1-О-Ацетил-2,5-ди-О-бензоил-3-фтор-3-дезокси-Д-рибофураноза в качестве промежуточного продукта в синтезе биологически активных 3 @ -фтор-3 @ -дезоксирибонуклеозидов Советский патент 1989 года по МПК C07H15/18 C07H19/67 C07H19/167 

1рированной серной кислоты и переме- ;шивают при 20°С 20 ч. Реакционную ; :с мес1 вьшивают в 100 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, содержащего 50 г льда. Смесь экстра- |Гируют хлороформом (2-Х100 мл), орга- |нический слой отделяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают.

кагеле L 100/400 (300 см). Колонк -элюируют смесью, растворителей хлор форм - метанол с постепенным увели чением содержания метанола от 2 до 12% (объемных). Фракции, содержащи нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Получают 1,99 г (82%) 6 -М-б ензоил-9-(2,5-ди-0-бензоил-3УФ спектр: Д

EiOH, мсхчс

в нм ( 23

Остаток хроматографируют на силикаге- д -фтор-3-дезокси-/з-В-рибофуранозил)

|ле L 40/100 (100 см ). Колонку элю-аденина (На) в виде сиропа.

I ИРуют смесью растворителей гексан I эфир с постепенным увеличением содержания эфира от 1 до 50% (объемных). Фракции, содержание соединение 5 (с, 1Н, NHBz); 8,56 и 8,13 (с, по

(I), объединяют и упаривают. Полу--|н, Н-2 k. Н-8) ; 8,11-8,03 (м, 15Н,

чают 1,31 г (93,8%) 1-0-ацетил-2,5j -ди-О-бекзоил-З-фтор-З-дезокси-В-ри- бофуранозы (I) в виде сиропа.

(4,56); 280 (4,30).

Спектр ПНР (CDClg), , м.д.: 9,

ароматика); 6,47 (д, 1Н, Н-1 , J,fi 7,0 Гц); 6,37 (м, 1Н, Н-2 ); 5,8 (м, 1Н, Н-3 ); 4,87 (дд, 1Н, Н-5 )

ароматика); 6,47 (д, 1Н, Н-1 , J,fir 7,0 Гц); 6,37 (м, 1Н, Н-2 ); 5,80 (м, 1Н, Н-3 ); 4,87 (дд, 1Н, Н-5 );

Спектр IMP (CDClj), сР , м.д.: 8,11-20 4,82 (м, 1Н, Н-4 ); 4,63 (дд, 1Н,

1 7,45 (м, 20Н5 ароматика); 6,55 (д, 1Н, 6,41, (дд, 1Н, Л-1); 5,59 (м, 1Н, И-2/3); 5,46 (м, 1Н, Н-3); 5.,37 (м, 1Н, Н-Зс); 5,35 (м, 1Н, ;Н-2оО; 4,85 (м, 1Н, Н-4«:); 4,74 (м, 1Н, ); 4,68 (дд, 1Н, И-5/i); 4,58 (дд, ТА, Н-5оО; 4,51 (дд, 1Н, ; 4,48 (дд, 1Н, Н-5/5); 2,17 (с, ЗИ, : ОАссО 1,98 (с, ЗН, ОАс;в). Найдено, %: С 62,80; Н 4,81;; , F 4,,69.

р О А f7 71 9 1

Н-5 ).

Найдено, %: С 63,90; Н 4,00; N 11,90; F 3,21. . ..

25 . Вычислено, %: С 64,02; Н 4,15; N 12,04; F 3,26.

Пример 3. 2-К-Ацетил-9- -(2,5-ди-0-бензоил-3 фтор-3-дезокси- -/i-D-рибофуранозил)гуанин (Ilia).

30 I . ,

Смесь 1,74 г (4,32 ммоль) соеди- нения (I) и триметилсилильного производного 2,9-Н,Ы-ацетилгуа1-ина, полученного кипячением в течение 3-х ч

35 из 1,2 г (5,10 ммоль) 2,9-К,Ы-аце- тилгуанина в 30 мл гексаметилдиси- лазана, 0,91 мл (1,11 rf 5,0 ммоль) триметилсилилтрифторметансульфоната в 50 ют дихлорэтана кипятят 1,5 ч.

Вычислено, %: С. Н 4,75; : F 4,72.

