J, R и У имеют указанные выше значения;
Ц - бензилоксикарбонил или трет- ут- оксикарбонил; Rg-аминогруппа, этиламиногруппа или группа формулы NH(CHj);jNH-Boc при условии, что если R j - группа формулы NH(CH)t, М.Н-Вос, то R - водород.
Деблокирование целесообразно осуществлять гидрированием в присутствии катализатора, содержащего благородный металл, если RX -бензилоксикарбонил. В качестве катализатора, включающего благо6родный металл, могут быть использованы палладий или платина на угле. Если R трет- утоксикарбонил или R - группа формулы NH(CH2)4. NH-Boc, деблокирование можно осуществлять в умеренно кислой среде. Пример 1. Бензилоксикарбонил - L - пролил - ( N - диметиламино) лейцилглицинэтиловый эфир l-Pr-o-NCWCHa z CHlCH tCHgl lCO-rAM-Oet) а) 12,45 г (50 моль) бензилоксикарбонил-L-пролина в 50 мл обезвоженного хлористого метилена добавляют к раствору 7,05 г (55 моль) изовалеральдегид-N Ы-ДИметилгидразонаи 6,21 г(55 ммоль) этилизоцианоацетата в 50 мл обе воженного хлористого метилена при О С. Смесь перемешивают при комнатной тем- СБос-1-Рго-ЫССН ) Изомер +31, 1, диметилформамид, ЯМР спектр () (СОСв): : 1,0 (т, бн), 1,3 (t, 3 7 ), 1,4 (S, 9Н), ЗД (S, ЗН), 4,2 (J.,j 7 гц). Изомер -76,7 (с 1, диметилформамид), масс-юпектрометрия (т/е):247 (М). в) Процесс ведут, как описано в пп. а и б, но используют трет-бутоксикарбонил-U -чтролин вместо бензилоксикарбонил-L -пролина и смесь формальдегида с изобутиламином вместо изовалеральдегид-N , N -диметилгидразона. Получают трет-бутоксикарбонил-L нпролил-( N -изобутил)-глицилглициновый сложный эфир Cboc-VPro-N-COHjCHCCHj-J lCHgCO-rAH-OE : (1-1-Ргс-Ы- Н{СН2СН2СНз)2 е) Осуществляя процесс аналогично, но используя смесь этиламина с изобути- ральдегидом вместо изовалерапьдегидо- N , N -диметилгидразона, получают бензилоксикарбонил-L -пролил-DL-( М-этил)-валилглицинэтиловый сложный эфир (1-и-Рго-МСС.,Н5)СНСсНССНз 1СО-Гли-ОЕ-Ь). Пример 2. Бензилоксикарбонил- -L -пролил-DL-(N -диметиламино)-лейцилглицинамидCZ-Pro-N-tH(CH3)2(CH)CH2CH(CHj lCO-rAM-NH а) 8,33 г (17 ммоль) промежуточного соединения - бензилоксикарбонил- L -пролвп-DL ( N -диметиламино)лейцш1глицин этилового сложного эфира, описанного в примере 1а, растворяют при в насы94пературе в течение четырех дней, промывают 5%-ным раствором бикарбоната и насыщенным раствором хлорала натрия. Затем сущат, фильтруют и фильтрат упаривают. Остаток очищают хроматографией в колонне с силикагелем с использованием смеси хлороформ- летанол (98:2) в качестве элюента. Элюат упаривают и получают указанное в заголовке соеднне- ние. б) Процесс ведут так же, как описано выше, но используют трет- утоксикарбо- НИЛ-I, -пролин вместо бензилоксикарбонил- - L -чтролина и метиламино- N -изопентили- ден вместо изовалеральдегид-N, М-диметилгидразона. Получают два изомера А и Б трет-€утоксикарбонил- L -пропил- Dl -(N - 1етил)-лейцилглицинэтилового сложного эфира 5-)2 СО-Гли-ОаГ 111пгССПСБз):сГо,9(6Н)И.24 (ЗН), 1,4О ( 9Н), 2,0 (5Н), 3-5 (11Н), 7,8 (1Н). г) Процесс осуществляют вышеописанным способом, но используют смесь 