Способ получения пептидов или их уксуснокислых солей Советский патент 1979 года по МПК C07K1/08 C07K1/107 C07K7/06 A61K38/08 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ

:УКСУСНОКИСЛЫХ СОЛЕЙ

цетил, о-нитросуяьфенил, фталил, -хлоркарбобензокси, предпочтительно арбобензокси и трет- бутилоксикарбоил. Атом азота в индольном скелете риптофана защищают необходх моси фор.мил ьной группой. 5

Благодаря соответствующей комбинаии защитных групр Можно лрстичь сеективного или одновременного их удаения с использованием известных меодов, например гидролиза, ацидолиза, fO аталитического гидрирования.

Чаще всего для введения защищенной (аминоокси)-ацильной группы на аминоконце используют мето; пентагалоидфениловых эфиров,активный сложный эфир . с вводят во взаимодействие с тетрапептидамидом н-Трп-В-Асп-NH-Y, имеющим концевую карбоксильную группу.

Для получения исходных уатрапептидов, в которых Y - ведород, исходят ,л из соединения общей формулы Z - Фен-ОН (Z - защитная группа), из которого получают известным образом соединение общей формулы Z -Фен-NHg, и после удаления защитной группы постепенно с помощью защищенных N-оксисукцинимидных 5 (о-Сук) и пентагалоидфениловьгх эфироз аминокислот достраивают ,до тетрапептидамида Н-Tpп-B-Acп-Фeн-NH2.Для получения исходных тетрапетидамидов, в которых Y - О-СН -СООН, ис- 30 ходят из Н-Фен-О-Гли-он, получаемого путем ацилирования (аминоокси)-уксусной кислоты с помощь смешанного ангидрида или сложного эфира общей формулы Z - Фен-ОН, и иэ полученного про-Э5 дукта удаляют защитную группу обработкой бромистым водородом в уксусной кислоте.

у исходных ВОС-Фен-NH 2 И ВОС-Фен-о-гли-он БОС - защитную группу уда- ДО ляют МЯГКОЙ кислотной обработкой продукта.

Защитную р-карбоксильную группу аспарагиновой кислоты в дияептиде, трипептиде или тетрапептиде удаляют д селективноили вместе с замищающей аминогруппу группой путем ацидолиза, в случае, когда.i-OH, путем каталитического гидрогенояиза,

При использовании метода пентагало-,, идфениловых эфиров обычно применяют пентахл орфенол (ИО-ПХФ) и пентафторФенол (НО-ЦФФ;.

Целевые продукты очищают кристаллизации,осаждейия,колоночной хроматрграЛии на силикагеле или ионооб-5 меннойг зфоматографии с помощью карбьксимётилцёллюлозы. :;

;:- - Патентуе вле соединения получают в виде свобоДных кислот солей..

роли с ор;ганическими или неоргани- 60 ческимй кислотами из-вестными методами или при рИстке могут быть превращены feo внутренние соли. .. . Температуру плавления соединений Определяют с помощью йрибора для оп- 65

р еделения температуры плавления по TpttojLi (Buchi) . При тех используют пластиды из силикагеля и. злюируют смесью растворителей: .. м1-хлороформ-метанол(95:5),

N2-хлороформ-метанол(9:1),

N3-хлороформ-н-гексанй уксусная кислота .(8:1:1)

М4-зтилацетат- (пиридин-уксусная кислота-вода,

20:6:1)(9:1),

N5-этилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода,

20:6:1)(8:2),

Ыб-зтилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода, 20:6:1-) . (7:3),

N7-амилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода,

20:€:1)(3:2)

Н8-зтилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода,

20:6:1)(1:1),

Н9-этилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода,

20t6:l)(2:3)и

NlO-этилацетат-(пиридин-уксусная кислота-вода,

20:6:1) ,(85:5)

Для проявления берут раствор нингидрина.Пластишд после нанесения на вещества высушивают 5 мин при 105с, помещак т в атмосферу газообразного хлора и после аэрировани я обрабатываю сМесью о-толуидин-KJ.

Для кодоночной хроматографии применяют силикагель С (размер частиц 62-20 ммк).

Пример 1. N-(Бензилоксикарбонил)-Ь фенилаланинамид.

К раствору 12,0 г (40 ммоль) Z -Фён-ОН в ВО мл безводного тетрагидрофурана (ТГФ) добавляют 5,60 мл (40 ммоль) триэтнла1 ина,озслаждают до -ЮС и Щ)И этой темпер атуре добавляют 3,80 мл (40 ммоль) эtилoвoгo эфира хлоругольяой кислоты перемешивают Ю мин при -10® С и при -10 С в течений 1 ч гр опускают газообразный аиФчиак. Hot следующий день смесь упаривают в вакууме досуха и кристаллический остаток растирают с 40 мл во при 40-во с. Сырой продукт (8,84 г) перекристаллиэовывают из 7-кратйого количества этанола. Получают 6,55 г (55%) ,т. пл. 165-1б6 С, R| 0,75.

Ь-Фенилешанин-амид-гидробромид

К 6,55 ir (22 ммоль) Z- -Фен-ми 2 в 13 ;мп уксусной кислоты добавляют: , 30 мл 5 н .раствора бромистог водорода в уксусной кислоте, перемешива от 5 кмн, рстйвляют на 1 ч, разбавляют безводным эфиром и фильтруют Сырой продукт pacTBOpjfioT в 240 мл этанола осветляют и ос кдают 740 мл Эфира. Получают 4,90 г (91%) белого.

кристаллического, хроматографически однородного H- I eH-NH2-НВг, т. пл. 249ZSQ C, R| 0,50, Rj гидробромида 0,35.

N-(Бензилоксикарбонил)Ь-аспарагил-р- (трет-бутиловый эфир)-Ь- фенилаланин-амид

К суспензии 9,45. г (38,5 ммоль) H-OeH-NHj НВг в 100 мл безводного ТГФ добавляют 5,40 мл (38,5 ммоль) триэтиламина, прибавляют 16,2 г (38,5 1моль) (О-трет-бутил)-О-Сук, Через сутки смесь упаривают.: Остаток растворяют в 500 мл э.тилацетата и триждда встряхивают d 10%-ным раствором лимонной кислоты и трижды с 5%-йым раствором бикарбоната натрия.. Затем раствор осветляют при нагревании с активирова.нным углем и сушат над сульфатом -натрия.

Фильтруют, концентрируют в вакууме, остаток растворяют в 200 мл этил ацетата- и цосле кристаллизации :получают 15,17 г (84%) хроматогр афически однородного Z-Acn-(О-трет-бутил)-Фен-NHj, т, пл. .160-161 0, R| О,.70.

Ь-Адпарагил-р-(трет-бутиловый сложный ,эфйр)-Ь-фенилаланин-аив1д.

15,17 г (32,3 ммоль) Z-Acn- О-трет-бутил)-Фен-ЫН2 растворяют в 1,0 л

метанола и в присутствии 2,0 г палладия на активированном угле вбсстаиавливают при перемешиваний, пропуская водород. Спустя 2 ч фильтруют, фиАьтра упаривают в вакууме. Твердый .остаток растирают с диизоггропиловым э фиром, ос т а вл яют : на н очь на хол и фильтруют. Получают 10,4О г (95,8%) Н-Асп-(0-трет-бутил)-4 ён-Ш2 , т. пл. при 121,0-121, R| 0,35. .. N-(трет-бутилоксикарбонил)-1.--метионил-Ь- аспарагил- - (трет-бутиловый сложный эфир)-1г-Фёнш1алании-а1да1д. .

10,4 г (31 ммоль). И-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-ЫН2 и 11,1 г (32 миоль) вое-Мет-О-Сук растворяют в 100 мл

.хлороформа, на следующий трижды промывают водой при встряхивании. Органйческую фазу отделяют, высушивают и упаривают в вакууме. Гелеобразный остаток растирают с эфиром, оставляют на холоду и фильтруйт.. . i

Получают 14,5 г (82,7%) сырого про дук.та, т. пл. 148-149°С, которкнй раст вор.яюГ в40 мл м етанола, осветляют активйроваяным углем, осаждгшзт 40 мл эфира и получает 12,80 г (73%) ВОС- -Мет-АСП-(О-трет-бутил)-Фен-NHo, т. пл.. 151-152 С; R|-0,65.;

ЫЯ етйонил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланин-амид-гидрбхлорид. ;

Раствор 12,50 г (22,1 ммоль) вбс-Мет-Асп-(О-трет-бутил) 2 в 25 мл уксусной кислоты рхлаждазот и смешивают с 30 мл, 7,4 н.солянокислого этилацетата. Через 5 мин смесь мутнеет и выделяется масло.

