Способ глубинного культивирования Советский патент 1979 года по МПК A01N15/00 C12K1/06 

(54) СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ 6АС. THURINGIENSIS

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть, в частности использовано для получения энтомопатогенных бактериальных препаратов в условиях крупно. тоннажного производства. Известны способы глубинного культивирования энтомопатогенных бактериальных препаратов - дендробациллина-ЗА 1 -и знтобактерина 2. Существо этих способов основано на глубнн ном культивировании штаммов-продуцентов, засеваемых в рабочие ферментерь., загруженные жидкой питательной фёдойопределенного состава. Однако в крупнотоннажном производстве эти способы малоэффективны, так как требую большого количества сырья на единицу готовой продукдаи. В качестве сырья используют глюкозу и кукуруэньЕЙ экстракт, которые являются дефицитными. Наиболее близким к изобретению является способ глубинного культшшрования Вас. thuringiensis фермента1шей на жидкой гштательной среде с послелу1Ш1МИ сепарированием и сушкой полученного споро-.кристаллического комплекса 3. В качестве жидкой питательной среды используют дрожжеполисахаридную питательную среду Фабича, содержащую (%) 3 кормовых дрожжей (БВК), 1,5 кукурузной муки и 95,5 воды. На 1 т такой среды расходуют 45 кг кормового сьфья. Выход из 1 т культуральной жидкости после глубинного культивирования продуцента не более 5-10 кг споро-кристаллического комплекса. Такой высокий расход сьфья на единицу сухого концентрата приводит к весьма неэкономичному использованию дрожжей и кукурузной муки. Крометого, в процессе приготовления жидкой дрожжеполисахаридной питательной среды вместе с сухими дрожжами и кукурузной мукой в питательную среду попадает большое количество термоустойчивых фагосодержащих спор Вас. thuringiensis, которые выдерживают режимы стерилизации и затем, когда осуществляется процесс глубинного культивирования продуцента, постоянно обнаруживаются в виде размножающейся вегетативной фагопродуцирующей культуры.

36

Целью изобретения является сокращение расхода icopMOBoro сьфья и ликввдадая в питательной среде фагопродуцирующего материала.

Указанная цель достигается за счет того, что в способе глубинного культивирования Вас. thuringiensis ферментацией на жидкой питательной .феде с последующилт сепарированием и сушкой гюлученного споро-кристаллическо -о комплекса ферментацию проводят в два этапа; на эталв ферментацию ведут в течение 1014 ч до стадии грануляции вегетативных клеток которые затем убивают прогреванием культуралной жидкости при 90-100°С, на II этапе прогретую к;рыуральную жидкость разбавляюТ водой в 2-3 раза, стерилизуют, засевают свежим стерильным посевным матеркалдм продуцента и проводят процесс до спорообразования и высьшания культуры Вас. thuringiensis. Причем культуральной жидкости после этапа осуществляют в течение 30-40 мин, а после проведения II этапа в культуральную жидкость добавляют 0,5 вес.% каолина.

Пример. В рабочийферментер, заполненный стерильной регламентной питательной средой, помйцают обычным способом посевной материал продуцента энтомопатогенного бактериальногс препарата и ведут ферментацию на I этапе при .в течение 14, 10 или 12 ч до стадш ,1-рануляции вегетативных клеток-. За этот промежуток времени глубинного кулыи-4

вирования культура продуцента дает максимальное число генераций и успевает частично переработать и усвоить компоненты питания. Успевают также прорасти и размножиться фагогфодуцирующие термоустойчивые споры, попав. шие в среду при ее приготовлении и вьщержавцше режимы стерилизации. В этом состоянии культуральную жидкость в ферментере подогревают сухим паром, температура прогрева 100, 90 или 95° С, время вьщержки при такой температуре 40, 30 или 35 мин.

На 11 этапе ферментации культуральную жидкость с убитыми клетками продуцента и убитыми клетками фагопродуцента разбавляют водопроводной водой в 3, 2 или 2,5 раза. Перемешивают, вновь стерилизуют любым извесным способом, заполняют ферментеры, засевают их новой порцией посевного материала и осуществляют процесс наработки биомассы. Питанием для продуцента на II этапе служат остатки в культуральной жидкости дрожжей и кукурузной муки, а также биомасса убитых вегетативных клеток от 1 этапа. Неофедственно перед сепарацией в культуральную жидкость добавляют каолин из расчета 0,5% для лучшего отделения споро-кристаллического комплекса при сепарации.

В таблице приведены данные, показьшаюпди: преимущество способа согласно изобретению в сравнении с известными.

vq о

1О

г

о

VO

оо

rj r-J

г п

S

л

г

«

о а.

с

fe п

3н М

03

Ю

Г) Сравтпвпьные данные таблнцы показывают, что способ глубинного культивирования Вас. thuringiensis согласно изобретению позволяет получать «двое больше продукции на одну и ту же веоэвую единицу кормового сырья, расходуемого для приготовления питательной сред для глубиЕШого культивирования продуцентов. jKpoMe того, в процессе культивирования значи тельно сокращается число ферментации, в куль туральной жидкости которых обнаруживается вирулентньш фаг. Ф о р м ула изобретения 1. Способ глубинного культивирования Вас. thuringiensis ферментацией на жидкой питательной среде с последующими сепарированием и сущкой полученного споро-кристаллическога комплексе, отличающийся тем, что, с целью сокращения расхода кормового сырья и ликввдации в питательной среде фагопродуцирующего материала, ферментацию проводят в два этапа; на первом этапе ферментацию ведут в Тзчение 10-14 ч до стадии, гранулящи вегетативных клеток, которые затем убивают прогреванием культуральной жидкости при 90-100°С, на втором этапе прогретую культуральную жидкость разбавляют водой в 2-3 раза, стерилизуют, засевают свежым стерильным посевным материалом продуцента и проводят процесс до спорообразования и высыпания культуры Вас. thuringiensis. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что прогрев культуральной жидкости после первого этапа осуществляют, в течение JO- 40 мин. 3.Способ по пп. I и 2, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что после проведения второго этапа в культуральную жидкость добавляют 0,5 вес.% каолина. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Авторское свидетельство СССР № 134524, кл. С 12 К 3/00, 1958. 2.Авторское свидетельство СССР N 144579, кл. А 01 N 15/00, 1960. 3.Авторское свидетельство СССР № 362048, кл. С 12 К 1/06, 1970 (прототип).