1,1-диэтилгидразина с ацетальдегидом вместо изовалеральдегидо- N, N - иметилгидразона. Получают бензилоксикарбонил-L - -пролил-DL-( N -диэтиламино)-4ланилглииинэтиловый сложный эфир (Z-L-Pro- МСМССзНд гЛСН(СНj-JCO-rMt-Oft), д) Используя смесь 1,1-ан(н-аропнл)-гидразина с изобутиральдегидом вместо иаовалерапьдегида-N, N-диметилгндразона, в условиях, описанных в п. а, получают бензилоксикарбонил-L-пролил- DL-{N ди(н- 1ропил)амино -валилгяицинэтнло- вый сложный эфир н{сНз)дЗсо-Гли-ое-ь). щенном растворе безводного аммнака в обезвоженном метаноле (150 мл) и раствор выдерживают при 0°С в течение трех дней. Смесь упаривают при пониженном давлении, остаток хроматографнруют на колонке с силикагелем, используя хлороформметанол (95:5) в качестве злюента. Эпоо- ируют по отдельности два изомера А н Б указанного в заголовке соединення, Изомер А: (CJ)Ct ); (f 0,97 (o6,J 6rn),2,28(S,6H),5,00(S.2H), 7,29 (S, 5Н). Изомер Б: Пhi г-(CDC , ); f 0,95 (t,d 6 ГЦ, ен), 2,25 (S, 6Н), 5,10 ( S, 2Н), 7,29 ( S 5Н). б) Осуществляя процесс авалогнчно, но применяя вместо бенэкпокснкарбоншп56322.99б
-L-прэлил-1)Ь-{ М-Л 1метиламкно)лейцил-(Бос-L-pro-N.CCHjKH (.CH.j- Глк-NHj;
глицинэтилового сложного эфира эквива-масс-с:;е--.тр (т/е;: 398 М), лентное количество изомера А тоет-бутоксикарбонил-L-пролил-I3L -( N -метнл) лей-в) Осуществляв процесс аналогично,
цилглицинэтилового сложного эфира, опи- 5но прпмет яя вместо бензалоксикарбонялсанного в примере 16, получают изомер-L-пролил-DL (М-диметиламино) лейцилА трет-бутодсикарбонил-1-проли.п-1)Ь-гляцинэтилового сложного эфира экви-(N -метил)-лейцилглицинамидавалентное количество трет-бутокснкарбо лч т- .j Nнил-Ь.-пролщ1-ч N Изoбyт Iл)-гл Iцилглиц :кCБoc-L-Pro-NCCH,)CHICH2C H CHзVCO- и-NH2).,, слэжного зфира (описанного в
1 0/-V 1 -аоОп ГД1 -4.Rno°примере 1в), полччзют трот-чзутоксцкарбоТ.ПЛ. J-OU-ХО -. iOvjb ow,-.
, «- ,i Hvm L-Г10олал N-изобутчл) глици-пгли(с 2, в диметилформамиде).ли.,. .
Аналогично, но используя вместо бензил цинамид
оксикарбонил- L -пролил-tU (М -диметил-СБос,-1-Рго-К-1СНХН1.СН,,.,ЗСН„СО-Гд -НН2).
амино) лейцилглицинэтиловогосложного 92-93 С;Птг (СоСЕ,.): б О,0
эфира эквивалентное копичество изомера ,., Гд,,гбле ь Г 2,5 i-ц. ОН),
трет-бутоксикарбонил-Ь-npa iiOT--OL(Nt-метил) 4( S 9ii) лейцилглицинэтилового сложного эфира (описанного в примере 16), полу
чают изомер Б трет-бутоксикарбонил- 20 И р и м е р 3, Хлоргидрат L -ni:-:.-I -пролил-Ы (N -метил) ейцилглишга-лил Б1 -( N -матил) .ллейцилглтщглшмцаа
амида формульД),
где r,-(CH3y,R2-CH2CH(),R -HH2-;4-Гли
(H-L-Pro-LNCCHjl CHCCH cKCH lCO-FMi-HH HCtl
а) Раствор безводного хлористого водо-Б порошок с безводным этилацетатом и
рода в безводном этилацетате (1,5 н,растворитель отделйют декантацией. Пслу55 мл, 82,5 ммоль) добавляют по кап-ченный осадок растворяют в безводпом
лям в течение 40 мин к охлажденной вметано-ле, раствор фильтр тс т ii --латсчник
ледяной бане суспензии изомера А трет-упаривают в вакууме. Остаток промт,
-бутоксикарбонил-L -пролил-( N -метил)-смесьюэтилацетат-петролейкыйэфир ( л: 1).