Через 10 мин после выделения масла разбавлдат эфиром и фильтруют.

Осадок (10,24 г) раств.оряют в 40 мл метан.ола. Добавляют 200 мл этилацетата, гелеобразный продукт оставляют на холоду на ночь, отфильтровываюх -.и получают 9,0 г (91%) Н-Мет-Асп-Фен-NH2-HCI, т. плТ 187-18:9°C; R 0,27. N-(трет-Бутилоксика рбонил)-Ь-трипт офил- L-метиони л-Ь-аспарап Л L- фениаланин-амид.

К суспензии 9,0 г (20,1 ммоль) Н-Мет-Асп-Фен-Ща HCI и 8,42 г (21 ммоль) ВОС-Трп-О-Сук в 150 мл диметйлформамида (ДМФА) добавляют 2,83 мл (20,1 ммбль) триэтиламина, . церемешивают в течение ночи и выливают в смесь из 1,0 л ледянрй воды и 3,75 мл уксусной кислрты. Суспензию оста1вляк т стоять до полного таяния льда и фильтруют. Гелеобразный : осащок тщательно промывают водой, затем эфиром и получают 13,3 г (95%) сырого продукта, т. пл. 203-204С, кот-орый дважды перекристаллизовывают из 30-кратного количества 80%-ного водного этанола при осветлении. Получают 9,67 г (69%) ВОС-Трп-Мет Асп-Фен-НН2, т. пл. 212-214 с (разл.)г R| 0,45.

Ь-Трипт..офил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланинамид-мрнргидрат

9,23 г (13,2 ) ВОС-Трп-Мет-Acn- i eH-NH2 при О с И перемешивании ВНОСЯТ В. смесь 32мл трифторуксусной кислоты, 8 мл воды и 4 мл ааиэола, в течение 2 ч пропускают азот, разбавляют 270 мл эфира, фильтруют, осадок промывают эфиром и высушивают в эксикаторе, растворяют в 60 мл метанола и осаждают трифторацетат 240 мл эфира. Трифторацетат растворяют в смеси 340 мл воды и 29 мл 1 н.едкого натра, добавляют 13,2 мл уксусной кислоты. Осадок от.фильтровывают и п эомывают..

Получают 6,70 г (82,4%) H-Tpn-WcsT-Асп-Фен-NH- Н,О ,т. пл. 235-238 Сг R« 0,35. - .: : .

