Способ получения протеолитического фермента Советский патент 1980 года по МПК A61K38/48 C12N9/48 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА

Изобретение относится к производству ферментов и предусматривает -использование нового источника протеолитических ферментов при комплексной переработке сырья (пшеничные отруби) в промышленности микробиологического синтеза. Пшеничные отруби широко используются в. качестве пиуательной среды при культивировании микроорганизмов. Способ позволяет предварительно выделить из отрубей собственные протеолитические ферменты. Получаемый предлагаемым способом препарат протеолитического фермента может применяться в пищевой, медицинской и микробиологической промышленности, а также лабораторной и медицинской пра ктике. Высшие растения используются для получения разнообразных ферментов и белковых препаратов. Так, из пшеничных отрубей получают фермент -амилазу посредством экстрагирования отрубей пшеницы ВОДОЙ 1. Известен также способ выделения протеолитических ферментных препаратов из семян пшеницы, заключающийся в экстрагировании на холоду семян пшеницы буферным раствором пирофос|фата натрия (рН 7,0) с последующим центрифугированием и высаливанием Протеолитических ферментов сульфатом аммония 2. Этот способ позволяет выделить кислые протеазы с оптимумом действия при рН 3,8. Их активность в непроросшем зерне пшеницы очень мала. Способ имеет чисто научное значение и предназначен для изучения свойств этих ферментов. Способ не предусматривает получения фермента в значительных количествах для практического использования. Целью изобретения является получение высокоактивного препарата протеолитического фермента, имеющего оптимум действия при рН 6,3-6,7, для использования в пищевой промышленности и медицине; и расширение сырьевой базы. Это достигается тем, что в качестве сырья используют пшеничные отруби и экстракцию фермента проводят 0,150,75%-ньм раствором соды с последующим осаждением путем подкисления экстракта кислотой до рН 5,3-6,0. Предпочтительно процесс проводят следующим образом; пшеничные отруби экстрагируют 6-10 вес.ч. 0,15-0,30%-ного раствора соды в течение 3-5 мин при интенсивном перемешивании или пу64тем настаивания в диффузорах в течение 30-40 мин с последующим прокачиванием раствора соды черезбатарею диффузора. После центрифугирования или фильтрования экстракта фермент осаждают, подкисляя экстракт кислотой до рН 5,7/ Полученный осадок высушивают в сублимационной сушилке. Использование предлагаемого способа позволяет получить из дешевого сырья новый ферментный препарат. При этом все отходы производства (оставшиеся после экстракции и осаждения фермента отруби и жидкость) могут использоваться для приготовления питательных сред на предприятиях Микробиологического синтеза. Способ позволяет, более рационально и комплексно использовать пшеничные отруби в про;мыаленности микробиологического синтеза. Пример 1. 80 г отрубей рагируют 0,8л раствора соды 0,25%-йой концентрации„при интенсивнее пе ремешивании (до 3000 .об/мин) в течение 3 мин при 20°С. Суспензию центри руют прм 4000 об/мин, и 400.мл центрифугата используют для осаждения фермента. Для этого центрифугат подкисляют лимонной кислотой до рН 5,7. Протеолитические фермеьты полностью переходят в осадок. Надосадочная жид кость не обладает ферментитивной активностью. Осадок отделяют на центри фуге и высушивают в вакуумсушильном шкафу при ксялнатной температуре. Выход сухого препарата 3,6%, его активность 3 мг тирозина в 1 мин на 1 препарата при использовании в качест ве субстрата О,5%-ного раствора бычьего альбумина. Пример 2. Экстракцию пшенич ных отрубей провсадят в диффузорах ем по 250 л. В диффузор загружат 40 кг отрубей и заливают их 0,30%ным раствором соды с температурой . При периодическом перемешивании, экстракция продолжается 40 мин. Для удаления грубых взвешенных частиц экстракт пропускают через марлю и направляют в сборник. Фермент осаждают путем подкисления раствора лимонной кислотой (в другом варианте соляная кислота) до рН 5,7. Образовавшийся осадок отделяют от жидкости на сепараторе и высушивают в сублимационной сушилке. Выход ферментного препарата 7,75% с активностью 1 мг тирозина в 1 мин на 1 г препарата. Высокий выход препарата связан с большим содержанием балластных веществ, поскольку перед осаждением фермента не проводилось центрифугирование экстракта. Формула изобретения Способ получения протеолитического фермента из пшеницы путем экстракции и осаждения, отличающийс я тем, что, с целью получения высокоактивного ферментного препарата и расширения сырьевой базы, в качестве сырья используют пшеничные отруби, экстракцию фермента осуществляют 0,15- 0,75%-ным раствором соды, а осаждение - подкислением экстракта кислотой до рН 5,3-6,0. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Патент ФРГ 1792362, кл. С 07 G 7/022, опублик. 1973. 2.Береш И. Д. Исследование протеолитических ферментов проросшего зерна пшеницы. Автореф. дис, на соиск. учен. степени канд. биол . наук. Москва, 1972.