Способ определения анилина в биологических объектах Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа промышг ленных органических ядов в клинической судебно-медицинской токсикологии и в техническом контроле полупродуктов и продуктов синтеза.

Известен способ определения анилина в биологических объектах путем гомогенизации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты, отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости ,с последующим определением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания

Однако известный способ не обеспечивает необходимой точности определения анилина в биологических объектах и имеет недостаточную селективность анализа, что снижает достоверность получаемых результатов.

Цель изобретения - повышение точности и селективности анализа.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения анилина в биологических объектах путем гомогенизации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты, отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной

жидкости с последующим определением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания, гидролизат обрабатывают хлороформом, хлороформный экстракт подвергают дополнительной очистке электрофорезом на бумаге, при напряжении 400 В, а в качестве электролита берут буферный раствор Брит-) тона-Робинсона при рН 2,3.

10

Способ осуществляют следующим образом.

Анилин определяют путем гомогенизации пробы, осаждения белков раство15ром трихлоруксусной кислоты (ТХУК), ггромыв ания и отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости, обработки ее хлороформом, дополнительной очистки электрофорезом

20 на бумаге при напряжении 400 В в присутствии электролита буферного раствора Бриттона-Робинсона при рН 2,3, последующего определения анилина с помощью реакции азосочетания, при

25 этом проводят 3-х кратную обработку осадка раствором ТХУК, 3-х кратную экстракцию основания анилина хлороформом, дополнительную очистку хлороформного экстракта электрофорезом

30 на бумаге при напряжении 400 В, электролит-буферный раствор Бриттона Робинсона, рН 2,3. Пример. К, 10 мл крови добав.ляют равный объем воды. Через 20 мин по каплям при перемешивании приливаю 9 мл 20% раствора ТХУК и оставляют на 10 мин, после чего смесь центрифугируют (бООО об/мин, 5 мин)..Надосадочную жидкость сливают, осадок трижды гомогенизируют в течение 5 ми с 10мл 1% раствора ТХУК. Промьшную жидкость отделяют центрифугированием. К объединенным центрифугатам добавляют концентрированную соля.ную кислоту до рН 1 и нагревают на кипящей водяной бане в колбе с обратным воздушным холодильником в течени 1 ч. После гидролиза жидкость охл аждагот до комнатной температуры, до бавляют 25% раствор аммиака до рН 9 и экстрагируют хлороформом в течение 5 мин 30 мл 3). Образовавшуюся эмульсию центрифугируют, хлороформные экстракты фильтруют через складчатый фильтр (диаметр 5 см) в фарфоровую чашку, Смешивают с 2 мл спиртового раствора соляной кислоты (3 м концентрированной соляной кислоты, плотностью .1,19 смешивают с 100 мл этилового спирта 95%). Объединенные экстракты выпаривают при комнатной температуре в защищенном от света месте. Сухой остаток растворяют в 0,01 н растворе соляной кислоты. С целью очистки аликвоту раствора нано сят на полосы,хроматографической бумаги FN15 (2-29 см) и подвергают . электрофорезу в камерах к прибору ПВЭФ-1 в течение 1 ч при напряжении 400 В, электролит-буферный раствор Бриттона-Робинсона, начальная температура электролита . Контрольную полосу разрезают на две части, для проявления которых используют соответственно реакции образования азокрасителя и азометина. Положение зо , на исследуемых электрофореграммах ус танавливают посредством сравнения с положением окрашенных участков на контрольной полосе. Установленные уч стки вырезают в пределах 0,5 см от передней и задней границ зон и элюируют 0,01 н раствором соляной кислоты. Для фотоколориметрического определения анилина к О,5 мл алюата последовательно добавляют 0,25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты, 0,05 мл свезйеприготовленного-0,01 н раствора нитрита натрия. Смесь встряхива ют и че рез 30 мин добавляют 0,3 мл 0,05% раствора хинозола и 1 мл 0,1 н раствора гидроксида натрия. Объем смеси доводят водой до 10 мл. Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют на фотоэлектроколориметре при синем светофильтре, кювета 10 мм. Раствором сравнения служит смесь реактивов без элюата, содержащего анилин. Количество анилина определяют по калибровочному графику Применение в предлагаемом способе дополнительной обработки субстрата извлекателем, экстракции органическим {растворителем и электрофоретической очистки повЕЛмает селективность анализа, увеличивает выход изолируемого вещества и повышает точность анализа в 2 раза. Формула изобретения Способ определения анилина в биологических объектах путем гомогенизации пробы,.осаждения белков растворов Трихлоруксусной кислоты, отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости с последующим определением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и селективности анализа, гидролизат обрабатывают хлороформом, хлороформный экстракт подвергают дополнительной очистке электрофорезом на бумаге при напряжении 400 В, а в качестве электролита берут -буферный раствор Бриттона-Робинсона при рН 2,3. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Гадаскина И.Д., Филов В.А. Превращение и определение промышленных органических ядов в организме. Л., Медицина, с. 272-273, 1971.