Вычислено, %: с 56,6; h 6,2; ; -:- :- -- N 13,7

СгчНзб бОбЗ 2° (614,725) .Найдено, %: С 56,4; Н 6,2 N 13,6

Пентахлорфениловый эфир трет-6утйлоксикарбониламйнррксйуксуснойкислоты.,.-:....-..-Раствор 8,о г (41,8 ммоль) ВОС-о-Гли- ;Н и 11,1 г (42,0 ммоль) НО-ПХФ в 160 мл безводного диоксан а охлаждают до и смешивают с 8,.6 г (42,0 ммоль) ДЦГКД, оставляют При комнатной температурена ночь, дициклогексилмрчевину отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме и остаток перек1 1сталлизовывагот из смеси диоксанэтанол. Получают 13,1 г (74,3%) ВОС-О-Гли-ЮПХФ, т. пл 167168С; R| 0,7. . Вычислено, %: С 35,52; Н 2,75; N 3,18; CI 40,33 q, , (439,510) Найдено, %: G 36,37; Н 2,90; ; :;: N 3,31 CI 40,12 (трет-Бутилоксикарбониламиноокси) -ацетил-Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенйлаланин-амид. 1,79 г (3,О ммоль) Н-Трп-Мет-Асп-ФеИ-ЫН,Н2,0 и 1,18 г (3,3ммоля) ВОС-О-Гли-О-ПХФ в 30 мл даФА ввдерживают 4 ч, упаривают в вакууме, гелеобразный остаток растирают с этил ацетат.ом. 2,11 г (91%) продукта, т. пл. 178-184 с, растворяют в 20 м метанола, осветляют, осаждают водой и получают 1,50 г (64,8%) кристалли ческого белого ВОС-О-Гли-Трп-Мет-АС -Феи-ННа, т. пл. 193-194С; н| 0,40 ) -16,2° (,0, даФА). Вычислено, C-56V1 S 4,16. (769,85), йайдено, %: С 56,4; Н 6,3; S 4,07, Примерз, (Аминоокси)-ацетил-Ь-триптофил-Ь -метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланйН .-амид. 1,0 V (1,3 ) ВОС-о-Глй рп-MeT-Acn- tieH-NHg при перемешивании вносят в смесь 4 мл трифторуксусной кислоты, 1 мл воды и 0,5 мл анизола пропускает азот в течение 2 ч, разбавляют 40 мл эфира/ осадок (1,02 г т,рифторацетата) растворяют в смеси 34 мл воды и 2,9 мл 1 н.едкого натр свободный.амйд Осаждают, добашляя 1,32 мЛ уксусной; кислоты, Осадок от фильтровывают, тщательно прс мывают водой и высуищвают в эксикаторе. По лучают 0,6 г (69%) Н-О-Глй-Трп-Мет-Асп-Фен-ННд, т, пл, 183-184 С; К1 0,5; Ыд -31,6° (с 1,0,-ДМФ Вычислено, %: С 55,59; Н 5,87; N 14,60; S 4,79 Ci-fHjpN OeS (669,763), Найдено, %: С 55,41; Н 5,93 ; N 14,41 S .4,71. Пентахлорфенийовый эфир 2-(трет-бутилоксикарбойиламинрркси)-L-npoпионовой кислота. РаствЬр 4,10 г (20 ммоль) BCXI-D-Ала-ОН и 5,32 г (20 ммоль) НО-ПХФ 20 мл |рИФА охлаждают до 0° С, смешив ют с 4,12 г (20 ммодь) ДЦГКЙ, перем шивают 30 мин при и вьиерживают в течение .ночи, п.|Ж комнатной уемпер турё, ДицяклЬгейсйлмочевйну отфильт ровывают, фильтрат упаривают в еаку умё, остаток обр)аба:рнвают безводным .эфйрол, 6тфйльтровы|ва1бт /осадок (5,25 г), пёрекрйсталлизовнвайт Иэтанола и получают 5)80 г (63%) ВС С--1 Ч -Ала-йПХФ, V. пл. 122-124 С; Я| 0,85; (ot)o -68, (с 1,0 д оксан)., Вычислено, %: С 37,07; Н 3,11; ,CI 39,08. ,4С NOf найдено, %; С 37,22; Н 3,07; . CI 39,27, 2-(трет-Бутилоксикарбониламинооки)-Ь-пропионил-Ь-триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланин-амид°Смесь, содержащую 0,70 г (1,22 ммоль) И-Трп-Мет-Асп-Фен-Ша х X HjО и 0,59 г (1,30 ммоль) BOC-L -Ала-ОПХФ в 50 мл ДМФА и 0,35 мл (2,5 ммоль) триэтиламина оставляют на ночь и затем упаривают в вакууме, Гелеобразный остаток . смешивают с .этилацетатом, отфильтровыйайт осадок (0,69 г), смешивают с 15мл этилацетатй, нагре вают до кипения и фильтрут. Осадок (0,5 г) растворяют в незначительном количестве смеси растворителей № 6, пропускают через колонну, заполненную 40 г силикагеля и элюируют смесью растворителей № 5. , Из чистых фракций получают. 0,3 О г хроматографически однородного ВОС-L О-Ала-Трп-Мет-Аоп-Фен-ЫН2, т. пл, (разл,); R 0,15; R|0,3. вычислено, %: С 56,69; Н 6,30; N 12,21, (783,88), Найдено, %: С 56,50; Н 6,29; N 12,34. Пример 4V;: ; N- (Бензилоксикарбонил)- Ь-лейцил-Ь-аспарагил-В-(трет-бутилоэый слож- . ный эфир)-Ь-фенилаланинамид. . 5,0 г (14,9 ) Н-Асп- (О-трет-бутил)-Фён-МН„ смшивают с 5,5 г (15,2 ммоль) Z-Лей-О-Сук в 50 мл хлррофо| 4а. Раствор постепенно превраща- : ется в гель. Гель разбавляОТ хлороформом и перемешивают в течение ночи. Упаривают в вакууме, остаток растирают с водой и отфильтр6выв.ак)т, Сьфой . продукт (8,6 г, т, пл. ) nfepeкристалЛизовывают из .45 мл этанола. Получают 7,26 г (83,5%) Z-Лей-Асп(-О-трет бутил)-Фен-Ш2, т.пл, 18018ГС, Rn 0,6; -36,8° (с 1,0, этанол). Вачйслено, %: С 63,90; Н 7,27; N 9,62 С.. H42N407 (582,68) найдено; %: С 63,70; Н 7,41; N 9,73, Ь- ЛеЙцил-Ь-аспарагил-р- (трет-бутиЛовЬаЙсложный 9фир)-Ь фенилаланинамйд. 6,76 г (Ilf6 ммоль) Z-Лей-Асп-(О-трет-бутйл)-Фен-МН.1 растворяют в Метанола и восстанавливают водородом при перемешивании в присутствии 1/0 г палладия на активированном угле. Спусти 90 мин катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, ге.леобразнш остаток вццеляют с помоадью н-гёКсана и получают 5,2 г (99,5%) Н-ЛеЙ Асп-(О-трет-бутил) - ен-ЫН Rf 0,1 который используют без дальнейшей очистки. N-(трет-бутилоксикарбонил)-L-триптофил-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-р - (трет-бутиловый сложный эфир)-Ь-фенилаланин-амид. Раствор 5,2 г (11,5 ммоль) Н-Лей-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-ЫН2 и 4,82 г (12,0 ммоль) ВОС-Трп-О-Сук в 100 мл ДМФА оставляют на ночь, упаривают в вакууме, остаток растирают с водой, фильтруют, осадок (8,95 г) перекристаллизовывают из 70 мл 70%-ного этанола при осветлении и получают 7,19 (84,5%) ВОС-Трп Лей-Асп- (О-трет-бу-г тил)-Фен-ЫН2, т. пл. 17б-177с; R 0,65. После перекристаллизации из Ю-кратного объема 80%-ного этанола т. пл. 180-182С; et -35,3 (с 1,0, ДМФА). Вычислено, %: С 63,74 Н 7,41; N 11,44. Найдено, %: С 63,62f М 7,62; N 11,17. Ь-триптофил-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-L-фенилаланинамид. 6,59 г (9,0 ммоль) ВОС-Трп-ЛейАсп-(О-трет-бутил)-Фен-КН2 вносят в смесь 60 мл трифторуксусной кислоты и 6 мл.анизола, перемешивают 2ч при комнатной температуре и разбавляют безводным эфиром. Полученный после фильтрования мазеподобный остаток вы сушивают в эксикаторе над едким натром и пятиокисью фосфора, растирают с водой и выделяют 5,61 г трифтрраце тата, т. пл. 178-186С (разл. ) , кото рый растворяют при нагревании в воде содержащей немного этанола. При охлаждении поддерживают рН 7 с. помощью 1 н.едкого натра. Осадок отфильтровы BcUOT, промывают водой и этанолом, 4,О г сырого продукта растворяют в 30 мл ДМФА и осаждают 60 мл метанола Получают 2,28 г хроматографически од нородного Н-Трп-Лей-Асп- ен-НН2 т. пл. 227-230°С (разл.); R| 0,55. Вычислено, %: С 62,26; Н 6,62; N 14,52.. C oHjeNfcOfc (578,67). Найдено, %: С 62,02; Н 6,80; N 14,38. . 2-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-ацетил-Ь-триптофил-L-лейцил-L-аспарагил-Ь-фенилаЛанин-амид. Раствор 1,0 г (1,82 ммоль) Н-ТрП-Лей-Асп-Фен-NH2 и 0,88 г (2,0 ммоль) ВОС-О-Гли-ОПХФ в 10 мл ДМФА смешивают с 0,27 мл (1,82 ммоль) триэтидами на, оставляют на ночь, упаривают в вакууме, остаток растирают с эфиром, суспензию оставляют на холоду и филь руют. Получают 1,42 г сырого продукт т. пл. 102-120с (раэл.) , к которому добавляют 10-кратное количество этил ацетата, кипятят и фильтруют горячим Получают 1,06 г вещест ва, растворяют его в смеси растворителей W 5, вносят в колонну, заполненную 80 г силикагеля, и элюир тот смесью растворителей № 10, Из чистых фракций получают 0,58 г ВОС-)-Гли-Трп-Лей-Асп-4ен- т. пл. 187°С (разл.); Rf 0,7; - -24,9° (с 0,5, RT 0,15; ДМФА), Вычислено, %: С 59,11; Н 6,57; N 13,04. (751,85) С з) Найдено, %: С 59,28; Н 6,40; N 12,75. П р и м е р 5. L-Лейдил-L-аспарагил-L-фенилаланин-амид-гидрохлорид. 6,91 г (15,4 ммоль} Н-Лей-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-NH2 вносят в 50 мл солянокислой уксусной кислоты. Спустя 45 мин разбавляют безводнья эфиром, оставляют стоять на холоду непродолжительное время и фильтруют. Осадок тщательно промывают безводным эфиром. Получают 6,20 г (94%) Н-Лей-Асп-Фен-NH-i нет RJ 0,2, который используют без дальнейшей очистки. М- (трет-Вутияоксикарбонил)-11-трипт офил-L-лейцил-L-acnapa гил-L-фенилалани.н-амид. 6,2 г (14,5 ммоль) Я-Лей-Асп-ФенNHj- нет и 6,42 г (16,0 ммоль) ВСЮ-Трп-О-Сук в 70 мл в присутствии 2,24 мл (16,0 ммоль) триэтйламина выдерживают 4 ч, выпаривают в вакууме, растирают с водой и отфильтровывают. 10,6 г сырого продукта дважды кипятят со смесью метанол-этилацетат и отфильтровывгиот. Получают 7,1 г (72,1%) ВОС-Трп-Лей-Асп-4 енNH2,T. пл. 218-221С (разл.); R| 0,4, и используют без дальнейшей очистки. L-Tpиптoфил-L-лeйцил-L-acпapaгил-L-фенилаланин-амид. 7,1 г (10,5 ммоль) ВОС-Трп-ЛейАсп-4 ен-NHj вносят в 60 мл солянокислого диоксана. Спустя 3 мин смесь становится прозрачной. Спустя еще 10 мин раствор разбавляют безводным эфиром, выделяющийся маслянистый продукт отверждают и отфильтровывают. Полученный- гидрохлорид (6,96 г) растворяют при нагревании в 150 мл воды. При охлаждении добавляют твердый бикарбонат натрия до рН 7, фильтруют и Осадок промывают тщательно водой, Получают 5,05 г.(83,1%) хроматографически однородного Н-Трп-Лей-Асп-ФенNH r т. пл. 228-230°С (разл). Пентахлорфениловый эфир 2-(трет-бутилоксикарбониламинрокси)-D-пропибновой кислоты. К охлажденному до 0°С раствору 4,10 г (20 ммоль) BOC-D-O-Ала-ОИ и 5,32 г (20 ммоль) НО-ПХФ в 20 мл ДМФА добавляют 4,12 г (20 ммоль) ДЦГКД, перемешивают 30 мин при 0°С и оставляют на ночь при комнатной температуре. ДицикЛогексилмочевину отфильтровывают, фильтрат упаривают ввакууме, кристаллический остаток обрабатывают бёзводн1лм эфиром, фильтруют, осадок (6,25 г), перекристаллйэовывают из этанола. Получают 5,80 г (64%) ВОС0-0-Ала-ОПХФ, т. пл. 123-124С; oLJj, +68,95 (с 1,0, диоксан). RVo,85 d.-o +68,95° (с 1,0,-диоксан).

Вычислено, %: С 37,10; Н 3,10; CI 39,10.

C.4bi4Cl5:N6. (453,537),:

найдено, %j С 37,16; Н 3,29;

CI 39,01.2-D-(трет-БутилоксиКарбониламиноокси)-прогшонил-Ь-лейцил-Ъ-аспарагил-L-фенилаланин-амид. .