В. Из 0,5 г (1,33 ммоль) метил 2,5-ди-0 бензоил- 3-фтор-3-дезокси-р1-. : -D-рибофуранозы действием смеси 3 мл : уксусной кислоты, 2,1 мл. уксусного ангидрида и 0,03. .мл концентрированной серной кислоты получают, как опи-4о Реакционную смесь упаривают, остаток сано в метбдике А, 0,48 г (89,3%) растворяют в 150 мл хлороформа и про- соединения (1);мыва рт насыщенным раствором бикарбо.. П р и м е р 2. 6-Н-Бензоил-9-| ната натрия ( мл) , водой (.мл). (2,5-дн-0-бензоил 3 фтор-3-дезокси- .- Хлороформный раствор сушат безводным . - -В-рибофуранозш1)аденин (На). . сульфатом натрия, упаривают Смесь 1,7 г (4,22 ммоль) соединения (I), 1,6 г (4,17 ммоль) бис-три- метилсилильного производного 6-N-6eH- зоиладенина и 0,97 мл (2,16 г; -- 8,31 ммоль) четыреххлористого олова . в 26 мл дихлорэтана перемешивают 18 ч при 20°С. Реакционную смесь разбавляют хлороформом до 70 мл и вьшивают в 40 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Водный слой отделяют и промывают хлороформом ( мл). Хло- роформные растворы объединяют, суШат безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на сили50

55

и хроматографируют на силикагеле L 40/100 (200 см). Колонку злюируют смесью хлороформ - метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 6% (объемных). Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Получают 1,44 г (62,2%) 2-Н-ацетш1-9-(2,5-ди-0-бензоил-3- -фтор-З-дезокси- -Б-рибофуранозил)гуанина (Ilia) в виде аморфного порошка (после высаживания в гексан), т.пл. 135-138°С

УФ-спектр: Л в нм (lg): 234 (4,53); 259 (4,32); 280 (4,22).

кагеле L 100/400 (300 см). Колонку -элюируют смесью, растворителей хлороформ - метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 12% (объемных). Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Получают 1,99 г (82%) 6- -М-б ензоил-9-(2,5-ди-0-бензоил-3-фтор-3-дезокси-/з-В-рибофуранозил)

УФ спектр: Д

EiOH, мсхчс

в нм ( 232

денина (На) в виде сиропа.

(с, 1Н, NHBz); 8,56 и 8,13 (с, по

(4,56); 280 (4,30).

Спектр ПНР (CDClg), , м.д.: 9,03

ароматика); 6,47 (д, 1Н, Н-1 , J,fir 7,0 Гц); 6,37 (м, 1Н, Н-2 ); 5,80 (м, 1Н, Н-3 ); 4,87 (дд, 1Н, Н-5 );

4,82 (м, 1Н, Н-4 ); 4,63 (дд, 1Н,

Н-5 ).

Найдено, %: С 63,90; Н 4,00; N 11,90; F 3,21. . ..

. Вычислено, %: С 64,02; Н 4,15; N 12,04; F 3,26.

Пример 3. 2-К-Ацетил-9- -(2,5-ди-0-бензоил-3 фтор-3-дезокси- -/i-D-рибофуранозил)гуанин (Ilia).

I . ,

Смесь 1,74 г (4,32 ммоль) соеди- нения (I) и триметилсилильного производного 2,9-Н,Ы-ацетилгуа1-ина, полученного кипячением в течение 3-х ч

из 1,2 г (5,10 ммоль) 2,9-К,Ы-аце- тилгуанина в 30 мл гексаметилдиси- лазана, 0,91 мл (1,11 rf 5,0 ммоль) триметилсилилтрифторметансульфоната в 50 ют дихлорэтана кипятят 1,5 ч.

Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в 150 мл хлороформа и про- насыщенным раствором бикарбоната натрия ( мл) , водой (.мл). Хлороформный раствор сушат безводным сульфатом натрия, упаривают

и хроматографируют на силикагеле L 40/100 (200 см). Колонку злюируют смесью хлороформ - метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 6% (объемных). Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Получают 1,44 г (62,2%) 2-Н-ацетш1-9-(2,5-ди-0-бензоил-3- -фтор-З-дезокси- -Б-рибофуранозил)гуанина (Ilia) в виде аморфного порошка (после высаживания в гексан), т.пл. 135-138°С

УФ-спектр: Л в нм (lg): 234 (4,53); 259 (4,32); 280 (4,22).

2Н, Н-1 и Н-2); 5,64 (м, 1Н, Н-3 ); 4,75 (дд, Ш, Н-5 ); 4,62 (м, 1Н, Н-4 ); 4,54 (дц, 1Н, Н-5); 2,30 (с, ЗН, NAc).

Найдено, %; С 58,40; Н 3,97; N 12,87; F 3,28. .

.

