(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКА ГРИЗИНА
1
Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам определения антибиотика гризина в препаратах кормогризина.
Антибиотик гризин, образуемый культурой Act. griseus и относящийся к группе стрептотрициновых антибиотиков, является основным действующим началом препарата кормогризина, применяющегося в животноводстве и прицеводстве при откорме молодняка. Препараты кормогризина выпускаются промыщленностью в виде кормогризина-40, кормогризина-2, кормогризина-10.
Известен физико-химический метод определения гризина в культуральной жидкоети 1.
Метод заключается в выделении антибиотика из культуральной жидкости и его очистке либо с помощью ионообменных смол, либо путем отгонки с паром хромогена, получаемого при конденсации гризина с ацетилацетоном и определении очищенного антибиотика по реакции Эльмона-Моргана.
Недостатками метода являются: больщая трудоемкость и многоэтапность стадии выделения и очистки антибиотика, в результате чего способ не может быть использован
для серийных определений при промыщленном производстве кормогризина-2 (недостаточная точность определений, ощибка определений превыщает 15%).
Цель предлагаемого изобретения - создание быстрого и точного способа определения гризина в препаратах кормогризина.
Эта цель достигается тем, что выделение гризина из исследуемых растворов проводят путем избирательного осаждения антибиотика 0,75-1,2°/о-ным раствором молибденовокислого аммония в кислой среде при рН 1-3 и получением его в виде молибденовокислой соли. Определение антибиотика в осадке проводят с помощью реакции Эльсона-Моргана. Продолжительность стадии выделения и очистки составляет 10-12 мин. Ощибка способа составляет 5-7%.
Пример 1. Построение калибровочного графика.
Готовят основной раствор из эталона гризина с концентрацией 1000 мкг/мл, из которого приготовляют разведения 500 и 750 мкг/мл. Далее в ряд центрифужных пробирок вносят по 5 мл каждого разведения. Во все пробы приливают по 1 мл 0,1 НС1 и 1 мл 1%-ного раствора молибденовоккглого аммония. После двухминутной выдержки центрифугируют при 8 тыс.об/мин. По окончании сливают надосадочную жидкость. К осадку приливают 5 мл 0,5 раствора NajCOs и 5 мл рабочего раствора ацетилацетона и проводят реакцию Эльсона-Моргана. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром. На миллиметровой бумаге строят калибровочный график, откладывая на оси абсцисс содержание антибиотика в пробе в мкг/мл, а на оси ординат величину оптической плотности. Пример 2. Анализ кормогризина-40. Готовят Ш /о-ную суспензию кормогризина в 0,2 НС1. Экстракцию проводят в течение 2 час. После фильтрации фильтрат разводят дистиллированной водой 1:5, 1:8. По 5 мл каждого разведения ломещают в центрифужные пробирки и далее поступают так, как описано %ыше. Были получены следующие результаты. СоответствуюОптическаяРазведение щая конц.гри- плотность зина в мкг/мп (по графику) 0,425 Расчет содержания гризина в препарате рассчитывают по формуле: 100О где А - концентрация гризина в препарате мг/г или г/кг; а - полученная концентрация по графику в мкг/мл; б - разведение фильтра препарата; 10-начальное разведение экстракта; 1000 - для перевода мкг в мг. 489.8.10 Гоои 766.5 . 10 ПШ Среднее 38,7 мг/г, т. е. препарат кормогризина. Пример 3. Анализ кормогризина-10. То же, что и в п. 2, но разведение фильтрата делается 1:2. Формула изобретения Способ определения антибиотика гризина в препаратах кормогризина, включающий выделение антибиотика из исследуемых растворов и его выявление с помощью реакции Эльсона-Моргана, отличающийся тем, что, с целью ускорения и првыщения точности способа, выделение гризина из исследуемых растворов проводят 0,7-1,2%-ным раствором малибденовокислого аммония в кислой среде при рН 1,0-3,0. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Попов А. И., Скворцова М. М. Физико-химический метод определения концентрации гризина в культуральной жидкости. «Микробиологическая промышленность, 1974, вып. 4, с. 1.