1,74 г (3,0 ммоль) Н-Трп-Лей-АСП- -Фен-NHjr вводят во взаимодействие с 1,50 г (3,3 ммоль) ВОС-О-О-Ала-ОПХФ в 20 мл ДМФА в присутствии 0,42 мл (3,0 ммоль) триэтилами а..-;На-следующий День смесь упа;ривают в вакууме, остаток растирают с эфиром. Продукт растворяютв незначительном кояичестче смеси раст оритфтей . № 5 и внрся т

; колонну, заполненную 100 г силика.ёлй. Элюируют сялесью растворителей 5, вадеденный из чистых фракций, кристаллический остаток перекристаллизомывают из 50 мл 80%-ного этанола Подучают 1,07 г (46,7%) BCiC-D-O-Ала-Tpii-Лей-Асп-Фен-NH j, т. разл. 2lOC; RJ 0,15; R| 0,40; Ш т, -6,0 (с

4,0, ДМФА). ; :.

Вычислено, %: С 59,59; Н 6,71; - , N 12,80. .

CjeHy N O o 7б5,88). Найдено, %; С 59,37; Н 6,90;.

.- ..:-..; .N 13,10.

,.П р. и,м ё р 6. . . : 2-N-(трет-Бутилоксикарбонил)-(L-фенйла ланйламинооксй) -уксусная кислота.-- ; : . :;/- ; : . ,

6,97 г (40,5 ммоль) гидробромида аминоуксусной к.ислоты вводят во имодёйствие с .г (40,5 ь влоль) ВрС-Фен-О-гСук в 100 мл ДМФА в щзйсутствии 6,3 мл (45 ммоль) триэтиламина На слёдукяций день смесь выпаривайТ в вакууме, Оста1юыееся масло раствб яи}Т в .IPО мл хлор6ф6.рма и трижды встй яхивают с 1 Н.соляной кислотой. Органическую фазу В1ысут11ивают и выпаривают в вакууме, маслянистый остаток Ьтаёрждают диизопр опиловым эфирЬм растворяют в эТилацетате и осаждают диизопропилрЬым эфиром. Получают 9,60 г (74%) )ен-О-Гли-ОН, т. пл. 136137С; R/0,4; , 17,8(с 1,0, этанол).

Вычислено, %: С 56,80; Н 6,55;

N 8,28. (338,36).

С-,еНг, С 56,59; Н 6,41; Найдено, ,N 8,42.

Смешан ный N- (трет -бутиловый) - oi- (N-оксисукцинимидный) эфир Ы-(трет

-бутилоксикарбонил)-Ь-аспарагиновой кислоты..,

11,45 г (39,7 ммоль) маслянистого ВОС-Асп-(О-трет-бутил)-ОН и 4,6 г (40 ммоль) N-бксисукцинимида растворяют в 100 мл безводного диоксана, охлаждают.и смешивают с 8,25 г (40 ммоль) ДЦГКД, перемешивают в течеРйие ночи при комнатной температуре, дициклогексилмочевину отфильтровывают и фильтрат упаривают. К оста.тйу добавляют смесь гексан-дииэопропиловый эфир, осадок (13,8 г,т. пл. 98- 102 С) отфильтровывают, перекристаллизовывают из З-кратного количества избпропанола и получают 12,1 г (78,3%) белых кристаллов ВОС-Асп-(О-трет-бутил) -Сь-Сук, т. пл. 103-105С; . d. - -25,6° (с 1,О, диоксан).

Вычислено, %: С 52,84; Н 6,78; . . , .. . N 7,25. , ... C HauNgOg (386,39) .

лайдёно, %: С 52,97; Н 6,00;

.: /- -.. N 7,21. -.

. 2-(L-Фенилаланиламинрокси)-уксусная кислота- гидрохлорид . К раствору 5,8 г (17,1 ммоль) ВОС-Фен-О-Глй-Ън в 10- мл этилацетата дЪбавляют 60 мл 4 Н. СОЛЯНОКИСЛОГО этилацетата,, перемешивают 4. ч и растворитель сливают с маслообразного вещества, которое отверждают свежеперегнанным этилацетатом. Получают 4,53 г (96,б%) Н-Фен-О-Глй-ОН- HCI. Продукт гигроскопичен и хроматографически однороден, т. пл. 75-80 с; н| 0,2. 2-(N-трет-бутйлоксикарбонил)-L-аспараг.ил- РГ- (трет-бутиловый сложный эфир)- (Ii-фенйлаланиламинрокси)-уксусчатя йсл;с)та. . - . - - ; -.-:. .JC раствору 7,0 г (25,5 ммоль) НФеНг-р-Гли-Он нет в 150 .Мл ДОФА добавляют 7,15 мл (51 ммоль) триэтил амйна, вносят. 9,30 г (2.4 ммоль) ВОСАсп-(Ь-трёт-бутил)-о-Сук. После полного расТйорейия смесь оставляют на ночь, затем упаривают в вакууме, маслянистый; остаток растворяют в хлороформе, расТйЬр встрйхиваюТ трижды с 1 Н.соляной кислотой и водой, заТём высуашвают и йыпаривают в ваку5 ё. Остаток ртверждают диизопропиловймэфиром. 10,35 г сырого продукта дважды йёрёорйждают из смеси эфир н-гекеан. Получают 8,63 г (70,7%) ВОС-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-О-Гли-ОН, . т. пл./ 8 3-85С раэп .);к| 0,45; , -30,6° (с 1,36-, этанол) . лроМатограмма показывает нал.1тч)е незначйтёдьного количества примесей. 2-(L-Acпapaгил-L фeнилaлaнилaминoокси)-уксусная кислота - гидрохлорид. 8,50 г (16,7 ммоль) ВОС-Асп-(О-трет-65тил) -Фен-о-Гли-ОН при перемениванин растворяют в 70 мл (350 ммоль) 5 и.солянокислого этилацетата. Спустя 5 мин из раствора начинает вьаделяться кристаллический гидрохлорид. Через 75 мин суспензию фильтруют, осадок промывают этилацетатом и получают 6,22 г (95,8%) кри.с таллического Н-Асп-Фен-О-Гли-ОН - HCI т. пл. 1бО-1бЗ°Сг R 0,25. (трет-Ьутилоксикарбонил)-L-метионил-L-acпa aгил-L-фeнилaлaнилaминooкcи -yкeycнaя кислота. К раствору 6,1 г (15,6 ммоль) Н-Асп-Фен-О-Гли-он HCI в 50 мл ДМФА добавляют 6,55 мл (46,8 ммоль) Tptiэтиламина, затем 6,38 г (15,6 ммоль) Во.С-Мет-о-Сук. После полного paicTBOрения смесь ввдерживают в течение но чи при комнатной температуре, упаривают в вакууме и маелянистьй остаток отверждают диизопропиловь 1 эфиром, исадок (6,3 г, 69%) растворякит в незначительном количестве « MISCH padTBO .рителей №,7 и вносят в колонну, запо ненную 110 г сйликагеля.. Элюируют/ см СЬЮ растворителей 7 со скоростью. 8-10. мл/ч. Чистые фракции собирают и упаривают в вакууме. Полученное маслянистое вещество отверждают диизопропиловЕлм эфиром, продукт (4,4 г) растворяют в 15 мл метанола и осаж;ца ют 10-кратным количеством безводного эфира. Получают 3,26 т (35,7%) аморф ного, хроматографически однородного ВОС-Мёт-Асп-Фен-6-Гли-ОН, R 0,30; ld,-o -37,2° (с 1,0, этанол). Вычислено, %. J С 51, 36 ; И 6,21; N 9,58; S 5,48. . . CzsHjt . Найдено, %: С 51,50; Н 6,07; , . N 9,43; S 5,47V ; 2-(Ь-Метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаяаниламнноокси)-уксусная кислота- гйдро}слорИд, 0,50 г (0,85 ммоль) ВОС-Мет-Асп-Фён-о-Гли-Оп обрабатывают и течение 1 ч 5 мЛ солянокислого;этилацетата, фильтруют, осадок тщательно пролмвают этилацетатом и вькзушивают в эйсика торе. Получают 0,41 г (91%) Н-Мет-Асп ирен-0-Глй-6Н HCI, 0,05 ; iRf 0,2 Продукт аморфный, хроматограмма показывает наличие незначИтёльного количества, примесей. ;, .- .. , -. 2-N-(тр т-БутиЛОксйкарбонил) -трипфтофйл-Ь-мётионйЛ-Ь-аспарагИл -(L-фенилаланияамйноокси)-укёусйая кислота. . . К суёйензни 3,0 г (4,79 1«моль) Н-Мет-Асп-Фен-)-ГлИ-ОЯ ИСТ в 50 мл ДМФА при пёремёшибании добавЛяйт 14 мл (10 ммоль) триэтиламина и 2,35 (5,0 кмоль) ВОС-Трп-ОПФФ, вьвдерживают 90 мин и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетатё, встряхивают трижды с 1 н.соляной киелотой, затем с водой. Органическую фазу высушивают, осветляют и концентрируют в вакууме до объема 10 мл. Добавляют безводный эфир, оставляют стоять на холоду и фильтруют. Получают ,17 г (58,8%) ВОС-Трп-Мет-Асп- JJ - ен-и-Гли-ОН, Н1 0,3; i) -19,9 (с . 0,75, ДМФА). Продукт содержит небольшое количество примесей. 2-(Ь-Триптофил-Ь-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланиламиноокси)-уксусная кислота.. 2,17 г (2,81 ммоль) ВОС-Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли-ОН при перемвиивании вносят в смесь 8 мл трифторуксусной кислоты, 2 мл воды и 1 мл анизола в течение 2 ч пропускают азот, разбавляют 60 мл эфира, продукт отфильтровьавают и высушивают в эксикаторе. Получают 2,0 г трифторацетата, растворяют иk в 8 мл 2 н.едкого .натра и подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН 4. Осадок отфильтровывают и. промывают водой. Получают 1,34 г (71%) Я-Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли-ОН, Rf 0,1. Продукт аморфный. Хроматограмма показывает,.что продукт слегка загряз н«н. З-БррмпрОпйоновая кислота. К раствору 44,0 г (0,49 ммоль) р-аланина и 200 г (1,68 моль) бромида калия в 1,0 л 2,5 н.серной кислоты при комнатной температуре, порциями добавляют 42,4 г (0,76 моль) нитрита, натркя, пёре гешивают при комнатной темпе ратуре в течение 2 ч и дваждел встряхивают с 200 мл эфира. Эфирный раствор промывают трижды во-, дои и после высушивания выпаривают в вакууМё. 19,8 г сырого продукта перекристаллизовывают из 30 мл н-гексана при осветлении и получают 18,1 г (24%) З-бромпропионрвой кислоты, . т. Пл. 59-60с. , Дициклогексиламинная соль 3-(трет-бутйлбксйкарбониламиноокси)-пропионовой кислоты. 7,7 г (0,30 г-атом) на1трия растворяют в 450 мл эфира, добавляют 26,6 г (0/20 моль) N-(трет-бутилоксикарбойил)-гидроксиламина в 165 мл этанола и 28,7 г (0,188 моль) 3-бромпропионовой кислоты в 165 мл этанола, перемешивгшзт :при 50-55 с в течение двух дней, упаривают в вакууме и остаток pacii3pp soT в 350 мл воды. Водный растврр экстрагируют этйлацетатЬМ (3 х X 1(30 wi), подкисляют до рн 3 лимонной КИСЛОТОЙ, насывайт Хлоридом натрия и эkcтpafйpyвэт этилацетатом (5 х 100 мл) . Объединённые этилацётатные фазы триды промывают водой, высушивают и вы парив.ают в вакууме. К маслянистому остатку (27,25 г) в 100 мл н-гексана порциями добавляют 23,3 мл (118 Ммоль) дицйклогексйламина при постоянном охаждении, оставляют на холоду, осаок отфильтровывают, промывают эфиом. 44,93 г прлусейного сЫрого проукта, т. пл, 12в-135С, растворяют 50 мл метанола, осветляют и осг1ждат 200 мл эфира. Получают 25,0 г (34%) соли в6с-)-О-Ала-ОН ; дициклогек15