-лейцилглицинамида (6,56 г, 16,5 ммоль),диэтиловый эфир-летролейиый эфир
описанного в примере 26. Смесь переме-(1:1) и диэтиловым эфиром. Осадок
шивают при температуре ледяной бани всушат в вакууме над пятиохисью
течение 30 мин и при комнатной темпе- фосфора к гидратом окиси калмя i
ратуре в течение 17ч. Растворитель оТ-получают изомер А хлоргкдрат L
деляют декантацией, твердый продукт пе--пролил-DL ( Г4 -метил)- тейнилглици;---ремешивают с одновременным истираниемамида общей формулы (I ), ГАЕ
масс-спектр т/е) : 298 (М).окси-L-пролил-DL -( j--мeтвл).. Aнaлoгичнo, но используя вместо изо-глицинамида (описанногов примере 2 б). по- мера А трет-бутоксикарбонил-L.-пролил- д Г1учают изомер Б хлоргндрата L -nponvm-DL-(N-метил)-тпейцилглицинамида -(N -меткп)-лейципгпишпгамдда общей валентное количество изомера Б трет-бут-форм лы (Х),
.CHCCHjl iRj- V - H- - o-N- CH-XHCCH CHCCHO.JCO-rAH-KH ,
масс-спектр () : 298 (М ).да эквивалентное количество трет-бутокси-
б) Осуществляя процесс так же, каккарбонкл-L -пролил-( N-изобутил)-глиописано в примере 36, но используя вмес-цилглицинамида получают хлоргидрат L то изомера А трет-бутоксикарбонил-L - -пролил-( М-изобутил) глищшглицинаммда
-пролил-)Ь-(М-метил)-лейцйлглицинами-общей формулы (I),
ГАет -СН2СН(
мн,х VCH3iVCH;fHCCH,),,,;4-rAMCH-L-Pro-M-(CH3KK CH,CH(CH,;,3COM H7632299 8
масс-спектр ( hi/e): 284 (М),лШ1-1)1( N лйметпламино)-лейцилглииинПример 4. Хлоргндрат L -про--4-амико-п-бутйламица общей формулы (I ),
где RfN(CH3)2,R2CH2CH(CHj,R3-NHCCH2-)
Y-rAK(H-U-Pro-NCN(CH3 22 tCH2CHCCH3l2 ° AK-NHi;CH2,)4NH,, а) Раствор 4,45 г (9,07 моль) бензилоксикарбонил- L -пролил- ЬЬ -( Ы диме- тиламино)-лейцилглицинэтилового сложного эфира, описанного в примере 1 а, в 1 н. метанольном (23 мл) растворе гидрата окиси натрия (12,25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч. Затем добавляют 50 мл насыщенного раствора хлористого натрия, вы- паватий осадок отфильтровывают, фильтрат охлаждают до и. подкисляют 13,3 мл 1 н. соляной кислоты. Продукт экстрагируют х.пороформом. Органический экстракт промывают водой до нейтрального рН, высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме, в результате чего получают бенаилоксикарбонил- L, -пролил-DL - -( N -диметиламино) - лейцилглицин; nmr-(CDC ): d -0,93 (6Н), 2,53 (6Н), 8,6 (1Н). б) к перемешиваемому раствору 3,477 г (7,5 ммоль) бензилоксихарбо- вил- I, -пролил-DL -( N-диметиламино)-лейцилглицина, описанного в примере 4а, в 14 мл обезвоженного диметилформамида, поддерживаемого в сухой атмосфере, при -15С добавляют 1Д9г(7,5 мм.опь) N ,N -карбонилдиимидазола. Смесь перемешивают при -15 С в течение 30 мин. К полученной смеси, прибавляют раствор (1,685 г 7,5 ммоль) хлоргидрата моно-(трет-бут- оксикарбонил)-1,4-диаминобутана и (l,26 мл) триэтиламинав 6 мл обезвоженного диметипформамида, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2О ч и упаривают. Остаточный продукт упаривания растворяют в 2ОО мл этилаце- тата и промывают 10%-ным раствором би карбоната натрия, а затем 2О%-ным раствором хлористого натрия. Органический слой отделяют и высушивают над сульфатом магния и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол-пиридин ( 96: :5:1). В результате элюируют по отдельности два изомера - А и Б бензилоксикар бонил-L -пролил-.Би-( N -диметиламино)-лейцилглицин-4-трет-бутоксикарбониламино-н-бутиламида . Изомер А: п m г (СБСЕ ): ,99 (d, :i 6гц, 6Н), 1,42(8, 9Н), 2,65 (6Н), 5 (S, 2Н), 7,25 (5Н).
