Способ получения кристаллической гуанил-рибонуклеазы Советский патент 1978 года по МПК C12D13/10 

(54)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОЙ ГУАНИЛРИБОНУКЛЕАЗЫпри диализе против кислого разбавленного буфера, кристаллы фильтруют и растворяют в буфере с рН 7,5 и затем проводят повторную перекристаллизацию (путем диализа. Пример. Гриб AspergiEEus c Pavcutus № 2654/4 выращивают глубинно в колбах на качалках при 190 об/мин и на среде следующего состава (в %): глюкоза - 5,0, пептон - 1,0, соевая мука - 0,5, Нб Оц-ТН О - 0,05, СаСЕ,,2Н2О - 0,01, KHOj - 0,2. Продолжительность выращивания при посеве од односуточным инокулюмом 3-4 суток. Мицелий отделяют фильтрованием, белки кативного раствора концентрируюг высаливанием 0,9 насьлценным сульфа том аммония в 50-100 раз (после осаждения проводят отделение осадка центрифугированием при 5000, растворяют риказу в 0,1 М буфере, рН 7,5 и удаля ют нерастворившийся осадок центрифуги рованием) . Затем Проводят хроматогра.фию на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой в у фере с нейтральным рН, элюцию проводя градиентом NaCE в исходном буфере. Повторную хроматографию проводят в тех же условиях.Элюат, содержащий ри бонуклеазу, концентрируют с помощью высаливания сульфатом аммония или ультрафильтрацией, затем проводят гел фильтрацию, на сефадексе ( Q - Q,i5 или 100) в буфере слабощелочного рН. Фермент кристаллизуют при диализе против кислого разбавленного буфера, кристаллы отфильтровывают и растворяют в буфере с рН 7,5, затем перекристаллизовывают при тех же условиях Предлагаемый способ получения Кристаллической гуанил-рибонуклеазы позволяет при использовании отечественного продуцента повысить выход и чистоту целевого продукта, который может быть применен при изучении структуры РНК и белка и механизма действия рибонуклеазы. Формула изобретения Способ получения кристаллической гуанил-рибонуклеазы, предусматривающий культивирование ее продуцента на питательной среде, выделение фермента из фильтрата культуральной жидкости, хроматографию препарата, содержащего фермент, элюирование фермента, повторную хроматографию, высаливание сульфатом аммония, освобождение-от примесей и Кристаллизацию фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта, в качестве продуцента фермента используют Aa-per-g EBu э cEavatus № 2654/4, а кристаллизацию осуществляIOT диализом против кислого разбавленного буфера с последукяцей фильтрацией кристаллов, их растворением в буфере fj повторной перекристаллизацией путем диализа. Источники информации, принятые вс. внимание при экспертизе: l.Mittato C yfoiaBEisation of TJibonueЕеаье Tj-Jout niaE of Biochemibtr-y № 5, 59, 1966, p. 443-448.