силамин, т. пл, 148-149C; R| 0,5; R| 0,25. Из маточного раствора выявляют: еще 9,3 г (12,8%) продукта, т. пл, 144-145с.

Вычислено, %: С 62,14; Н 9,9;

N 7,25.

СгоНзвМ Од (386,52). Найдено, %: С 61,99 Н 10,

N 7,09.

Пентафторфенйловый эфир 3-(трет-бутилоксикарбониламиноокси)-пропионовой кислоты.

1,10 г (2,85 ммоль) соли ВОС-р-о-Ала-ОН. дициклогексамин обрабатывают 40 мл эфира и 3 мл 2 н.серной кислоты. Эфирную фазу отделяют, встряхивают еще раз с серной кислотой, объединенные водные фазы, содержащие серную кислоту, экстрагируют эфиром. Эфирные фазы объединяют) высушивают и у.паоивают в вакууме.- Псшуч-арт 0,34 г маслянистого вещества, котооое вместе с 0,31 г (1,и ммоль) riOПФФ растворяют в 10 мл безводного диоксана. При к раствору добавляют 0,37 г (1,8 ммэль) ДЦГКД, переМйшивают 90 мин при комнатной температуре, дициклогексилмочевину отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в н-гексане, трижды встря-. хивают раствор с 5%-ным раствором би- карбоната натрия, высушивают и упаривают в вакууме. Маслянистый остаток отверждают н-пентаном. Получают 0,33 г (55%) ВОС-О-Ала-ОПФФ, т. пл. 58-59°С; R| 0,65.

Вычислено, %: С 45,29; Н

N 3,77

Ci4 .(371,27). Найдено, %: С 45,43; Н 3,65;

N 3,90.

(трет-бутилоксикарбониламиноокси)-пропионил-Ь-триптофил-11-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланиламиноокси -уксусная кислота.

К раствору 0,32 г (О,.48 ммоль) Н-Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли- Н и 0,23 г (О,.6О ммоль) ВОС-р-О-Ала-ОПФФ в 10 мл ДМФА .добавляют 0,14 мл (1,0 ммоль) триэтиламина. Спустя 3,5чупаривают в вакууме, остаток отверждают эфиром. 0,31 г сырого продукта растворяют в незначительном количестве смеси растворителей 6 и вносят в колонну, заполненную 20 г силикагеля. Элюируют смесью растворителей 6 со скоростью , 5 мп/ч. Чистые фракции упа| ивают в вакууме, и остаток выделяют с помощью безводного эфира. Получают 0,14 г (34%) ВОС-р-О-Ала-Трп- ет-Асп-Фен-О -Гли-ОН, R| 0,1; R 0,3. Продукт хроматографически однородньй и аморфныП.

Вычислено, %: С 54,0; Н 5,99; N 11,45

е,,Нл , S (857,94) . Найдено, %: с 54,40; Н 6,10; N 11,27.

691082

J6

Пример 7.

(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-ацетил-L-триптофил--L-метиони л-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланиламиноокси -уксусная кислота.

к раствору 0,34 г Н-Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли-ОН в 10 мл ДМФА добавляют 0,14.мл (1 ммоль) триэтиламина и 0,28 г (О,.6 ммоль) ВОС-О-Гли-ОПХФ. Спустя 3 ч упаривают в вакууме и остаток отверждают эфиром. 0,43 г сырого продукта растворяют в небольшом количестве смеси растворит.елей 6 и вносят в колонну с 20 г силикагеля, с элюируя смесью растворителей № 6 со скоростью 10 мл/ч. Чистые фракции объединяют и. упаривают в вакууме. .Получают 0,15 г (31%) ВОС-Ю-Гли-ТрпЧУ1ет-Асп-4)ен-О-Гли-ОН, Rj. 0,4. Про-. дукт аморфный. В1лчислено, %: с 54,08; Н 5,85;

N 11,61. C38H49N O, S (845,98). Найдено, %: С 53,95; Н 5,97;

N 11,70. 5 П р и м е р 8.

(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-пропиОнил-L-триптофил-L-метионил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланиламиноокси -уксусная кислота. 0 к раствору 0,23 г (0,60 ммоль)

BOC-DrO-Ала-ОПХФ и 0,34 г (0,50 ммоль Н-Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли-ОН в 10 мл ДМФА добавляют 0,14 мл (1,0 ммоль) триэтиламина. Спустя 3 ч упаривают 5 в вакууме., остаток растирают с эфиром и отфильтровывают. 0,41 г сырого продукта растворяют в небольшом количестве смеси растворителей №7,вносят в колонну, заполненного 40 г силикаге0 ля и элюируют смесью растворителей № 7 со скоростью 10 мл/ч. Чистые фракции упаривают ,в в.акууме, остаток вВДеляют с помощью безводного эфира. Получают 0,11 г (25,6%) BOC-D-O-Ала- -Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли-ОН, RT. 0,25. Продукт аморфный.

