Способ количественного определения хлорофоса Советский патент 1979 года по МПК G01N31/14 

(54) СПОСОБКОЛИЧЕСТВЕННОГО ОНРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОФОСА

значения 100 ед. (r,) при разложении субстрата -метилумбеллиферонацетата холинзстеразой и такое же время, но при работе холинзстеразы в смеси с хлорофосом в рробе (Т(,„). По увеличению сравнению с г судят о наличии хлорофоса в пробе воды.

г и измеряют в минутах. Это время протекания реакции, которое фиксируют в тот момент, когда стрелка микроамперметра люминесцентного прибора достигает 100 ед,« замер можно проводить на любом другом участке шкалы. В данном случае интенсивность 100 ед. взята условно (можно взять 50, 70, 90 и т.д.). Эту величину можно взять произвольно, однако ее не следует брать при малой интенсивности люминесценции (например, 10 или 15 ед.), так как при малой интенсивности еще не установился процесс гидролиза.

г - это контрольное время, за которое

стрелка мнкроамперметра люминесцентного прибора достигает 100 условных единиц в холостой пробе. - это опытное время, за которое стрелonка микроамп5рметра люминесцентного приборадостигнет 100 усло&ных единиц в присутствии хлорофоса в пробе.

- отношение времени протекания реакк ции в интервале 100 ед. при определении хлорофоса в исследуемой пробе к контрольному времени, т.е. при определении в отсутствие хлорофоса в исследуемой пробе.

Пример 1. В кювету объемом 8 мл с 4,9 мл фосфатного буфера (рН 8,15) и 1,9 мл воды Добавляют 0,39 мл холинзстеразы в фосфатном буфере. Смесь тщательно перемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем прибавляют 0,030 мл раствора /3-метилумбеллиферонацетата в этилцеллозольве. Пробу тщательно перемешивают и вводят в блок фотометрировання люминесцентного прибора. Отмечается время, за которое стрелка микроамперметра прибора достигает значения 100 ед., т «5 мин. TQJ, определяется аналогичным образом. В кювету с 50 мл буферного раствора холинэстеразы той же активности после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубации прибавляют 0,030 мл раствора /3-метилумбеллиферонацетата; WlO,7. По увеличению TJ, по сравнению с Тц судя о наличии хлорофоса в пробе воды. Величина Tj, зависит от концентрации хлорофоса в анализируемой пробе. Пример 2. В KtoBeTy объемом 8 мл с 5 мл фосфатного буфера (рН 8,2) и 2 мл воды Добавляют 0,4 мл холинэстеразы в фосфатном буфере, смесь тщательно перемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем прибавляют 0,035 мл раствора -метилумбеллиферонацетата в зтилцеллозольве. Пробу тщательно перемешивают, помещают в блок фотометриро,вания люминесцентного прибора и отмечают время, за которое стрелка микроамперметра прибо:ра достигает значения 100 ед., мин т определяется аналогичным образом. В кювету ;с 2 мл буферного раствора холинэстеразы той ;же активности и после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубации прибавляют iO,035 мл раствора -метилумбеллиферонацетата; гф„ -10,8 мин (при концентрации хлорофоса 5-10- мг/мл). По увеличению т,, по сравнению с т судят о наличии хлорофоса в пробе воды. Величина т зависит от концентрации хлорофоса в анализируемой пробе.

Пример 3. В кювету объемом 8 мл с 5,1 мл фосфатного буфера (рН 8,00) и 2,1 мл анализируемой воды добавляют 0,41 мл холинэстеразы в фосфатном буфере. Смесь тщательно перемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем прибавляют 0,036 мл раствора Д-метилумбеллиферонацетата в этилцеллозольве. Пробу тщательно перемешивают и помещают в блок фотометрирования люминесцентного при- . . бора. Отмечается время, за которое стрелка микроамперметра прибора достигает значения 100 ед., т,, г 4,9 мин. т определяется аналогичным образом. В кювету с 5,1 мл буферного раствора и 2,1 мл анализируемой пробы воды с хлорофосом добавляют 0,41 мл раствора холинэстеразы той же активности и после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубации прибавляют 0,036 мц раствора -метилумбеллиферонацетата; i jj-l6,9-ll,0 мин (при концентрации хлорофоса 510- мг/мл).

По увеличению по сравнению с т судят о наличии хлорофоса в пробе воды. Величина Tj зависит от концентрации хлорофоса в анализируемой пробе..

О количестве хлорофоса в анализируемой пробе судят по отнощеншо1 п/С к.-В таблице приведены дашь1ёпо зависимости времени протекания реаказии от содержания хлорофоса в анализируемой пробе. Чувствительность определения настоящего способа 5-10- мг/мл, что дает возможность определять предельно допустимую концентрацию 2слорофоса. Время определения 15 мин. 5 Формула изобретения Способ количественного определения хлорофоса путем обработки анализируемой пробы холииэстеразой в присутствии субстрата, отличающийся тем, что, с целью тювьпиеикя чувствительности определения и сокращения времени определения, в качестве субстрата используют раствор 0-метнлумбеллиферонацетата в этил6целлозольве и обработку ведут при рН среды 8,0-8,2 с последующим измерением люминесценцин полученного раствора. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе .1. Швайкова М Д. Токсикологическая химия, М., 1975, с. 273. 2. Филов В. А. Определение ядохимикатов в биологических субстратах. М.-Л., 1964, с. 16-21.