Способ обработки мышечной ткани для диагностики нервно- МышЕчНыХ зАбОлЕВАНий Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 

I

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии.

Известен способ обработки мышечной ткани для диагностики форм нервно-мьпиечных заболеваний, включающий гомогенизацию образца в буфере и центрифугирование С1J

Однако известный способ не позволяет одновременно диагностировать отдельные формы первичных и вторичных миопатий.

Целью изобретения является одновременная диагностика отдельных форм первичных и вторичных миопатий.

Эта цель достигается тем, что центрифугат диализуют, вводят меченый циклический адёиозинмонофосфат в концентрации 0,3-20,0М инкубируют при температуре О-2°С, фильтруют через мембранные фильтры, погружают в раствор сцинтиллятора.

Пример 1. Больной М. Предварительный диагноз при поступлении - миопатия Эрба. Диагноз установлен на основании злектрофизиологических, генетических, морфологических И биохимических исследований.

Методом игольчатой биопсии получают 10 м мышечной ткани. Ткань немедленно на холоду, гомогенизируют в буфере, содержащем 10 мм трис-НС1, 1 М ДЭДТА рН 7,4. Полученный гомогенат центрифугируют на холоду при 4- 5 тыс. об/мин. Супернатант помещают на диализ против 50-кратного объема буфера гомогенизации на 12-14 ч при . Затем 50 мкл диализата (50-100 мкг белка) вносят в раствор буфера гомогенизации, содержащего 150 мкл НцАМФ различной концентрации (от 20-10 до 0,3-Ю- М). Растворы готовят методом серийных разведею1й. Пробы инкубируют 2 ч прн , затем фильтруют через мембранные фильтры Сынпор с диаметром пор 0,4 мк. Константу диссоциации Кд комплекса циклического аденозинмонофосфата цАМФ-протеинкиназа вычисляют по методу Лайнувера-Верка.

Велнчина Кд оказалась 1,02-10 М, т.е. входит в диапазон величин, характерных для вторичной миопатин. В процессе клинического наблюдения диагноз спинальной амнотрофин был подтвержден. П р и м е р 2. Больной С. Поступил в с циокар с предположительным диагнозом мнопатия Дюшена. Используя предлагаемый способ, установили Кд комплекса цАМФ - протеинкнназа, которая оказалась равной 6,2-Ю М, что соот ветствует диапазону величин, характерных для миопатии Дюшена. В дальнейшем поставленны диагноз был подтвержден. П р и м е р 3. Больной М. При поступле нии в стационар на основании комплекса кли нических биохимических, морфологических и злектрофизиологических методов исследования бып установлен диагноз миопатия Эрба. Кд, определенная предлагаемым способом, оказалась равной 0, М, что характерно для миопатии Эрба. Поставленный на основании предложенного способа диагноз полностью коррелирбвал с предварнтельно установленным в процессе клинического обследования больного. Предлагаемый способ позволяет повысить точность распознавания различных форм мио34патий, исключает травмирующие больного процедуры, т.к. требует минимального количества мышечной ткани для анализа (5-10 мг); позволяет сократить и существенно упростить объем и время исследования. Формула изобретения Способ обработки мышечной ткани для диагностики форм нервно-мышечных заболеваний, включающий гомогенизацию образца в буфере и центрифугирование, отличающийся тем, что, с целью одновременной диагностики отдельных форм первичных и вторичных миопатии, центрифугат диализуют, вводят меченый циклический аденозинмонофосфат в концентрации 0,3-20, М, инкубируют при температуре 0-2°С, фильтруют через мембранные фильтры, погружают в раствор сцннтиллятора. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Вестник АН CCCP,N 7, 1973, с. 38.