Вычислено, %: С 54,60; Н 5,99; .,

N 11,43. (857,94). Найдено, %: С 54,41; Н 5,87;

N 11,32.

Пример 9.

(трет-Бутилоксикарбониламийоо си)-пропионил-Ь-триптофил-L-метиoнил-L-acпapaгил-L-фeнилaлaнилaминo5 окси -уксусная кислота. - .

Из BOC-Lr-O-Ала-ОПХФ, как в примере 8, получают 0,38 г сырого продукта. После хроматографирования выделяют 0,13 г однородного BOC-L-O-Ала-Трп&0 -Мет-Асп-Фен-О-ГлИ-ОН, Rf 0,25.

Вычислено, %: С 54,60; Н 5,99;

N 11,43.

(857,94). Найдено, %t с 54,47; Н 6,04; 5N 11,41.

Примерю,

Пентафторфениловый эфир N-трет-бутилоксикарбонил-Ь-норлейцина.

10,0 г (24,3 ммоль) соли ВОС-Норлей-ОН дициклогексиламин в смеси 75 мл эфира- и 25 мл 2 н.серной кислоты встряхивают до полного растворения эфирную фазу встряхивают сначала с 25 мл 2 н. серной кислоты, затем с водой, упаривают в вакууме, маслообразный остаток (5,44 г) и 4,42 г ; (24 ммоль) Нр-ПФФ растворяют в 30 мл этйлацетата, охлаждают до и смешивают с 4,6 3 г (22,5 ммоль) ДЦГКД. Суспензию оставляют на 1, ч на холоду и фильтруют, фильтрат упаривают в вакуумё, остаток растворяют в 50 ми н-гексана и экстрагируют 5%-ным paipTвором бикарбоната натрия (5 х 20 мл), затем водОй (2 х 20 мл). Органическую фазу высушивают и упаривают в Маскообразный остаток при охлг1Ждении застывает. Получают 8,12 г (91%) ВОСНорЛей-ОПФФ, т. пл. 55-57°С; к| 0,80; R 0,85; Wli, -26,8 (с 1,0, дйоксан) ,

Вычислено, %: С 51,39; Н 5,07; F 23,91.

.NO. (397,35).

Найдено, %: С 51,51; Я 4,68;

; - - .... f 24;,06. .: ;;; .

Я-трет-Бутилоксикарбонил-Ь-г1орлейцил-Ь-аспарагйл-р-(трет-бутилбвый

сложный эфир)-.-фенилаланин амид..

К раствору 1,68 г (5,0 ммоль) Н-гАсп-(О-трет-бутил)-Фен- }Н2 и 2,2 г (5,5 ) ВОС-Яо 5лей--ЬП 1 Ф в 10 мл дЬЬав1Л йот 0,70 мл (5,0 ммрль) триэтйламина, спустя 3 ч упаривают в вакууме и твердая остаток отфильтв|6вывают при охлазкдении после раз;бавл«г нйяэфиром. Получают 2,2:3 г (81,8%) вое-Норл ей-АСП-{О-трёт-бутил ) т. пл. 1б4-1б5 с. ПосЛё перекристаллиэа цйй из этипацетата т. ilit. 1б5-167С; R 0,70; 1«С} 2,2 , (се 1,0, ДЙФА).

Вычислено, %: С 61,29; Н 8,08;

N 10,24.:

(548,66). Найдено, %: С 61,34; и 7,70;

.. .,:. 1я 10,4р; /г:; ;;.-л--Ь-НсфЛ айцйл-Ь-аспара йЛ-Ь-фёНилаланин-а1МИ5В -гйдрохлориД.;

1,90 г (3,4 7 ммояь) ВОС-Йорлёй-АспЧс -трет-буткл) pacTieopijroT в 15 мл 4 н.СОЛЯНОКИСЛОЙ уксусной кислотЬ, через 1 ч упарйвангг в вакууме и твердый остаток после разба.вления эфиром отфильтровывают. Получа1С1ГГ : 1,48 г (98%) Н-Норлей-Асп-Фен-NHi-HCl т. разл. R 0,35; i ;о -15,4 (с 1,0, ДМФА).

Ы-трет-Бутилоксикарбонил -Ь-триптр- фил-Ь-йорлейцйл-Ь-аспарагйл-Ь-фенилаланин-амид.

1,35 г (3,15 ммоль) Н-Норлёй-Асп-Фен-ЫН HCI и 1,26 г (3,15 ммоль)

ВОС-Трп-О- :ук в присутствии 6,88 мл (6,3 ммоль) триэтияамина растворяют в 40 мл ДМФА, деремоиивают в течение НОЧИ и упаривают в вакууме, МаслянистыЯ остаток отверждают водой, содержащей небольшое количество уксусной КИСЛОТЫ, фильтруют при охлаждении и промцвают осадок водой, затем эфиром Получают 1,92 г (89,7%) ВОС-ТрО-йорлей-Асп-Фен-КНз, т. разл. 196 С; Rf 0,50; сС -28,8° (с 1,0, ДМФА). Продукт перерабатывают без дальнейшей очистки.

1.-Триптофил-11-норлейцил-Ь-аспарагил-Ь-фёнилаланин-амйд-гидрохлорид.

Раствор 1,85 г (2,73 KWQHb) ВОСJTpn-{1орлей-Асп- ен-NH2 в 50 мл 8 и, солянокислого дйбксана выдерживают 1 ч и упаривайт в в акууме, . гелеобраэный оста:ток после разбавления ацетЬHoifl отфильтровывают и получают 1,17 г (69,7%) Н-Трп-Норлей-Асп- Фен4NH J, НСI, т. разл. 235 С; W в -28,4 (с 1,0, даФА)...

2-D-(трет-БутилоксикарбРниламинооКсй)-пропйонил-Ь-триптофил-Ь-норлейцид-Ь-аспарагил-Ь-фенилаяанин-амид.

1,0 г (1,62 ietunb) Н-Трп-Норлей-Асп-Фен-«Н/i HCI в 10 мл ДМФА в присутствии 0,68 мл (4,86 ммоль) триэтйламина и 0,74 г (1,62 ммоль} iBOC-D-O-Ала-ОПХФ оставляют на ночь, упаривают в вакууме, гелеобразный остаток после разбавления отфильтровывают и прс швают эфиром, затем водой. 1,36 г сырого продукта хроматографйруют на силикагеле, элюируя смесью раст вормтелей 10. Чистые фракции упаривают в вакууме. Твердый остаток после разбавления 50%-ным водным этансжс отфильтровывают. Получайт 0,25 г БОС-D-0-Ала-Трп-Норлей- -Асп-Фен-НН/г, т. пл. 217-218°С (разл); Н|0,30; R-if 0,15; W +4,3° (с 1,0, ДМФА).

Вычислено, %: С 59,59; Н 6,71; N 12,80.

(765,88).

Найдено, %: С 59,4О; Н 6,55;

: . N 12,831.

П РИМ е р 11.

Пентафторфенйловцй эфир N-трет-1утилоксикарбонил-1д-норвалйна8,6 г (20 король соли ВОС-Норва лоН дициклогексиламин при встряхивании растйоряЮт в смеси 60 мл эфира и 20 мй 2 н.серной кислоты. Эфирную фазу отделяют, промывают. 20 мл .,й.серной Кислоты и водой, высушивают и упаривают в вакууме. Остающееся масло вмёат« с 3,70 г (20 ммоль) НО-ПФФ раствОря бт в 35 ш этйлацетата f при дббавляют 3,92 г (19 ммоль) ДЦГКД выдерживают 1 ч,/Фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме и маслянистый остаток рас ворда)т в 50 мл н-згексана. Раствор промявают 5%-ным раствЬрсм би.карбоната натрия (5 х 20 мл) и ъодой

(2 X 20 MJi) , упаривают в вйкуумё, . маскообразный остаток кристаллизуют . при охлаждении, и получают 6,21 г (81%) ВОС-Норвал-ОПФФ, т, пл. 60-62°С; R| .0,70; Id J,- -32,3 (с 1,0, да- океан). .; ; - -: .. : - .

Вычислено, %: С 50,14; Н 4/73; : : Р; 24,78, - ;-, (383.,32.)/....л : . . :, Найдено, %: с 50,Об; Н4,64;

v../--v--;;; -:::. ,.бз, -/ - Q

. Я-трет-Бути;1Оксикарбонил- 1.-норва- : .