Вычислено, %: С 58,31; Н 4,14J N 13,07; F 3,54

515077646

Спектр ПМР (CDClj), о м.д.: 12,19 Растворяют 1,1 г (1,89 ммоль) сое- (с, 1Н, NHAc); 10,69 (с, 1Н, NH); динения (На) в 20 мл 0,3 М раствора 8,00 -7,37 (м, ЮН, ароматика); метилата натрия в метаноле, вьщержи- 7,85 (с, 1Н, Н-8); 6,21 - 6,15 (м, ., j. вают при 20°С 10 ч. Реакционную смес-ь

нейтрализуют добавлением 0,34 мл уксусной кислоты и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на ионообменной смоле Дауэкс 18 (ОН -форма, 0 300 см).Колонку элюируют сначала водой, затем смесью метанол - вода 4:1. Фракции, содержащие нуклеозид- ный продукт, собирают и упаривают. Остаток кристаллизуют из этанола. : Пример 4. 1-(2,-5-ди-0-бен- 15 Получают 0,38 г (74,6%) 9-(3-фтор-3- зоил-З-фтор-З-дезокси-р-В-рибофура- -дезокси- 5-В-рибофуранозил)аденина нозил)цитозин (IVa)..

Смесь 1,1 г (2,73 ммоль) соедине-. ния (I) и триметилсилильного производного цитозина, полученного кипяче- 20 нием 0,3 г (2,70 ммоль) цитозина в смеси 1,0 мл триметилхлорсилана и 5,0 мл гексаметилдисилазана в течение 2-х ч, 0,5 мл (0,61 г, 2,70 ммоль)

триметилсилилтрифторметансульфоната 25 5,1Ь(дд, 1Н, Н-З ); 4,95 (м, 1Н, в 25 МП дихлорэтана кипятят l ч. )j 4,31 (м, 1Н, Н-4 ); 3,68 (м, Раствор упаривают, остаток растворяют в 100 МП хлороформа и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x30 мл) и водой ( мл). Хло- ЗО роформньш раствор сушат безводным сульфатом натрия, упаривают и хро(II). Т.пл. 211-2124.

УФ-спектр: , нм (Igf): 260

( КС

(4,16).

Спектр ПМР (DMCO-dg), Г, м.д.: 8,37 и 8,15 (с, по Ш, Н-2 ); 7,40 (с, 2Н, NHi); 5,96 (д, Ш, H-l , J 7,8 Гц); 5,92 (д, Ш, 2 -ОН, J , 6,ОГц); 5,78 (дд, 1Н,5 -ОН);

2Н, Н-5 , Н-5 ).

Найдено, %: С 44,66; Н 4,52; N 25,80; F 7,08.

C oHj NsOaF.

Вычислено, %: С 44,61; Н 4,49; N 26,01; F 7,05.

матографируют на силикагеле L40/100 (150 см ). Колонку элюируют смесью хлороформ - метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 10% (объемных). Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Остаток кристаллизуют из этанола. Получают 0,92 г () 1-(2,5-ди-0-бензоил-3-фтор-3-дезок- си- -В-рибофуранозил)цитозина (IVa), Т.1Ш. 203-205°С.„

УФ-спектр: i

.

с в нм (lg): 231

(4,69); 269 (4,13).

Спектр ПМР (CDC1,,), , м.д.: 8,05 7,40 (м, ЮН, ароматика); 7,30 (д, Ш, Н-6, Jj5 Гц); 6,11 (д, 1Н, Н-Г, J ,. г, 4,8 Гц); 5,81 (д, Ш, Н-5, Jj-j 6,6 Гц); 5,68 (м, 1Н, Н-2 ); ,53 (м, 1Н , Н-З ); 4,73 - 4,55 (м, ЗН, Н-4 , Н-5 , Н-5 ).

Найдено, %: С 60,80; Н 4,40; N 9,30; F 4,10.

Сг. HioNaO F.

Вычислено, %: С 60,92; Н 4,44; N 9,26; F 4,18.

Пример 5. 9-(3-фтор-3-де- зокси- -D- рибофуранозил)аденин (II).

нейтрализуют добавлением 0,34 мл уксусной кислоты и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на ионообменной смоле Дауэкс 18 (ОН -форма, 300 см).Колонку элюируют сначала водой, затем смесью метанол - вода 4:1. Фракции, содержащие нуклеозид- ный продукт, собирают и упаривают. Остаток кристаллизуют из этанола. Получают 0,38 г (74,6%) 9-(3-фтор-3- -дезокси- 5-В-рибофуранозил)аденина

5,1Ь(дд, 1Н, Н-З ); 4,95 (м, 1Н, )j 4,31 (м, 1Н, Н-4 ); 3,68 (м,

(II). Т.пл. 211-2124.