). Изомер (СЗ) ): 0,95, (t, J -6 ГЦ, 6Н), 1,43 ( S, 9Н), 5ДО (S, 2.Н), 7,30 (S , 5Н). в) Смесь 2,26 г (3.58 ммоль) изомера А бензилоксикарбонил-Ь-пролил-ОЬ-( N -диметиламино)-лпейцилглицин-4-трет-бутоксикарбониламино н бутиламида, описанного в примере 46, и 0,250 г 5%-«ого палладия на древесном угле, который служит катализатором, в 50 мл уксусной кислоты перемешивают в атмосфере водорода в течение 21 ч с использованием сосуда гидрогенизации, соединенного с колбой, где находится 10О мл 4 н, раствора гидрата окиси натрия. Катализатор отфильтровывают, фильтрат охлаждают в смеси ледвода и добавляют к нему по каплям 12 wn 1,6 н, раствора хлористого водорода в обезвоженном этилацетате. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч в отсутствии влаги. Растворитель упаривают в вакууме и следы уксусной кислоты удаляют азеотропной перегонкой с обезвоженным бензолом. Остаток подвергают хроматографическому разделению в колонке, наполненной декстраном с поперечными связями между молекулами, который служит адсорбентом (5ephadex LH-2O), используя для эшоирования метанол, Эяюат обесцвечивают активированным углем, фильтруют и упаривают. Остаток перемешивают (с одновременным растиранием в порошок) с безводным эфиром и сушат в вакууме над пятиокисню фосфора, В результате получают изомер А целевого продукта , d jj - 43,6 (с 2, в диметилформамиде). Найдено, %: С 47,1О; Н 8,55; N 17,55; СЕ 15,24. с 9 зв б05-2нсе. Вычислено, %: С 47,70; Н 8,52; N17,60; се 14,86. Осуществляя процесс аналогично, но используя вместо изомера А бензилоксн- карбонил-L -пролил-DL-( N -диметиламино)-лейцилглицин-4-кгрет-бутоксикарбониламино-н-бутиламида соответствующий изомер Б указанного соединения (описанный Б примере 46), получают изомер Б целевого соединения: d.J 5 -18,6 (с 2, в диметилформамиде). Найдено, %: С 46,88; Н 8,50; N17,51. 9 зв б°а-2 г Вычислено, : С 46,62; Н 8,64; N 17,20. г)Аналогично, но применяя вместо L -пролил-J3L-( N -диметиламиноУ-лейцилглицинэтилового сложного эфира эквивалентное количество бензилоксикарбонил-L -пролил-Б1-( N -диэтиламино)-аланилгде (сн2СНз12,2д)Осуществляя процесс аналогичным образом, но используя вместо бензилокси- карбонил- L-пролил-3)1.-{ N -диметилами- но)-ллейцилглицинэтилового сложного эфира эквивалентное количество бензнлоксикарбонил- L -пролил-DL-С N-ди( н-пропил)-амино нвалилглицинзтилового сложного эфира
(сн2СН2СНз1з;Я2-снссНз1.
Y-rAM H-U-Pt-o-N- N(CH2CH2CHj)2 CHi:CCHj)2 CO-rAM-NK(CH2CH2CH.,-a
е) Аналогично, но применяя вместо бензилоксикарбонил- L -пролил-DL ( N -диметиламино)-лейцилглицинэтиловс го сложного эфира эквивалентное количество бензилоксикарбонил- L -чаролил- DL -( N -этил- валилглицинэтилового сложного эфира)
rfi.eк -c 2C K2-Cti(,,,,
V-Гли (H-U -Pro - -СН(СНз)2 1ли- NHCH j).
Пример 5. Альтернативный спо-лил-L-(N-метил)- чейцилглицинэвэго с,;ол..
