Способ обработки эритроцитов Советский патент 1979 года по МПК A61K35/18 

1

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для получения эритроиитарных диагностически/ч препаратов.

Известен способ обработки эритроцитов для получения эритроцитарных диагностикумов путем отделения эритроцитов от сыворотки кров1 с последуюпщм их отмыванием и формалинизацпей.

Однако известный способ не обеспечивает высокой адсорбционной способности, высокого выхода и стабильности целевого продукта.

Целью изобретения является повышение адсорбционной способности, увеличение выхода и стабильности целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что в процессе отмывания эритроцитов удаляют эритроцитарную строму и сывороточные липиды путем адсорбции на инертном материале.

Кроме того, в качестве инертного Л1атериала исиользуют целлофан.

Способ осуществляют следующим образом.

Свежие эритроциты берут из яремной вены барана в банки емкостью 800-1000 мл до объема 400-500 мл с постоянным помещиванием в течсппе 9-10 мин. Перед взятием крови в банки помещают стеклянные бусы диаметром 3-5 мм. После получения

кровь фильтруют через 1-4-слойные марли и отмывают на центрифуге со скоростью 2-2,5 тыс. об/мин в течение 10 мин 4- 5 раз 3-5-кратным объемом раствора N° 1 (состав: на каждые 10 л физиологического раствора рН 7,2 добавляют 2л 1,15М фосфатного буфера рН 7,2 с содержанием 0,85% NaCl). Раствор фильтруют через стеклянный фильтр Лд 5 и используют

охлажденным до 4-10°С. Надосадочную жидкость выливают, а отмытый осадок осторожно смещивают с остатком раствора и переливают в другой чистый центрифужный стакан. Оставшиеся на дне стакана тяжелые белки (серая пленка на дне стакана) удаляют раствором № 1. Эту операцию иовторяют несколько раз до полного отмывания эритроцитов. Отмытые эритроциты ресуспендируют до 50%-ной концентрации

растворо.м № 2 (раствор готовят так же, как раствор Л 1, но вместо 2 л буферного раствора добавляют 5 л).

Используемый формалин нейтрализуют 1 М ХаСН до рН 7,2.

Формалпппзацию эритроцитов проводят в пятиметровых стери.льиых банках. Отмытую ресуспендированихю свежую кровь (50%-ную) разводят 4 раза раствором № 2 (зал 1вают 2,2 л).

Нейтральный (с содержанием 0,85% NaCl) формалин в объеме 800-850 мл (в зависимости от процентного содержания) заливают в целлофановые мешки, которые находятся внутри банки, и герметично закрывают. Банку шуттелируют, встряхивают при 18-22°С в течение 16 ч. Через 2 ч банку вскрывают и образовавшуюся пену (липиды) тщательно удаляют механически. Затем края банки протирают стерильной салфеткой. Через 8 ч от начала процесса мешок прокалывают в трех местах на равном расстоянии по вертикали. Банку вновь закрывают и продолжают встряхивание в течение 6 ч. Операцию удаления липидов за это время повторяют 3 раза. После этого целлофановые мешки разрывают и удаляют, а в банку помеш,ают идентичный свежий целлофан (смоченный в растворе № 2). Операцию удаления липидов повторяют еш,е 4 раза с интервалами по 2 ч и каждый раз меняют целлофан. Снятие пены и смена целлофана дают возможность полностью удалить липиды.

Шуттелирование длится всего 16 ч. Во время встряхивания целлофановый мешок сорбирует на себя липиды и тем самым исключает их попадание на поверхности субстрата.

Консервированные эритроциты фильтруют поочередно через 1-4-слойные марлевые стерильные фильтры и отмывают раствором № 1 в таких же условиях, как и для свежих эритроцитов. Процесс отмыва649434

ния заканчивают тогда, когда надосадочная жидкость становится прозрачной и бесцветной. Осадок стандартизируют, ресуснендируют раствором № 2 (с содержанием 0,4% формалина рН 7,2) и переливают в мерный цилиндр до удваивания объема осадка (судят по расходу раствора № 2 и полученного объема) или 50%-ной концентрации.

Готовый продукт разливают по 50 мл в стеклянные флаконы, герметично закрывают резиновой пробкой и хранят при 4-10°С. Предлагаемый способ позволяет повысить адсорбционную способность и увеличить выход целевого продукта с 50-60% до 90-95% с длительным сроком годности.

Формула изобретения

1.Способ обработки эритроцитов для получения эритроцита рных диагностикумов путем отделения эритроцитов от сыворотки крови с последующим их отмыванием и формалинизацией, отличающийся тем, что, с целью повышения адсорбционной способности, увеличения выхода и стабильности целевого продукта, в процессе отмывания эритроцитов удаляют эритроцитарную строму и сывороточные липиды путем адсорбции на инертном материале.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве инертного материала используют целлофан.