(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА /3-ГА ЛАКТОЗ ИДА ЗЫ
получая нативные растворы с активнотью 3,0-4,0 ед/мл.
Затем из нативного раствора вылеляют ферментный препарат путем сорбции на высокодисперсном карбоксильном катионите КМТ с размером зерна мкм, промывки и десорбции цитратным буфером,
В процессе сорбции нативный раствор подкисляют 50%-ной уксусной кислотой.
Далее проводят ультрафильтрацию раствора через ацетатцеллюлозную мембрану с размером пор 80-150 А при рН 4,2-7,0 с последующей лиофильной сушкой.
Пример. Культивирование продуцента /i -галактозидазы проводят в глубинных УСЛОВИЯХ на комплекной питательной среде состава,%; соевая мука -2,0; лимонная кислота 1,5 К2,НР04.- 0,4; ( 0,2;
Ксе - 0,05; 0,015; адеканоль, пропинал - 400, 0,04; соляная кислота до ph 2,9. Культивирование проводят в 100 л ферментере с перемешиванием при 280-350 об/мин, поДачей воздуха в количестве 1 объем/
объем среды в мин при 28± 1°С в течение 72-96 час.
В процессе ферментации в течение первых 48 час происходит интенсивное потребление лимонной кислоты, повышение рН среды и биосинтез фермента р -галактозидазы. Ферментация заканчивается при рН 4,7-5,2, активность фермента в среде 3,0-4,0 ед/мл, содержание лимонной кислоты - 2,05,0 мг/мл.
Сравнительная характеристика процесса биосинтеза jb - галактозидазы на известной среде и предлагаемой приведены в табл.1.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ получения ферментного препарата @ -галактозидазы | 1979 |
|
SU891776A1 |
| Способ очистки -амилазы | 1977 |
|
SU696024A1 |
| ШТАММ STREPTOMYCES GRISEOCARNEUS SUBSP. BLEOMYCINI ВКПМ-S1086 - ПРОДУЦЕНТ БЛЕОМИЦЕТИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА БЛЕОМИЦЕТИНА | 2007 |
|
RU2358008C2 |
| ШТАММ ДРОЖЖЕЙ YARROWIA LIPOLYTICA - ПРОДУЦЕНТ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ И СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЦИТРАТА НАТРИЯ | 1996 |
|
RU2090611C1 |
| Штамм гриба @ продуцент @ -галактозидазы | 1987 |
|
SU1509402A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ ИЗ РАСТВОРОВ ЩЕЛОЧНЫХ ЦИТРАТОВ | 1998 |
|
RU2191828C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНСУЛИНА ГЛАРГИНА | 2008 |
|
RU2495131C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВНЕКЛЕТОЧНОГО ЛЕКТИНА | 1991 |
|
RU2027763C1 |
| Способ получения гиалуронидазы | 1990 |
|
SU1723121A1 |
| Способ получения 7-( - -аминофенилацетамидо)-дезацетоксицефалоспорановой кислоты (цефалексина) | 1972 |
|
SU579901A3 |
г1итательная среда не содержащая соевых шрот (данныё 10 операций)
Выделение и очистку фермента проводят путем сорбции его на высокодисперсном катионите - смоле КМТ и дисперсностью 20-40 мкм, взятом в количестве 40 г, на трехступенчатой цинтрифуге, при этом подаваемую через за рузрчное устройство жидкость последовательно фильтруют через 3 слоя смолы. Смолу готовят путем последовательной ее обработки 1 н соляной кислотой, дистиллированной во72
1,83
7,0
дой/ 1н NaOH в 2 н NaCe,a затем 2 н NaCS и 0,5 М адетатным буфером при рН 3,7.
Сорбцию проводят из нативного раствора объемом 13,5 л, при этом сорбируется 73-75% фермента от общего его содержания в нативном растворе.
Результаты сорбции /5 -галактозидазы из нативного-раствора приведены в табл.2.
После сорбции смолу промывают 1 л 0,033%-ной уксусной кислоты (рН ) и-дистиллированной водой,
Уксусная кислота 0,033%, рН 3,5
Десорбцию проводят 0,1 М Na цитратным буфером прискорости 0,5 л/часа, при этом снимают 97,8% |i-галактозидазы (65,5% белка от сорбированного количества).
При. этом достигается концентрирование в 18у4 раза.
Таблица2
Данные анализа промывки смолы после сообщения, приведены в 30 габл, 3.
Таблица 3
Буро-желтый
цвет(цвет исходного
нативного pacTsopaСодержание белка в высокоактивных фракциях 9,7% от общего количества в исходном нативне растворе или 35,5% от сорбированного белка.
Данные десорбции /Ь - галактозидазы приведены в табл.4.