соб синтеза трет-бутоксикарбонил-L-про- jj ного эфира
(Boc-L-Pro-N(CHj)CH :CH2CH(CH3:i2lCO-rAV -OEl) (изомер Б, описанный в примере 1б). Раствор 4,2 г (15 ммоль) соединения Z -L -( N -Ме)-Лей-ОН, (2,96 г, 15 ммоль 2,4,5-трихлорфенола и (3,09 г, 15 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 21 мл обезвоженного хлористого метилена перемеши- вают при -15 С в течение 1 ч и затем при комнатной температуре в течение 2ч. Полученный осадок удаляют путем фильтрации и фильтрат упаривают. Получают 2 -I, ( N -Ме)-Лей-ОТср. Раствор 2-М N-Me)--Лeй-OTcp (15 ммоль, описанного выше) в диметилформамиде (10,5 мл) добавляют к 2,О9 г (15 ммоль) раствора хлоргидрата глицинэтилового сложного эфира и 1,92 мл (15 моль) N -этилморфолина в 35 мл диметилформамида при (fC, после чего смесь перемешивают при в течение ЗО мин, а затем при комнатной температуре в течение 2 О ч. Растворитель отго63
(описанного в примере 1е) и вместе .ччэр- 25 гидрата моно-(трет-бутоксикарбонил)-,-.-диаминобутана эквивалентное количес1БС метиламина, получают хлоргидрат L -пролил-DL. -( N --зтил)-валилглицинметилзмннг общей формулы (I.), 910 глицинэтилового сложного эфира (описанного в примере 1) и вместо хлоргидрата моно-{трет-бутоксикарбонил)-1,4-диаминобутана эквивалентное количество циэтил- амина, получают хлоргидрат L -пролкл DL -( N -диэтиламино)-аланилглициндиэтиламида общей формулы {I ), э 2С з 2Л-Гли. (описанного в примере 1д) и вместо хлоргидрата моно-(трет-бутоксикарбонил)-1,4 -диаминобутана эквивалентное количество н-пропиламина, получают хлоргидрат I --пролил-DL -ди (н-пропил)амино1-валилглицин-н -пропиламида общей формулы ( Т), няют, остаток подвергают хроматографа- ческому разделению на колонке с сяликагелем, используя в качестве элюанта смесъ х.аороформ-этилацетат (85:15). лаюат упаривают и получают соединение формулы Z - Ы N -Me) -Лей-Гли-OEt ,(СПСЕ . :S- 0,93 (6Н), 1,27 (ЗИ), 2,85 (ЗН), S9 (2Н), 4,20 (2Н), 5,17 (2Н), 7,34 (5Н). Раствор бромистоводородной кислоты в уксусной кислоте (ЗО-32%, 4,9 мл, 24 моль) приливают к раствору соединения Z - L -( N -Me) W eй-Гли-OEi ( 2,9 г, 7,96 ммоль), описанного выше, в 4,7мл уксусной кислоты и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4,5 ч. Растворитель упаривают в вакууме, остаток подвергают повторной азеотропной перегонке со смесью бензол- -метанол. Полученный остаточный продукт высушивают в вакууме над гидратом оки- 6 СИ калия. В результате получают H-L-(H-AAe)-Aeu-rAM-OEt3-HB , Раствор Бос-1-Про-ОН (0,645 г, 3 ммоль), 1-оксибензотриазола (0,81О г i-, б ммоль) и дициклогексилкарбодиимида (0,680 г, 3,3 ммоль) 3 обезвоженном тетрагидрофуране (15 мл) перемешивают при -5С в течение 1 ч, а затем при 25 в течение 1 ч. Смесь охлаждают до О С и обрабатывают раствором соединения Н L -( N Ме) -Лей-Гли-OE-t J HBh) (З ммоль, описанного выше) и N-этил-морфолина (0,384 мл, 3 ммоль) в обезвоженном тетрагидрофуране (14 мл) при О С. Эту смесь перемешивают при О С в течение 30 мин, а затем при комнатно температуре в течение 4О ч. Полученный осадок отфильтровывают и фильтрат упари вают в вакууме. Остаточный продукт раст воряют в этилацетате (100 мл). Раствор промывают охлажденным льдом, 1 н. раствором лимонной кислоты, водой, 5%- ным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу высушивают над суль фатом магния и упаривают. Остаточный продукт подвергают хроматографическому разделению в колонке, наполненной сили- кагелем, используя