УФ-спектр: , нм (Igf): 260

( КС

(4,16).

Спектр ПМР (DMCO-dg), Г, м.д.: 8,37 и 8,15 (с, по Ш, Н-2 ); 7,40 (с, 2Н, NHi); 5,96 (д, Ш, H-l J 7,8 Гц); 5,92 (д, Ш, 2 -ОН, J , 6,ОГц); 5,78 (дд, 1Н,5 -ОН);

5,1Ь(дд, 1Н, Н-З ); 4,95 (м, 1Н, )j 4,31 (м, 1Н, Н-4 ); 3,68 (м,

2Н, Н-5 , Н-5 ).

Найдено, %: С 44,66; Н 4,52; N 25,80; F 7,08.

C oHj NsOaF.

Вычислено, %: С 44,61; Н 4,49; N 26,01; F 7,05.

Пример 6. 9-(3-фтор-3-де- зокси-/ь-В-рибофуранозил)гуанин (III)

Растворяют 1,2 г (2,24 ммоль) соединения (Ша) в 50 мл насыщенного . при раствора аммиака в метаноле, выдерживают трое суток при 20 С и упаривают. Остаток растирают с 50 мл , осадок отфильтровьшают и кристаллизуют из воды. Получают 0,45 г (70,4%) 9-(3-фтор-3-дезокси- - -D-рибофуранозил)гуанина (III), Т.пл. 289-291°С (с разложением).

УФ-спектр: , нм (lg): 253 (4,14); 269 плечо (4,00).

Спектр ПМР (DMCO-d р , / , м.д.: 7,91 (с, 1Н, Н-8); 6,34 (с, 2Н, NH j); 5,88 (с, 1Н, 5 -ОН); 5,75 (д, Ш, , Н-1 , J 8,4 Гц); 5,42 (с, 1Н,2 -ОН); 5,04 (дд, 1Н, Н-З ); 4,75 (м, Ш, Н-2 ); 4,20 (м, 1Н, Н-4 ); 3,59 (д, 2Н, Н-5 , Н-5).

Найдено, %: С 42,30; Н 4,17; N 24,25; F 6,55.

.

Вычислено, %: С 42,10; Н 4,24; N 24,55; F 6,66.

71507764

: Пример 7. 1-(3-фтор-3-дезок- си- -В рибофуранозил)цитозин (IV).

Растворяют 0,А1 г (0,9 ммоль) соединения (IVa) в 30 мл насыщенного при 0°С раствора аммиака в метаноле, Iвьщерживают двое суток и упаривают. IОстаток растирают с 30 мл эфира, осадок отфильтровьшают и кристаллизуют из этанола. Получают 0,18 г (81,2%) 1-(3-фтор-3-дезокси-|й-В-ри- бофуранозил)цитозина IV, т.пл. 2218

10

223 С.

УФ-спектр: Л ,

им (Ig): 270 (3,92).

Спектр IMP (DMCO-d), V, м.д.: 7,73 (д, 1Н, Н-6, J 7,2 Гц); 7,24 (с, 1Н, NH); 7,18 (с, 1Н, NH); 5,92 (д, 1Н, Н-1 , J 7,8 Гц); 5,78 (д, 1Н, Н-5, J 7,2 Гц); 4,92 (дд, 1Н, Н-3 ); 4,25 (м, Ш, Н-2 ); 4,13 (м, Ш, Н-4 ); 3,55 (м, 2Н, Н-5 ,- Н-5).

Найдено, %: С 43,97; Н 4,88; N 17,01; F 7,57.

.j04F.

Вычисленс), %: С 44,08; Н 4,93; N 17,13; F 7,74.

. Цитостатическую активность 9-(3- -фтор-З-дезокси-р-В-рибофуранозил)- аденина -(И) 9-(3-фтор-3-дезокси- -fl-D-рибофуранозил)гуанина (III) и 1-(3-фтор-3-дезокси-/}-В-рибофурано- зил)цитозина (IV) изучали в системе in vitro при инкубировании суспенЦифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики.

Производное аденозина (II) проявляет четко выраженный эффект уже чеч рез 3 ч ин1 :убации; содержание жизнеспособных клеток по отношению к контролю (контроль принимался за 100%) составляет 64,7±6,8 и.81,3±4,2% при концентрации препарата 5 соответственно. Спустя 24 ч инкубации эффект подавления лейкоз- ных клеток L-1210 наблюдается при действии всех фторсодержащих нуклес15 зидов II - IV (данные представлены в таблице).

В сравнении с этим известный структурный аналог - противолейкоз- ный препарат - циклоцитидин (V) на20 чинал проявлять цитостатический эффект только после 24 ч инкубации, а содержание погибпих лейкозных кле- TfOK составляло лишь 3,9% по отноше нию к контролю.