лил-1 -а.опэрагил-р -Стрёт-бутилбвый / сложный эфир.).-Ь--фенйлаланй:н-анид, . : Раствор 1,68 г (5,0 NjMonb) Я- Асп-(О-.трет-.б:утил)-Фен-NHii в 10 мл ДМФА . .. в присутст.вии. О, ТО мл., (5 MWpJ-ib) три- .-

ЭтиламинаИ 2,12 г Т5 г.5/ммоль) BQC-.

НорваЛ ПФф выдерживают 4 ч, вдоари.аают & вакууме и .ма.олоо6разный оста. ток отверждают.-эфнроМт.-Получафт 2,3 г - (аб,:2%) вОС-Яорвал-Асп- (О-трет-бутил)-20 -фен-МН2/ т. пл. 1б 9-179С; R 0,65; 41,б (с 1,0, метанол)-.

-вычислено, %: С 60,65; Н 7,93; -. 10,48, / - : СгтЙд, N4,07 (534,64) .25

/ Найдено; .%: С 60,б0; Н 7,77;

.:.;;.:;;;.; . N 10,зз.

. Ь-Норвалигл-Ь-агспарагил-Ь-фенилала , ни..н-а.мйд-гидрохлорид,.

. :i,9Ci г (3,55 ) .ВОС-Норлей-Асп- 0 . -(6-трет-бутил)-Фен-NH 2 в течение Г ч обрабатывают 10 мл 4 н.срляноки:сяой . уКсусяой к.ислоты, упаривают и твердый остатсж после разбавления эфиром отфкльтровь1еа:1от. Получают 1,45 г (98,3%)35 . Я-Норвал-Асп-Фен-NH 2.HCl, т: разл. 204С; R 0,15 ,-. cL ,-15,0° (с « ;

1,0,ДМФА).; ... ,-....,.-.;;,,,,;..,:./ /; .

Н-трет-Бутилок.сикарбонил.-Ь-триптофил-L-норвалил-Ь-аспарагил-L-фенй ла.л . ййн-амид. . . ,,.....,..- . . .

Раствор 1,24 г (3,0 1чмрль):H-H.bpвaл.Дcгf- eн-Ш2 ЧС1 в. 1.5МП даФАв прИ.сутствии 0,84 мкп (6,0 ) триэтилГамйй.. И 1 20 г (3,0 ммоль) ВОС-Трп-О-Сук оста.вляют на ночь и. упаривают в вакууме,. Остаток отйерждают:водой, .0тфй льтрЪвйвайт бсадок, тшатёльно ; : прогАлваютводЬй, 2,.О есырЪгр продукта перекристаллизрвывают из 80%-ного .

. этанола (30 ,мл) и прлучают 1,47 г

(73,9%) вос-Трп-Нррвал-АспН&ен-К1Н2, . т. п:л. 207-208 0; к| 0., 35 ,,

-43,. (с: а 1,0, ДМФА).;.. .

-.Вычислено, %: С 61,, 43; Н 6,67;

V -. , .N 12,64. . . - 55

Cj H44Nfe08; (664,77).

Найдено, %: С 61, 37; Н .6,80; ; .. N 12,-57.: - - .;.: V

Ь- Трйп рфил-Ь-норвалил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланин-аш1д-гидрохлорид.йО

1,80 р (2,72 ммоль) BOG- рп-Яорва.л-Асп-4|ен-NH2 в присутствии 0,98 мл (14 ммоль) меркаптоэтанола обрабатывают кш. 4 Н.солянокислого диоксана. Спустя 15 мин упаривают в ваку- 65

уме, твердый остато.к. после разбавления эфиром отфильтровывают и получают 1,67 г (98%) Н-Трп-Норвал-АсптФен-NH -. HCI, т. пл. 202°С; Rf 0,25; -30,0 ° (с -. 1,0, ДМФА) . .

2-0-(трет-БутилоксикарбРниламиноркси)-прРпирнил-Ь-трипт6фил-Ь-норвалил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланин-амид

1,.55 г (2, 52 ммоль) Я-Трп-Яорвал-г-Асп-Фен-Ш2 ,НС1 в 20 мл ДМФА в присутствии If 06 мл (7, 56 ммоль) триэтиламина.и 1,14 г. (2,52 ммоль)- ВОС- -D-O-Ала-ОПХФ выдержкв.ают g теч.ение ночи, упаривают в ва.кууме, разбавляют водой,отфильтровывают осадок (2,,36 г), хроматЬграфируют его на ко..лрнне с сил:икагелем, гэлюируя .смесью раствррителей 10, и получают 0,82 г (43,4%) ВОС-0-О-Ала Трп-Яорвал-Асп )eH-NH2/ т. пл. 220-221°С; Rf° 0720; R| 0,30; W +13,7° (с 1,0, ДМФА).

.Вычислено:, %:, с 59,11; Н 6,57; N 13,04,:

Сз-,Н49К,0,о (751,85).. .

.Найдено, .%: .С 59 ,57 ; Н 6 , 70 ;

N 13,21.; . : .

Пентафторфен.илРвый эфир 2-L- (трёт-бутилрксикарбрниламино) -деканРвой

КИСЛРТЫ,

5,25 г (14,7 ммоль) .ВОС-Адек-ОН и 2,94 г (16,0 7Ф10ль) ЯО-ПФФ растворяют в 40 МП этиладетата, добавляют . 2V99 г (14,5. .ммоль) ДЦГКД прИ , .перем.ешивают 1 ч при ко.мнатной температуре, затем 1 ч при 0°С. Дициклогек.ситемРчевину Ртфильтровывают и фильтра упарйв;ают в вакууме. Маслооб.разный остатгок растворяют в 40 мл н-Тексана,, обрабатывают сначала 5%-ным pacTBPpoMj бикарбРна,тг1 натрия (5 х X 20 мл), затем водой (2 х 20 мл). Органическую фазу высушивают и упа-. ривают в вакууме. Маслянистьгй остаток кристаллизуют прй охлаждении. Йолучают 5,82 (87,5%) ВОС-Ь-Адек-рПФФ, т. пл. 45-4бС; R| 0,85; {оС} . -18, (с 1,0, диоксан) . .:

Вьачислено, %: С 55,63; Я 6,22; ::, . . ;-- -Р 20,95

. .NO, (434,45). .

Яайден.о, %: С 55,56; Я 5,96; .; : : ; :Р 20,89. . :

