Способ получения ферментного препарата гигролитина Советский патент 1979 года по МПК C12D9/14 C12D13/10 

I- .. -. . Изобретение относигся к медицинской промышленности, в частности к производству ферментов медицинского назначения. Известны способы получения прогеолити чес кого фермента гигроли тина, однако этими способами нельзя получать хорошо очищенный препарат с достаточно высоким выходом. Известен способ получения гигролитина из фильтрата культуральной жидкости Асtinomyces hygrnjbcopiciiS предусматривающий обработку фильтрата сульфатом аммония, после чего полученный осадок растворяют в воде и осаждают охлажден.ным апегоном, осадок отделяют и растворяют в водном растворе охлажденного, ацетона, осаждают целевой продукт 1О объемами ацетона и последовательно очищают хроматографией на сефадексе типа Г-75, ДЕАЕ А-50 и Г-15, при этом очистку фермента проводят в пр сутствии О.001 моль раствора хлористого кальция tl.,. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ получения антигельминтного антибиотика гигромицина, предусматривающий культивирование продуцирующего его фермента на питательной среде, согласно которому от культуральной жидкости последовательно отделяют мицелий, ионы кальция в виде фосфатов, гигромицин В сорбцией на .катионите, .гйгролитин Еысалива1Ьт сульфатом аммония, переосаждают низшими спиртами, обрабатывают активированным углем и лиофильно высушиварт. Общий, гигролнтина 5-6%, ахтивность 2 ПЕ/мг препарата 2. Цель изобретения - разработка направленного биосинтеза гигролитина, сокращение длительности технологического процесса, повыщение выхода и улучшение качества целевого продукта. . Для достижения поставленной цели культивирование проводят при 31-33°С в течение 72-108 ч, высаливание фермен та ведут после отделения мицелия дополнительным введением хлористого кальция в количестве 0-,5-1% от его объема, после чего осушествляют удаление примесей эквивалентным количеством целиюлозы и алюмоаммонийных квасцов при рН 4,8- 5,0, при этом гнгромицин удаляют непосредственно перед сушкой препарата. Способ осушествляют следующим образом. Процесс ферментации Actinornyces Иу PeSCOpicu проводят в аппаратах емкостью 2 ОО О л на среде известного состава при температуре 31-33 С, аэрации 0,4 об/об среды в 1 мин, в течение 96 ч Протёолитическйч активность культураль.ной жидкости достигает 35 ПЕ/мл, содер жание гигромицина Б 70 ЕД/мл. Полученную культуральную жидкость фильтруют, затем к 100 л фильтрата добавляют 60% сульфата аммония и 5-1% хлористого кальция в виде раст вора, при температуре 5 С. Выход ферме та на стадии высаливания 9О%. Осадок pacTBOpsnoT в воде, активность раствора ЗОО ПЕ/мл. К раствору гигролитина добавляют целлюлозу (в виде 2%-ного раст вора в количестве 0,3%), с эквивалентным количеством алюмоаммонийных квасцов, при значениях рН реакционной смеси 4,8. После отделения целлюлозы раствор фермента разбавляют дистиллированной водой до 100 ПЕ/мл, добавляют активированный уголь марки ОУ в количестве 3%, рН раствора устанавливают 7,О. Пос ле отделения угля экстракты пропускают через карбоксильный катионит или КБ-4П2 для удаления возможных следов гигромицина Б и лиофильно сушат. Общий выход фермента с активностью -5 ПЕ/мл составляет 30%, считая на ативный раствор, Формула изобретения 1. Способ получения ферментного препарата гигролитина, предусматривающий культивирование продуцирующего его фермента на питательной среде, отделение мицелия и ионов кальция, сорбцию сопутствующего фермента гигромицина на карбоксильных катионитах, высаливание фермента сульфатом аммония, переосаждение его, обработку активированным углем и сушку препарата, отличающий- с я тем, что, с целью обеспечения направленного биосинтеза гигролитина, сокращения процесса его получения и повышения качества целевого продукта, культивирование проводят при температуре 3133 С в течение 72-108 ч, высаливание фермента ведут после отделения мицелия и осуществляют удаление примесей эквивалентным количеством целлюлозы и алк моаммонийных квасцов при рН 4,8-5,0, при этом гигромицин удаляют непосредственно перед сушкой препарата. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что при высаливании фермента в нативный раствор вводят хлористый калышй в количестве 0,5-1% ot его объема. Источники информации, принятьге во внимание при экспертизе 1.Авторское свидетельство СССР № 5О7058, кл. С 12 D 9/14, 1972. 2.Авторское свидетельство СССР № 508074, кл. С 12D 9/1О, 1970.