в качестве элюента см хлороформ-этилацетат-пиридин (50:50:0,1 В результате получают целевое соединени -трет-бутоксикарбонкл- L -пролил- L. -( N - -этил) -лейцилглицинэтиповый сложный эфи c(. -73,1 (с 1, в диметилформамиде). Это соединение, полученное указанным способом, идентично изомеру Б трет-бутоксикарбонил- L -пролил-15L -(N - -метил)-лейцилглицинэтилового сложного эфира, который получен способом, описанным в примере 16. П р и м е р 6. Пролил-L -( N -метил -ле йцИл-1 -ал анинамид (Н-рг-о-иЧМ-ме)-лей-15-Ала-НН21 общей формулы ( I ), где R -CHj-, R -CH CHCCH j-) ) V-Xi-Ала. Бензилоксикарбонил- L -( N -метил)-ле цин (14,0 г, 50 ммоль), D-аланинметиловый сложный эфир (7,0 г, 5Оммоль) и 1-оксибензотриазол (13,5 г, 10 ммоль растворяют в смеси обезвоженного тетра 0,95 Cz - L - Про - U- (N- ллемей - D-Ала - оме): nmr Ссвсе,); (d , 6Н) ,2,87 и 3,0 (два S , ЗН), 3,72 ( S . ЗН), 7,4 (S . 5Н) 9912 гидрофурана (300 мл) и диметилформамиде (70 мл). Этот раствор охлаждают до О С н добавляют к нему N -этилморфоЛИН (6,42 мл, 5О ммоль), после чего прикапывают раствор дициклогексилкарбо- днимида (10,3 г, 50 ммоль) в обезвоженном тетрагидрофуране (80 мл). Реакционную смесь перемешивают при О С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение еще 1 ч, фильтруют и растворители удаляют в вакууме. Остаточны-й продукт растворяют в этидацетате и экстрагируют водой и насьшенным раствором хлористого натрия. Остаточный продукт, полученный после сушки, и упаривания этилацетатных слоев, подвергают хромато графическому разделению в колонке с силикагелем (1 кг, хлороформом с содержанием 2% метанола). После упаривания элюента Получают соединение Z-L-CN-Me)AeS-D-AAa-OMe;nmK(CDcej): ,86 (3H,S), 3,74 (3H,S), 5,25 (2Н, ), 7,42 (5H,S ). Смесь бензилоксикарбонил- L -( -метил )- ейцил-Б-аланинметилового сложного эфира (10,5 г), описанного вьпие и 5%-ного палладия на древесном угле (1,0 г) в уксусной кислоте (12О мл) с соляной кислотой (2 Hj 28,8 ммоль) перемешива- ют в атмосфере водорода в течение 24 Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и получают соединение H-L -( N -Ме)-Лей-1)-Ала-ОМе.НСе . Раствор этого соединения (28,8 ммоль), 1-гидроксибензотриазола (3,9 г28,8ммол бензилоксикарбонил- L -пролин-п-нитрофе- нилового сложного эфира (10,7 г 28,8 ммояь) и N -этилморфолина (3,7 мл, 28,8 ммоль) в диметилформамиде (70мл) перемешивают при О С в течение трех дней. После упаривания растворителей в вакууме полученный остатошый продукт растворяют в этилацетате и промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлористого натрия. Органич ескую фазу высушивают над сульфатом магния и упаривают. Остаточный продукт подвергают хроматографическому разделению в наполненной силикагелем колонке, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол (98:2). Элюаты упаривают к получают бензилоксикарбонил-L,-пролил-L -(N -метил )-лейцил-1)-аланин-ч« ет1товый сложный эфир Последнее соединение (l,7 г, 3,68 ммоль растворяют при в метаноле, насыщенном аммиаком (85 мл), и выдерживают при О°С в течение трех дней. Растворитель отгоняют и остаточный продукт выкристаллизовывают из смеси изо- пропиловый эфир-ацетон. В результате получают бензилоксикарбонил-L-пропил-L -(N -метил)-с1ейцил-D-аланинамид Сг-и-Про-и-СК-ллетлей-тэ-Ала-ыНзЗ, т. пл. 148-150°С. Результаты элементарного анализа, фор мула соединения: Найдено, %: С 61,67; Н 7,82; N 12,66. СгзНз4 0 С 61,86; Н 7,67; Вычислено, N12,55. Смесь