2-L-(трет-Бу.тйлРксикарбониламино) -деканойл-Ь-аспара.гил-}3- (трет-бутило.вый слржный эфир) -L-фенилаланин-амид. ; i;,0 г (3,0 ммоль) Я-Acп-(0-тpeт.-бyтил)-Фен--Ш2 .в 10 мл ДМФА в пpиcytствии 0|42 мл (2,0 ммоль) трйэтиламина ввойи во взаимодействие с 1 ,36 г 3,0 мйоль) feOC-L-Адек-ОПФф. Через 90 мин упаривают в вакууме. Остаток ртверждают эфиром, .отфильтровывают при рхлаж4ё:нйи и получают 1,65 г (90,8%) ВРС-Ь-АдеК-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-КН2, Т. пл.. 142-143°G; R| 0,70 И -32, (с 1,0, .ДМФА). Вычислено, %: С 63/55; Н 8,67; N 9,27. (604, 77) . Найдено, %s С 63,34; Н 8,70 N 9,26. 2-Ь-Аминрдеканоил-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланин-амид-гидрохлорил . . 1,45 г (2,39 ммсщь) вое-Ь Адек- -Асп-(О-трет-бутил) -Фен-SH2 обрабатывают 15 МП 4 Н.солянокислой уксусной кислоты. Через i ч уйари:ва т в вакууме, разбавляют эфиром, фильтру ют и получают 1,03 г (36,9%) Hr-lJ-Адек-Асп-Фен-Ща HCI, т. пл. 180- R|0,35; -.. -21,1 (с т , ),. -; : -. Ыс -трет-Бутилок(;йка| бонил- 1«НА-фо15мил-1.-триптофил-2-Егатно,цекаиоил-Ь-аспарагил-Г-фенилаланинг-аадд, К раствору 0,90 г (1,86 ммрль) Н-т-Ь-Адек-Асп-Фён-Шд. HCI и 0,93 Г (1,36 ммоль) ВОС-Трп-(фор)-ОПФФ в 15 мл ДМФА добавляют 0,52 мл (72 триэткгламина, Ыставлчют На «очи.; упа ривает в вакууме и остаток ртверждают водой. Фильтруют, осайок прозывают водой и эфирбм. Получают 1,20 г (87,5% ВОС-Трй-(фор)-Ь-Адек--Асп- ен -«Нг, т. Ш1. (разд1,У; IR| 0,45 ( -29,1 (с 1,0, ДРЙАП Вычислено, ii С я 7,14; - ..: NlbOZ - л .-- ,(1€2,88). С4оН54«бО. Найдено, 1 1: С 62,71; Я 7,14; М 11,06. L-Триитофил-2-Ь-аминодекаяоял-Ь-acпapat л-l: -фeнилaлaнин-a шдrадE oхлорйд.: 1,05 г {1,37 ммоль) BOfc- n-r(фор) -Ь-Адек-Асп-Фен-Ш2, в присутствий 0,49 мл 7,0 «моль) меркаптоэтанола обрабатывают 10 мл 4 и.солянокислого диоксана, черё 15 мин вьзйаривайг в вакууме, рстаток после разбавления эфиром отфильтровыва1Ьт я получают 0,91 г (99И Я-Трп-Ь-Адек-гАсп--Фенл«Н т. пл. (разл.) ; В j 0,40 -25,6 (с в 1,0, ДМФА). трет-БУтялоксикарбонилаМиноокси) -ацетял-11-тряптофил-2-Ь-амянодекан эИл-Ь-аспарагял-Ъ-Фенилалання-амйд. Раствор 0,85 г (1,22 ммоль) Н-Фрп -Хг-Адек-Асп- ен-ЫН HCI в Ю мл ДИФ в присутствия 0,51 мл (3,66 моль) тр этиламина во взаимодействие с 0,54 г (1,22 кввзль) ВОС -О-Гли-ОПФФ. На следу оцяй день упаривгвот в , остатрк отверждайт водой, отфильтровывают я промывают водрй и эф ром. 0,95 г сырого продукта очяадают на колонке с силйкагелем, элюируя сМЭсью растворителей 10, Элюат упа ривают и получают 0,43 г ВОС-О-Гли-Трп-Ь-Адек-Асп-ФеН-ЫН,, т. пл. 2162ПС (разл.); н| 0,35- Н| О 25/ -1ээ -18, (cV 1,0, ДМФА). Вычислено, %: С 60,95} Н 7/llf N 12,13. f, (808,01), CnHjjN.O. Найдено; %: С 60,92; Я 7,07; N 12,09, Ц р и м е р 13. Дентафторфениловый эфир 2-D-(трет-бутилоксикарбониланадно) -декаиовой кислоты; Аналогично примеру 12 получают BOC-D-Адек-ЧЭПФФ. Выход 75,0%; т. ПЛ. 45-4б С; R| 0,85) А р -ИВ, (с 1,0, диокеан). 2-D-(трет-Бутилоксйкарбониламиио)-aминoдekaиoнлrL-acпapaгил-p-(трет-бутиловый эфир) -фе нйлаланин-амид, 1,20 г (3,37 ммоль) Н-Асп-(О-трет-бутил) в 10 мл ДМФЛ в присутствии 6,49 мл (3,5 ммрль) триЭТИЛ амина вводя во взаимояевствие с I,44 г (3,5 ммоль) ВОС-р-Адек-ОПФФ. На следующей день смесь упаривают в вакууме и остаток после разбавления диизопропиловьм эфиром отфильтровывают. Получают 1,26 г (61,8%) ВОС-р-Адек-Асп- (О-трет-бутил) -Фен-Ы / Т. пл. 1б8-1ГО С; R 0,80 W-n - -36,9 (с « 1,0, ДМФА). Вычислено, %: С 63,55; Я 8,67; . - - - / .N. 9,27. , (604,77). C32«52%02 Яайден.о; 4 С 63,70; Я 8,80; N9,52. 2-ЧЭ-Амииодекаирил-Ь-аспарагил-Ь-фенялаланий-амйд-гидрохлорид . 1,10 г (1,-82 ||оль) BQC-D-Адек-АСПV-(o-TpeT-6yTim)- eH-IJH2 обрабатывают 12 мл 4 н.солдаокислЪй уксусной кислоты. Через 1 ч упаривают в вакууме и твердый остаток после раэбавления эфиром отфильтровывают. Получ:;ают 0,87 г (99%) Я-О-Адек-Асп-ч ен-МЯ,, НС т. пл. 198-200 С; R 0,50) (otj -76,1 (с 1,0, ДМФА). ы-трет-бутгилоксякарбрнил-Ь триптофял-2-Ь-аминодвканоял-1.-аспарагял-L-феяилалаинй-амяд. о,80 г (1,65 ммоль) Я-D-Адёк-Асп-Фен-МНз в 10 мя flrtKA в присутствия 0,70 мл (5,0 оль) трйэтяламина ввол in -. /с л ..:- ::-.:-. - дят во взаямодействиё с 6,80 г (1,70 ммоль) вое-Трп-ОПФФ. Да следуючшй день упаривают в вакууйё, остаток при охлаждения ртверждают эфиром, отфJ.ppQJgУJgзJ J фильтровывают и промывают эфирен, затем слабо .подкисленной уксусной кислртой, и, нако1яец, чи ст ой водой. Получают 1,01 г (83,8 i) вое-Трп-1 -Адек-Асп-Фен-ЫНг, т. пл. „ (разд.); н| 0,50 Ш-д -55,6 (с 1,0, ДМФА). Ь-Трип3: эфил-2-В-аминодеканоил- а-аспара1Гил-Ь-фа1ялаланин-а1дад-гидроклорид. 0,90 г (1,22 ммоль) BOC-Tpn-D-Адек-Acii- eH-NHj в присутствия 0,43 мл (6,1 моль) меркаптоэтаноиа рбрабать вают 10 мл 4 н.соляяо1сяслрго дяоксана. Спустя 10 мин упаривают в вакууме и получают 0,75 г (91,4%) Н-Трп- -О-Адек-Асп-ФеНЧ НаHCI, Т. пл. 205ЗОТ С (разл.); Rr 0,45 toU-p -23 (с 1,0, .A), (трет-БутилЬксикарбрнидаминрокси) -ацетил-Ь-триптофил-2-О-аминодеканоил-Ь-аспарагил-Ь- -фенилаланинашя. 0,69 г (1,02 ) Н- Трп-О-Адек-Асп-Фен-NH/i HCI в 10 мл ДОФА в присутствии 0,42 мл (3,О ммоль) триэтил амина вводят во. взаимодействие с 0,45 г (1,10 ммоль) ВОС-О-Гли-ОПХФ. На слеяуюинй день вьшаривают в 1закуyiMe, остаток ртверждзют водой, отфил трозвывают, промывают сначала эфиром зат.ем водой. 0,6 3 г продукта хр оматоградируют на колонн:е, элюируя, сме сью ра створит ел ей 10., Получает 0,45 г ВОС-О-Гли-Трп- 2-1 -Адек-Асп-Фен-КНз, Т. пл. 162-155 С . (разл.) ,40/: fkn К5 О-бО рЛ°0.401 feff2 а- -ЛТлв R| 0,60 (с 1,0, ДМФА). Вычислено, % С 60,95; Н 7,11; N 12, 13. (808,01). ,NO,o Найдено, %; С 60,71; Н 7,20; N 12,12. Формула изобретения Способ получения пептидов общей формулы . А-Трп-В-Асп-Фен-МНУ, где А. - Н-О-Гли, ВОС-О-Гли; BOC-D-O-Ала, ВОС Ь-чэ-Ала, ВОС-р-Ю-Ала; В - метионил, лейцил, норлейцил, норвалил, 2-аминодеканоил; о У - водород или О-Гли-ОН, или их уксуснокислых солей, от л и ч.а ю щ и и с я тем, что тетрапептиды общей формулы Н-Трп-В-АсП-Фен-ННУ, где В и У имеют указанные выше значения; подвергают взаимодействию с,соединениями общей формулы -А - X,-где А - как указано выше; , . пентафтор- или пентахлорфеноксигруппа, с последующим вьщелением цел-еворо продук.та в свободном виде или в виде уксуснокислой соли. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. о. .Nyeki, т. Szirtes, J. Shou. Die Verwendung von Pent.afluprphenylestern beiPeptidsynthesen, Justus liebigs arinalen. der Chemie, 1973, Ifeft, S. 1421.. .