Предметное стекло для исследования крови Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

(5)ПРЕДМЕТНОЕ СТЕКЛО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ Изобретение относится к медицине а именно к гематологии. Известно предметное стекло для и следования крови с нанесенным на него слоем красителя, состоящего из метиленового синего и ацетата кр золфиолетового при соотношении 9:1 tn. Однаког красители, нанесенные на предметное стекло, не обеспечивают высокой контрастности окрашивания (окраска тусклая), формы зернистых лейкоцитов (эозинофилы, нейтрофилы и базофилы) различаются с большим трудом. Цель изобретения - повышение контрастности окрашивания. Указанная цель достигается тем, что в предметном стекле для исследования крови с нанесенным на него слоем красителей метиленового сине го и ацетата крезолфиолетового сло красителя содержит красители в coo КРОВИ ношении 1:1,5 - 1:5. При этом мети леновый синий использован в виде моногидрохлорида. Метиленоьый скн,1Й очищают путем растворения в воде, выделнют гидрохлорид с помощью соляной кислоты. Получают хроматографически чистый продукт, который содержит только около 0,5 хлорида цинка и представлен в виде моногидрохлорида. Ацетат крезолфиолетовый очищают путем осторожного отстаивания в воде, удаляя ацетат натрия, затем растворяют в метаноле и выделяют с помощью эфира. Повторение этого процесса дает хроматографически чистый продукт. Очищенные таким образом красящие вещества растворяют Б метаноле и наносят на предметное стекло. Они могут быть также растворень в воде .и нанесены вместе с полиоксиэтиленсорбитанмонопальмитатом. Соотношение этих красящих веществ 1:1,5 1:5390Краситель наносят на предметное стекло от 0,5 до . На пред метное стекло наносят слой красител затем добавляют каплю крови, накрывают покровным стеклом и через 3-5 мин микроскопируют с помощью иммерсионного объектива. Получается яркая контрастная окраска, воспроизведение хорошее. Гранулы эозинофилов окрашены в яркий желтый цвет, гранулы базофилов - в оранжевый цвет. Контуры ядер распознаются отчетливо, что существенно облегчает различение лимфоцитов, моноцитов и различных зрелых стадий гранулоцитов Пример 1. Очистка ацетата крезолфиолетового. 50 г ацетата крезолфиолетового су пендируют в 100 мл воды и сильно раз мешивают в течение 15 ми.н. Затем кра сящее вещество отсасывают и дважды промывают 100 мл охлажденной на льду воды. Отфильтрованный осадок растворяют в 1,6 л метанола при нагревании и при 30°С отсасывают от нерастворимых частиц. Фильтрат медленно пр помешивании смешивают с 3,5 л эфира и затем перемешивают в течение 30 ми при охлаждении на льду. Образовавшиеся кристаллы отсасывают, рдастворяют при нагревании в 620 мл меТанола, затем раствор охлаждают до 30°С и выделяют красящее вещество добавле нием 1,85 л эфира при помешивании и охлаждении на льду. После отсасывания и трехфазовой промывки 120 мл эфир-метанола С3.1) после просушки получают сверх дифосфорпентоксида г ацетата крезолфиолетового в фо 22 ме темно-зеленых кристаллов. Состав: примерно 821 ацетата крезолфиолетового, 8 хлорида крезолфиолетового и 10 воды. При нагревании до 150°С возникает разложение Вещество по данным хроматографичес кого исследования является практически чистым. Значение Rл 0,6. Пример 2„ Очистка метилено вого синего. В четырехлитровой трехгорлой колбе растворяют при помешивании 100 г метиленового синего в 1 л вод и перемешивают с 1 л концентрирован . ной соляной кислоты, 1,18. Посл четырехчасового перемешивания при охлаждении на льду и восьмичасового нахождения в холодильном шкафу при +5°с отсасывают образовавшиеся кристаллы, промывают 00 мл охлажденной на льду 6 н. соляной кислоты и 500 мл эфира. Получают 36,5 г черных с металлическим блеском кристаллов. Очищенное красящее вещество состо-. ит из метиленового синего хлорид-гидрохлорида и содержит ЗЗ воды. Имеются лишь только следы цин- . ка Красящее вещество по данным хроматографического исследования является практически чистым. Значение Rf 0,5. Пример 3. Используя красящие вещества, очищенные согласно примерам 1 и 2, приготавливают раствор cлeдyюu eгo состзва:Метиленовый синий гидрохлорид, мг 130 Ацетат крезолфиолетовый, мг270 Метанол, мл (Эколо 100 Этот раствор ватным тампоном наносят или напыляют на предметное стекло и высушивают. При средней величине капли примерно 20 Ч нанесенное количество красящего вещества составляет около 3 . На предметное стекло наносят каплю крови примерно 5 10jM- и накрывают покровным стеклом. Через мин окраску оценивают под микроскопом при 800-кратном увеличении с использованием иммерсионного объектива. Отдельные частицы крови представлены в следующей окраске. Ретикулоциты: сетка пурпурного 4вета внутри едва окрашенных эритроцитов. Нейтрофилы: ядро пурпурного цвета внутри тонкозернистой почти бесцветной плазмы. Эозинофилы: ядро пурпурного цвета внутри грубозернистой желтой плазмы. Базофилы: ядро темно-пурпурного цвета внутри средней величины компактно-зернистой плазмы оранжево-красного цвета. Лимфоциты: ядро пурпурного цвета с плазмой светло-пурпурного цвета. Моноциты: как лимфоциты, только крупнее и больщим количеством плазйы.

Тромбоциты: маленькие частицы пурпурного цвета.

Предлагаемый краситель позволяет повысить контрастность окрашивания так, при сравнивании окрашенных предметных стекол при соотношении 1:1,5 1:3 и 1:5 с окрашенными предметными стеклами с соотношением красителей

9:1 наблюдавтся различная окраска отдельных форменных элементов крови.

В таблице приведена окраска отдельных элементов крови в зависимости от соотношения метилового синего N-гидрохлорида:ацетат крезилфиолетового.

Как видно-из таблицы, применение предметных стекол, содержащих метиленовый синий и ацетат крезолфиолетовый или метиленовый синий в виде миногидрохлорида в соотношении 1:1,5 -5, позволяет получить лучшее окрашивание различных элементов крови по сравнению с известным красителем в соотношении 9:1

Формула изобретения

2, Стекло по п,1, отли чающее с я тем, что метиленовый синий используют в виде моногидрохларидао

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 379659, кл. 117-12, 1972.