Способ получения протеина Советский патент 1979 года по МПК C12D13/06 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕИНА

Изобретение относится к области микробиологического синтеза и касается техники получения . Извест.ен способ получения протеи на путем выращивания продуцирующих его микроорганизмов рода yHeihyfomonos на питательной среде, содержащей источник углерода, азота и. необходимые минеральные соли в условиях аэрации с последующим отделением це левого продукта 1. Указанный известный способ является наиболее близким решением к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому резу тату. Недостатком известного способа является невысокий выход протеина. Целью изобретения является увеличение выхода протеина. Это достигается тем, что в предлагаемом способе получения протеина в качестве продуцента микроорганизмов из рода eihijiomonas используют штамм etfiy/omonas Sp.РЕЯЛ Р-2400. ПРИ этом в качестве основного ис точника углерода используют метан, а в качестве дополнительного источн ка углерода - дрожжевой экстракт ил пептон. Новый штамм /Aeihijiomonas sp. FER/Л Р-2400 получен в Исследовательском институте ферментации Японии (Fermentotion Research :Jnstrtute,AgefK.i/of Ludusfnai Science and TechnoloQij for- Industrlai Trade, Chiba,3af}an ) при культивировадии в присутствии метана в качестве.Д нственного источника-; углерода в неорганической жидкой среде при встряхивании и температуре ЗОс за 18 часов.; Морфологические признаки..Одноклеточные палочки 1,0-1,2х 2,0-3,5, передвигаются с помощью полярного жгутика, гракмотрицательные, но. иногда клетки частично положительно окрашены на ранней стадии роста. |Иногда образуются разетки. Споры или кисти не образуются. Культивирование на неорганическом косом агарев среде/ состоящей из метана в качестве единственного источника углерода за 24 часа. Палочки, иногда проявляющие плеоморфизм, размер 1,0-1,2x3-6, Клетки склеиваются одна с другой вязкими веществами иногда наблюдаются в разветвленной форме. Гранулированные вещества, легко окрашиваемые Суданом черным, наблюдаются в клетках, споры и кисти не образуются. Вид агаро-агаровых колоний. Куль т.ивируется на чаше с неорганическим агаром в присутствии метана 16 дней диаметр 1,0 мм, круглый, плоский гладкий, сплошной, маслянистый, цве от белого до темно-желтого, непрозрачный, йе образует растворимого пи мента. Питательная чаша с агар-агаром. . Не развивается. Физиологические признаки. Катализа-полижительный, оксидаза-полож тельный, у молодых, культур -оксида ная активность, которая легко теря ся у более взрослых культур. Нитрат восстанавливается-в нитрит. Оптимал ная температура роста , при 40°С роста не наблюдается. Оптимальный рн роста составляет 6,0-7,5. Аэробный. ; Метанол и этанол не использует. Формальдегид и ацетальдегид не испо зует. Метиламин и этиламин не испол зует. Орга нические кислоты (в виде солей); форматы, ацетаты, цитраты, сукцинаты, оксалаты или глюконаты карбогидраты не использует. D - глюкозу, фруктозу, сахарозу D- рибозу, D -ксилозу, лактозу, D- галактозу, Ь -рамнозу, D - ар бинозу, D - мальтозу и В - маннозу . .;не использует. : - Крахмал, дрожжевой экстракт, пеп тон, казаминовые кислоты, раствор вьлмрченного пшена или гидролизаты соевого масла не использует.Дрожжевой экстракт и пептон стимулируют рост. .Способ- осуществляют следующим об разом. Продуцирующие протеин микроорганиймы из рода /1eiAy(omotto5 ;sp.PERM Р-240О«выращивают на питательной среде, содержащей ирточники углерод азота, необходимые мййе эальные соли в условиях аэрации. Источником азота служат соли аммони |, такие как сульфат и хлорид, аммоЙиЯ, нитрат калия, нитрат аммон водный раствор аммиака,. а также газообразный аммиак, при этом соли аммония используют в количестве 0,03-0,2%. , „,. В ка чествё минеральных солей используют фосфаты калия, сульфат магния, сульфаты железа и меди. В качестве основного источника углерода используют метан, а в качестве дополнительного источника углерода - дрожжевой экстракт или пептон. Подаваемый гаэ состоит из 20% метана и 80% воздуха.