25Влияние in vitro 3 -фтор-3 -дезокси-р-В-рибофуранозидов аденина (II), гуанина (III), цитозина (IV) и про- тиволейкозного препарата - циклоцитидина (V) на клеткиЪ-1210 представлено

30 в таблице.

Таким образом, 1-0-ацетш1-2,5-ди- -О-бензоил-З-фтор-З-дезокси-В-рибофу-, раноза (I) является удобным промежуточным продуктом в синтезе ранее не

дированной культуры асцитической лей-,5 описанных 3 -фтор-3 -дезокси-рибонуккозной опухоли штамма лимфолейкоза L-1210, В каждом опыте использовали по 2 мл взвеси, содержащей 1-1,IT 10 лейкозных клеток. Препарат применяли в концентрациях- 5 10 и 5 «10 моль/л в виде раствора в 0,9%-ном растворе хлорида натрия, В контрольных опытах вместо растворов препарата в пробирки добавлялся раствор хлорида натрия После инкубирования в течение 3 и 24 ч в каждом опыте подсчитывалось общее количество клеток в 1 мп взвеси, содержание жизнеспособных клеток и отношение его к содержанию жизнеспособных клеток в контрольном опыте

40

45

о

леозидов II - IV, обладающих биологической активностью.

Формула изобретения

1-0-Ацетил-2,5-ди-О-бензоил-З- -фтор-З-дезокси-D- рибофураноза формулы

,Н,.

Vf

F ООССбН

в качестве промежуточного продукта в синтезе биологически активных 3- -фтор-З -дезоксирибЭнуклеозидов.

8

Цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики.

Производное аденозина (II) проявляет четко выраженный эффект уже чеч рез 3 ч ин1 :убации; содержание жизнеспособных клеток по отношению к контролю (контроль принимался за 100%) составляет 64,7±6,8 и.81,3±4,2% при концентрации препарата 5 соответственно. Спустя 24 ч инкубации эффект подавления лейкоз- ных клеток L-1210 наблюдается при действии всех фторсодержащих нуклесзидов II - IV (данные представлены в таблице).

В сравнении с этим известный структурный аналог - противолейкоз- ный препарат - циклоцитидин (V) начинал проявлять цитостатический эффект только после 24 ч инкубации, а содержание погибпих лейкозных кле- TfOK составляло лишь 3,9% по отноше нию к контролю.

Влияние in vitro 3 -фтор-3 -дезокси-р-В-рибофуранозидов аденина (II), гуанина (III), цитозина (IV) и про- тиволейкозного препарата - циклоцити, дина (V) на клеткиЪ-1210 представлено

в таблице.

Таким образом, 1-0-ацетш1-2,5-ди- -О-бензоил-З-фтор-З-дезокси-В-рибофу-, раноза (I) является удобным промежуточным продуктом в синтезе ранее не

,5 описанных 3 -фтор-3 -дезокси-рибонук40

45

о

леозидов II - IV, обладающих биологической активностью.

Формула изобретения

1-0-Ацетил-2,5-ди-О-бензоил-З- -фтор-З-дезокси-D- рибофураноза формулы

,Н,.

Vf

F ООССбН

в качестве промежуточного продукта в синтезе биологически активных 3- -фтор-З -дезоксирибЭнуклеозидов.

Эффективность определена, как отношение % погибЕШх клеток под действием фторпроизводных соединений к % погибших клеток под действием циклоцитидина.

Изобретение относится к химии сахаров , в частности, к 1-0-ацетил-2,5-ди-о-бензоил-3-фтор-3-дезокси-Д-рибофуранозе, которая может быть использована как промежуточный продукт в синтезе новых 3Ъ-фтор-3Ъ-дезоксирибонуклеозидов, обладающих цитостатической активностью, и может быть использовано в производстве лекарств. Цель - новый полипродукт для получения новых биологически активных веществ. Синтез ведут из 2,5-ди-0-бензоил-3-фтор-3-дезокси-α,(β)-Д-рибофуранозы и уксусного ангидрида в среде уксусной кислоты в присутствии серной кислоты. Выход ъ 90%. Брутто-ф-лы C₂₁H₁₉O₇F. Дальнейшее получение 3Ъ-фтор-3Ъ-дезоксирибонуклеозидов осуществляют гликозилированием полученного соединения соответствующим производным нуклеинового основания (аденин, гуанин, цистозин) в присутствии кислоты Льюиса и деблокированием полученных продуктов в основной среде. Выход 60-70%. 1 табл.