Штамм 129-продуцент гуанилрибонуклеазы Советский патент 1979 года по МПК C12K1/02 C12D13/10 

365 Ma нитрозометилмочевиной в концентра ции 1% в течение 2ч. Полученный мутант Actinomyces aureoverticillatus 129 проверен по ферментативной активности при хранении и пересевах на агариэированной питательной среде следующего состава (%): мука пшеничная, гидролиэованная об-амилазой, - 3, растворимый крахмал, гидролизованный -амилазой - 4, сульфат аммония - 0,6, калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,05, мел - 0,6, калий хлористый - 0,25; агар-агар 2,0. Культивирование штамма 129 в глу бинных условиях проводили на жилкой питательной среде того же состава, только без агара. Рост штамма Actinomyces aureoverticillatus,129 на указанной среде в условиях глубинного культивирования на качалке при 180 об/мин и 28-30 С очень интенсивный, штамм имеет вид густой кашеобразной массы Максимальное образование фермента в культуральной жидкости наблюдается после 72 ч . культивирования продуцента. Общая РНК-азная активность, определяемая спектрофотометрическим методом по измерению поглощения кис лоторастворимых продуктов распада РНК (б мг/мл), составляют 25-30 тыс ед/мл фильтрата культуральной жидкости, при этом активность гуанил-Р азы после прогрева в кислой среде составляет 22,50 - 27,60 тыс ед/мл Показатели активности исходного шта ма не превышают 10-13 тыс. ед/мл. Полученный штамм имеет следующую характеристику. Морфологические признаки. Твердая среда, содержащая осахаренные of. -амилазой пшеничную муку и крахмал, соли. Мицелий имеет вид очень тонких, разветвленных гиф. Сте ки клеток мицелия прякйле. Шрияа клеток мицелия варьирует от 0,71 до 0,93 мкм. Спороносцы с примитивными спиралями с 0,5 - 1 завитком, длинные или короткие, расположены моноподиально. Споры продолговатые , овал ные, с гладкой оболочкой. Культурально-физиологические признаки. При выращивании на такой среде колонии мутантового штамма Actinomyces aureoverticillatus 129 круглые, края волнистые, с радиальной складчатоетью кремового цвета, в центральной части слегка приподнятые над субстр том со СКУДНШ14 BOSAyuiHbDvi мицелиём розового цвета, дааметр гигантской колоний на 10 сутки роста 10-12 мм. Нижняя поверхность колонии гладкая, красного цвета, среда не буреет, пигмент,в среду не выделяется, на агаризированной среде Чапека с 3% сахарозы колонии круглые, оранжевого цвета, колонии волнистый, с радиально-поперечной складчатостью, воздушный мицелий слабо развит, светло-морк-овного цвета, диаметр колонна 8 мм. На крахмал-аммиачной среде колокии круглые, малинового цвета, поверхность бархатистая, диаметр колонии 6-8 t.iM, среда не окрашена. На МПА образует небольшие колонии кремового цвета диаметром 6 NIM с радиальной складчатостью, воздушный мицелий скудный,.неокрашенный, не буреет. На сусле-агаре образует маленькие колонии диаметром 5 мм, поверхность бугристая, воздушный мицелий слабо развит, в центре розового цвета,по краям - кремового. На картофельно-пептонном агаре образует колонии оранжевого цвета диаметром 12 мм, воздушный мицелий розового цвета, край волнистый, поверхность бархатистая, вокруг колонии образуется бурое кольцо. На пептонно-кукурузном агаре растет в виде небольших колоний (7 мм) бежевокремового цвета с радиальной складчатостью, скудный воздушный мицелий, среда не буреет. На ломтике моркови рост отсутствует; на ломтике картофеля рост очень слабый; мясо-пептонную желатину разжижает в верхнем слое, Молоко не свертывает и не пептонизирует. Нитраты не восстанавливает. Отношение к углеводам: крахмал гидролизует интенсивно. Глюкозу и фруктозу гидролизует с образованием щелочи, остальные сахара - с образованием кислоты. Предлагаемый штамм Actinomyces aureoverticillatus 129 позволяет получить внеклеточную РНК-азу микробного происхождения, используемую в пищевой промышленности для улучшения вкусовых достоинств Пищевого белка. При этом активность штамма. Acti- nomyces aureoverticillatus 129, продуцирующего внеклеточную гуанил-РНКазу, составляет 25-30 тыс. ед/мл, что в 2-3 раза выше, чем у исходного. Формула изобретения Actinomyces aureoverticil- latus 129 - продуцент гуанилрибонуклеазы. Хранится в коллекции ВНИИГенетики и селекции промышленных микроорганизмов, №373. Морфологические признаки. Мицелий на твердой питательной среде, содержащей осахаренные сэС -амилазой пшеничную муку и крахмал, соли, имеет вид тонких, разветвленных гиф. Стенки клеток мицелия прямые, шириной 0.,71-0,93 мкм. Спороносцы с примитивными спиралями с 0,5 - 1 завитком, длинные или короткие расположены моноподиально. Споры продолговатые, овальные с гладкой оболочкой. Культурально-физиологические признаки. На твердой питательной среде, состо щей из осахаренной оС -амилазой пшеничЕ1ой муки и крахмала, а также соли, колонии круглые, кремовО1 О цвета, край волнистый, с радиальной складчатостью. Мицелий воздупишзП, развит слабо, розового цвета. Диаметр гигантской колонии на десятые сутки роста 10 - 12 мм. Ниж няя поверхность колонии гладкая, красного цвета. Среда нэ буреет, пигмент в среду не выделяется. Агаризированная среда Чапека с 3 сахарозы. Колонии круглые, оранжевого цвет край колонии волнистый,с радиальнопоперечной складчатостью.воздушный мицелий слабо развит, светло-морков ного цвета, диаметр колонии 8 . Крахмало-аммиачная среда. Колонии круглые,малинового цвета,по верхность бархатистая,диаметр колон 6-8 мм, среда не окрашена. Мясо-пептонный агар. Колонии небольшие, кремового цвета, диаметр 6 мм, с радиальной складчатостью. Воздушный мицелий скудный не окрашенный, среда не буреет. Сусло-агар. Образует колонии диаметром 5 NLM, поверхность бугристая, воздушный мицелий слабо развит,в центре розового цвета, по краям- кремового. Картофельно-пептонный агар,, Колонии оранжевого цвета, диаметр 7 12 мм, воздушный мицелий розового цвета, край волнистый, поверхность бархатистая, i OKpyr колонии образуется бурое кольцо. Пептонно-кукуруэный агар. Колонии небольшие, диаметр 7 мм, бежево-кремового цвета, с радиальной складчатостью, воздушный мицелий скудный. Среда не буреет. На ломтике моркови рост отсутствует. На ломтике картофеля рост слабый. Мясо-пептонную желатину разжижает в верхнем слое. Молоко не свертывает и не пепто-. визирует. Нитраты не восстанавливает, Отношение к углеводам. Крахмал гидролизует интенсивно., Глюкозу и фруктозу гидролиэует с образованием щелочи, остальные сахара - с образованием кислоты. Активность шта1чма Actinomyces aureoverticillatus 129, продуцирующего внеклеточную гуанил-РНК-азу, по сравнению с известньвии в 2-3 раза выше и составляет 25-30 тыс. ед/мл. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Авторское свидетельство СССР № 412249, С 12 D 13/10, 1972. 2.Прикладная биохимия и микробиология, т. 12, вып. 5, с. 645649, 1976.