673185 После культивирования бакте риальные клетки отделяют центрифугированием, промывают и сушат. Выход протеина составляет 65-67% (сухого). Пример. 20 мл водного раствора питательной среды состава, г/л: (Мн,)., ,5, 0,3; Na HPOt-x HjO l,8;MgSO -7HtO О ,2, FeSO,,-7HiO . 0,001, помещайзт в 500 мл колбу при встряхивании и стерилизуют. На среду инокулируют штамм/Ае1Ли(оmonas sp.-FERM Р-2400. Воздух в колбе заменяют газом, состоящим из 20% метаном и 80% воздуха, и колбу герметично закрывают. Инокулированную среду поддерживают при 36, 25 час при встряхивании. В течение 20 час штамм растет со скоростью, примерно, 0,17 . Затем клетки отделяют центрифугированием, промывают и сушат, получая сухой клеточный материал 0,6 г/л. Содержание азота в сухой клетке 10,4%, а сухого протеина,примерно 65%. Пример 2. 400 мл водной питательной, среды, имеющей тот же состав, как описано в примере 1, а также содержащей дополнительно дрожжевой экстракт 0,5 г/л, помещают в 1 л стеклянный сосуд для ферментации и стерилизуют. На среду инокулируют 20 мл семенной- культуры J eihijtomona Р-2400, полученной по примеру 1, и культивируют при 36,5 С 48 час при перемешивании со скоррстью 1200 об/мин. Через среду весь период культивиро-, вания барботируют газообразный метан со скоростью 30 мл/мин, h воздух 160 мл/мин, рН поддеожйвают 6,6 газообразн1лм аммиаком. В течение 36 чай штамм растет логарифмически с удельной скоС остью роста 0,2 час-. Концентрация бактериальных клеток через 36 час составляет 8,2 г/л. Бактериальные клетки отделяют, получая 16,8 г/л сухого клеточного материала. П р и м е р 3. Питательную среду получают и культивируют, как в примере 2. о Через 30 час культуральную жидкость с содержанием 4,8 г/л бактериальных клеток (вес сухих клеток) постепенно разбавляют-свежей средой со скоростью 0,15 . Через 18 час после начала разбавления культуральная жидкость содержит 4,3 г/л (считая на вес сухой клетки) бактериальных клеток. Выход составляет 66% на- основе поглощенного метана.. Сравнительная характеристика свойств штамма Aletfi fomoftfls sf. PBRA1 Р-2400 и известных приведены в таблицах 1 и 2. Недоразвитая Aethi/Jomonos кисть типа Azobacler bacter Киста типа Azobacter (i(lowonaS Не распоэцано Па sp. FERA р-2400

/ effiy/отопал 5р. РБКЛ Р-2400 Формула изобретения 1. Способ получения протеина путем 60 выращивания продуцирующих его микроорганизмов рода Melhylomonos на питательной среде, содержащей источник углерода, азота и необходимые минеральные соли в условиях аэрации, с Па Па

таГ

Белый до темножелтого65 Заметного плеоморфизма не наблюдаетсяНаблюдается подобие разновидностям, образующим крупную клетку В жидкой среде не наблюдается морфологического изменения, однако, плеоморфизм наблютдается в агаровой среде последующим отделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повьхлеиия выхода протеина, в качестве продуцирующих микроорганизмов из рода / eihijiomoпа используют штамм Alelfri lomonos Sp. РБРЛ P-2|00.

3.Способ по п. 1, о т л и ч а ю- 1. Патент Франции 2175199, ,щ и и с я тем, что в качестве допол-кл. С 12 D 13/06, 1973.