описанного выше соединения Z-L-npo-U-CN-MeUen-D-AAa-NHg (1,29 г, 2,9 ммоль) и 5%нного палладия на древесном угле (0,13 г) в уксусной кислоте (20 мл) с соляной кислотой (1н. 2,9 мл) перемешивают в атмосфере водо- рода в течение 20 ч. Катализатор отфильт ровывают и фильтрат лиофилизуют. Получают требуемое соединение в виде хлористоводородной кислой соли . Остаточный про дукт обрабатывают методом ионообменной хроматографии в колонке, наполненной кар оксиметилцеллюлозой (Wfiattnann СМ-23) используя 0,04 Н. водный раствор ацетата аммония. Элюат подвергают лиофилизации и получают нужное соединение в виде кислой уксуснокислой-СОЛ и, оСЗ -77,6° (с 1, в уксусной кислоте). В результате повторной лиофилизации последнего соединения получают требуемое соединение в виде свободного основания: П1ПГ-(СБСЕз): 0,9О (S, 6Н), 1,22 (d,J 7 ГЦ, ЗН), 1,45-2,16 (Yn, Н), 2,82 и 2,90.(синглеты, ЗН) 3,9-5,2 (т, ЗН). Осуществляя процесс аналогично, используя в качестве исходного продукта бензилоксикарбонил- D-( N -метил) -лейцин вместо L -энантиомера, описанного выше Z-l.-Pro-L-AeiS-rAM-NH 0,92 (6Н), 1,42 (9Н Смесь последнего соединения (7,4 г, 12,55 ммоль) и 5%-ного палладия на древесном угле (О,5О5 г) в уксусной кислоте (5О мл) перемешивают в атмосполучают L -пролил-вЧ N-метил)-лейцил-D-аланинамид (Н-Про-ЗЭ-.( N-Ме)-Лей-D -Ала- N Н). Анализ (аминокислоты): Про 0,8 8; Ала 1,ОО. Пример 7. L-Пролил-L-лейцил-глицин-4-амино-н-бутил-амид общей формулы (I ), ,К2-СН2СН(СНз)2,Кз-КН(СН2), Ч-ГлиСН-и-Про-и-Лей-Гли-МН(СН2)4МН2 1 Н. раствор гидрата окиси натрия (3,02 мл) добавляют по каплям при перемешивании к суспензии бензилоксикарбонилпролил-L -лейцилглицинэтилового сложного эфира (1,0 г, 2,24 ммоль) в метаноле (5,6 мл) при , раствор перемешивают при 25°С в течение 20 мин. Затем раствор разбавляют насыщенным раствором зшористого натрия (25 мл), охлажден-, ным до О С, и подкисляют 1 Н. раствором соляной кислоты (3,3 мл). Смесь перемешивают при О С в течение 2О мин. Осадок отфильтровывают, промывают холод водой, высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора и перекристаллизовыва- --jют из смеси метанол-вода. Получают соединение 1-и-Про-Ь-Лей-Гли-ОН,т.пл. 163165°C,Cot.- -55,8(с 2, в диметилформамиде). Смесь последнего соединения (9,48 г, 22,6 ммоль), хлоргидрата моно-(трет-бутоксикарбонил) -1,4-диаминобутана (5,06 г, 22,6 ммоль), N -этилморфолина (28,9мл) 1-оксибензотриазола (б,1 г, 45 ммопь) и дидиклогексилкарбодиимида (4,98 г, 24,85 ммоль) вдиметилформамиде (225 мл), перемешивают при О°С в течение 1 ч, а затем при 25 С в течение 4 ч. Полученный осадок отфильтровывают и маточник упаривают. Остаточный продукт растворяют в этилацетате, осадок отделяют и фильтрат промьтают 1О%-«ым раствором бикарбоната натрия, водой, 10%-ным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и растворитель отгоняют. Остаточный продукт подвергают хроматографическому разделению в колонке, наполненной силикаге- лем, используя в качестве элюента смесь хлороформ- етанол-41иридин ( 98:2:1). Элю- ат упаривают и получают соединение J NH-Boc.jnmi-CCDCbg : ,16 (2Н), 7,36 (5Н). ере водорода в течение 5 ч с использоанием сосуда гидрогенизации, соединеного с колбой, в которой находится переешиваемый раствор гидрата окиси натрия (4 н 250 мл). Смесь фильтруют и фильтрат охлаждают в ледяной бане. Затем при- капывают раствор хлористого водорода в обезвоженном этилацетате (4,6 н., 16мл) и смесь перемешивают при 10°С в течение ЗО мин, а затем при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель упаривают, остаточный продукт растворяют в бензоле и растворитель отгоняют. Остаточный продукт растворяют в метаноле, до бавляют активированный уголь, фильтруют и растворитель упаривают, получая требуемое соединение в виде кислой хлористоводородной соли. Последнее соединение растворяют в 0,1 н. растворе соляной кисгде 1 -СНз-,( Ч-ГлиСН-и-РгоНН(СНэ1СН
