Способ получения кормогризина Советский патент 1979 года по МПК C12D9/00 

Изобретение относится к микробиол гической промышленности, в частности к способу получения препарата кормогризинсь действующим началом которого является антибиотик стрептотрициновой группы - гризин. в состав различных стрептотрицино вых антибиотиков входят компоненты .F, Е, D, С, В, содержащие соответственно.1, 2, 3, 4, 5 остатков -лиЗина. Антибиотик гризин состоит, в основном, из компонентов F и D. Известен способ получения препара та кормогризина 1. Способ заключается в том, что культуру продуцента Act.(t is8US выращивают на качалке в колбах с питательной средой, содержа щей кукурузную муку,крахмал,сернокис лый , хлористый натрий, фосфорнокислый калий и мел. Выращенный посевной материал переносят в фермен tepы со стерильной питательной средой того же состава. Ферментация длится 48-55 ч,после чего культураль ную жидкость, содержащую антибиотик гризин, подкисляют до рН 5,0-5,5 и подвергают упариванию. Упаренная куль туральная жидкостьпоступает на распылительную суишлку и далее высушенный препарат стандартизуют до содержания 5, 10, 40 г чистого антибиотика в 1 кг препарата. Однако этот способ не обеспечивает получения препарата с постоянным составом антибиотика гризина. Кроме компонентов F, Е и D в антибиотике может содержаться в виде примесей различное количество компонентов В и С, обладающих значительно большей токсичностью,, что снижает качество препарата. Количество указанных примесей в промышленных препаратах антибиотика может достигать 45-50% от общего содержания антибиотика в препарате. Кроме того, упаривание культуральной жидкости при указанных значениях рН приводит к значительньм потерям антибиотика. Цель изобретения - разработка способа, обеспечивающего возможность получения кормогризина с повышенным выходом Т ,Е и D - компонетов, т.е. содержащего минимсшьное количество примесей С и В. Эта цель достигается тем, что в способе, включакицем выращивание продуцента кормогризина Лс1. nseu. в глубинных условиях на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные соли с послезКуйШм поДкислением, упегриванием и высуимваняем культуральной жидкости 8 питательную среду для культивирования продуцента Лс. riseus вносят энантовую кислоту для разобщения процесса окислительного фосфорилиро вания в концентрации 0,05-0,2%, при этом культурсьльнукз жидкрст перед уйарйванием подкисляют до рН 3,03,5. ... . П р. и м е р. Для выращивания про луцёйта гриэина используют среду сл дующего состава, %: Кук руэная мука Крахмал Сернокис.1тый ам0,5-0,6 моний Фосфорнокислый калий Повареная соль Кел Вода водопроводДо 100,0 ная Для приготовления среды {1 л) дл вьгргидйвання посевного материала SCO мл водопроводной воды нагревают до , засыпают 20 г кукурузной муки и подогревают до ЭОс. Разваривают муку в течение 5 мин; в среду внося ту л Jr D i С T-ti fЛf. - ilrfi f ЛЛ л- . 5-6 г (NH)2.SO, 300 мг 5 CaCOj, 15 г крахмала, взмученногс холодной воде, который вносят в последнюю очередь. Полученную таким образом среду охлаждают и доливают водой до 1000 мл;рЙ 6,3-7,3 доводя концентрированной кислотой (НС1). Приготовленную среду оазливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл и ....стерилизуют автоклазированием при 1,2 ати в течение 40 мин.Стерильнос -среды опеределяют путем выдерживан ее в течение 24 ч при 37°С и анали Влияние знантрвой кислоты на образование основных компонентов гризина (F, Е и D) 04 за высевов на плотные питательные среды общепринятым методом. Кусочек картофельного агара с культурой Act., шт 70 (из пробирки) стерильно вносят в колбы со средой. Засеянные колбы ставят на качалку (240 об/мин) и выращивают при температуре 27 i в течение 36 ч. Выращенный в колбах посевной материал передают на засев питательной среды (приведенного состава) в посевной аппарат, где культура выращивается при температуре 27 ± 1°С в течение 1820 ч. . Готовый посевной материал из посевных аппаратов направляют в ферментеры с ферментоционной средой того же состава, что и среда в колбах. Кроме того, в ферментеры вносят стерильно энсхнтовую кислоту в концентрациях 0,05-0,1%. Процесс ферментации идет при температуре 27 ± в течение 48-55 ч. Полученную культуральную жидкость подкисляют до рН 3,03,5, упаривают температура 45-50°С в течение 1 ч и затем высушивают на распылительной сушилке ( Т 140± , ,). Для анализа кдмпонетного состава гриэана проводят выделение гризана из культуральной жидкости общепринятым методом на смоле КБ-4Н-2, Компонентный состав гризина определяют с поглощью аналитической хромотографии на КМ-сефадексе Q 25 в градиенте NaCI 0,6-1,2 М с последующим спектрофотометрированием элементов при d 216 мм. Результаты осуществления способа представлены в таблице (содержание суммы компонентов F, Е и D в % ко Bceix y количеству антибиотиков) .

Использование предлагаер«эго спосо6а в промышленности позволит получить более высококачественный препарат кормогризина. Кроме того, изоЛретение дает возможность на одних и тех же мощностях получать препарата на 20-25% больше.

Формула Изобретения

Способ получения кормогризина, включающий выращивание продуцента его Act. ftfiua в глубинных условиях на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные соли

- 5675070в .

с последующим подкислением, упариванй-0,05-0,2%,при этом культуральнук.

ем и высушиьакием культуральной жид-жидкость перед упариванием подкислякостк, отличающийся тем,ют до рН 3,0-3,5. что, с целью повьЕиення содержания в

кормогриэине F, Е и D - компонентов.Источники информации, принятые во

при выращивании продуцента в питатель-внимание при экспертизе ную среду вносят энантовута кислоту 51. Решетов П.Д. Получение и свойстдля разобщения процесса окислительно-ва стрептотрициновых антибиотиков,

го фосфорилирования в концентрацииМ., 1964, (автореферат диссертещии) .