Смесь этилового эфира трет-бутоксикарбонил- Ц пропил-В-( N-метиллейцилглицина (1,0 г, 2,34 ммоль изомера А, описанного в примере 16) и безводного этилена ( 20 мл) выдерживают в бутыли под давлением при комнатной температуре (25°С)
Саос-Ь-Рго-Ы(СНзКНСС.Н2СН()2)(С2Н5 ЯМР-спектр(СССез): б 1,4 (еинглет,9Н) 3,05 (синглет,ЗН),0,75-1,25 (мультиплет, 9Н). Последнее соединение (400 мг, 0,938ммоль) растворяют при 0°С в трифтор- уксусной кислоте (1О мл) и раствор перемешивают в течение ЗО мин. Реакционную смесь упаривают досуха. Остаток растворяют в воде и раствор пропускают через ионообменную колонку, заполненную Ам- берлитом lR-45(OH) (5 мл, 2мкг/мл). Элюат лиофилизируют и получают указанное в заголовке соединение. Аминокислотный анализ: глицин 1,0, пролин 0,92. По альтернативному варианту элюат растирают с 0,1 н. раствором серной кислоты (при рН 4,5) и раствор лиофилизируют с образованием указанного в заголовке соединения в виде сульфата. Электр форез продукта, полученного после гидролиза соли, показывает четыре положитель ных нингидриновых пятна (это соединениеэнантиомер с D-лейцином). Формула изобретения 1. Способ получения трипептидов общей формуль. H-L-Pt-o-NCROCHCR2)CO-V-R3 U)
в течение двух суток. Затем упаривают до-суха и остаток кристаллизуют из смеси этилацетат-гексан. Получают изомер А этиламида трет- утоксикарбонил- L -пролил-D-( Ы-метил)- ейцилглицина лоты и обрабатьшают методом ионообменной хроматографии с использованием ани онообменной смолы ( CQA-540) в форме ацетата. Элюаты упаривают, осга точный продукт смешивают (с одновремен. ным истиранием) с эфиром и петролейным эфиром, сушат и получают требуемое сое динение в виде кислой уксусной соли. Найдено, %: С 52,13; Н 8,7О; N 14,35; CHjCO H 23,2. С Н Н Оз-2СНдСО,Н-1/2 (484,6). Вычислено, %: С 52,04; Н 8,73; N 14,45; 24,78Пример 8. I,-Пролил- D( Ы -м&тил)-1)-лейцилглицина общей формулы (I ). . сН2СН(СНз)23-СО-Ое: -ЫН(СНз:)) где R - водород, метил или дйметилами--ногруппа;R - водород или группа формулы СНгСНССНр ; Rg - аминогруппа, этиламнногруппа или группа формулы Е(., У - глицил, или К - метил; R,., - группа формулы СН2СН(СНд)2 ; R - аминогруппа, У-.1 -аланилпри условии, что, если R. - водород или диметиламиногруппа, то R «- этна- аминогруппа или группа формулы HHtCH2.NK5, отличающийся тем, что проводят деблокирование соответствующе го сое динения общей формулы K -L-Pho-N(R)CH(R)CO-V-l 5. , где R , R и У имеют указанные выше значения; R,- бензилоксикарбонкл или оксикарбонил; Ry- аминогруппа, этиламаногруппа или группа формулы NHCCH ). NH-BOC при условии, что, если R грушш 4юрмулы NH(CH2)MH-Boc , то R - врдо род.
17 632299IS
с я тем, что деблокирование осуществля-NH(CH . NH-Boc.
ют гидрированием в присутствии катали-Источники информации, принятые во
затора, содержащего благородный металл,внимание при экспертизе
если R -бензилоксикарбонил, или в уме-5 1. Шредер Э., Любке К. Пептиды, ч. 1,
ренно кислой среде, если R -трет-бут-М., МкрД967, с. 11
