Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и Касаетоя получения биопогически-акттшнЫх. препаратов для лечения и диагностики иммунодефицитных состояний.
Известен способ получения вешестеа, стимулирующего созревания Т-лимфоцитов, путем дефибринированияплазмы сыворотки, диализа против солевого буферного раствора, хроматографии на сефадексе G 25, затем на карбоксиметшщеллюлозе, обработки активиниро- :Вайным углем,, тонкослойной хромато графии в системе бутанол- пиридин и выделением целевого продукта электрофорезом fl.
Однако известный способ является трудоемким, требует большого количества Сыворотки, что ограничивает его производительность и удорожает производство препарата.
Целью изобретения является упрощение технологического процесса.:
Зта-цель достигается .тем, что ткань тимуса Крупного, рогатого скота иэмельчают, дНализуют против воды 6 течение 29-24 ч, диализат хроматографируют на иммобилизированном эуглобулине при ионной силе 0,14 - 0,15 и элюируют целевой продукт водой.
П р и м е р. 0,5 кг TH.tyca теленка гомогенизируют в 0,14 М NaCC (1:2 вес./объем) и.диализуют против 5,0 - 10, О объемов дистиллированной воды в течение 24 ч. В диализат добавляют расчитанное количество NaCb, чтобы, его конечная молярная концентраj ция достигла значения 0,14, рН диализата доводят до 7,2 - 7,5 добавлением бикарбоната натрия. Диализат пропускают через колонку, содержащую иммобилизированный эуглобулчн б.ыка,. или инкубируют
0 с сорбентом, суспендированным в диализате в течение 5 - 8 ч при 4 С-0,5 С . Затем сорбент отКшвают в Колонке (или на ворошсе Бюхнера) О,14 М НаСб забуферненнь1М бикарбонатом натрия, иод 3 контролем спектрофотометра (до экстин ции в промывных водах, (при 260 280 нм не более 0,001). Сорбировав шийся фактор элюируют дкстиллированной водой и лиофилизируют. В случае применения колоночного метода выход фактора контролируется с помощью спек рофотометра. Элюированную фракцию лифилизируют, В случае применения воронки сорбент выдерживают в течение 2 ч в двух объемах дистиллированной воды, отделяют фильтрованием и лио филизируют. Приготовление сорбента. Сыворотку быка диализуют против 10-кратного объема дистиллированной воды в течение 48 ч. Выпавшие в осадок сывороточные эуглобулины отделяю фильтрованием. Осадок растворяют в. минимальном, объеме 0,14 з буференномб.О м концентрацией бикар- бонатного буфера рН 7,5. 30 мл растЧисло розеткообразующих
Испытуемые сыворотки клеток
Контроль
А нтил имфсщитарная сыворотка
50 мкг ФСД
50 мкг ФСД с антилимфоцитарной сывороткой
Влияние фактора тимуса, вьвдёленного мeтoдo аффинной хроматографии, на количество розеткообразующих клеток в
Количество розеткообразующих лимфоцитов крови больных опухолями ЛОР органов, %
24 14,5 ЗО 16
Число наблюдений
6
22 8
23
составе лимфоцитов крови больных опухшями ЛОР органов показано в табл. 2.
Таблица2
Количество розеткообразующих лимфоцитов крови боьлных опухолями ЛОР органов, %, после инкубации с исследуемым фактором
Ко1щентрация в 10 мкг/мл
52 42 36 41 0 Ч вора ЭуГЛОбуЛИНОВ с KOFDJtMJTpfUIin.rt ( 80,0-20,0 мг/мл инкубируют с 5 мл набухшей целлюлозы, софпдекса или сефарозы, активированной Bi CN известным способом. Инкубацию проводят при рН 9,5. Определение активности осуществляется известным способом по увеличению чувствительности розеткообразуюших лимфоцитов селезенки тимэктомирован- ных мышей к антилимфоцитарной сыворотке или азотиоприну. 10 лимфоцитов селезенки тимэктомированных мъЕцей инкубируется- с 50, О мкг лиофилизированного препарата (по сухому весу), после чего испытывается чувствительность розеток, образуемых этими клетками с эритроцитами барана, к антилимфоцитарной сыворотке. В табл. 1 приведены результаты испытания фактора, стимулирующего дифференцировку Т-лимфоцитов (ФСД). Таблица
Количество розеткообразующих лимфоцитов крови больных опухолями ЛОР органов, %
Продолжение табл. 2
Количество розеткообразующих лимфоцитов крови больных опухолями ЛОР органов, %, после инкубации с исследуемым фактором
Концентрация 1 мкг10 мкг
100 мкг
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТЕРОСКЛЕРОЗА | 1991 |
|
RU2018841C1 |
| Штамм культивируемых гибридных клеток животных МUSмUSсULUS L - продуцент моноклональных антител против В-лимфоцитов крупного рогатого скота | 1988 |
|
SU1645295A1 |
| Способ получения иммуносупрессивного фактора | 1981 |
|
SU1118367A1 |
| СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ | 1994 |
|
RU2077057C1 |
| Способ определения активности гормонов тимуса | 1987 |
|
SU1622820A1 |
| СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ПОВЫШЕННОГО ОНКОЛОГИЧЕСКОГО РИСКА | 1993 |
|
RU2088245C1 |
| Способ получения цитотоксических к раковым клеткам лимфоцитов и способ получения гликосвязанного антигена | 1982 |
|
SU1412596A3 |
| СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ | 2000 |
|
RU2177803C1 |
| ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО В ФОРМЕ СПРЕЯ | 2005 |
|
RU2286765C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОАКТИВНЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ/ПЕПТИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ИММУНОКОРРИГИРУЮЩИМИ СВОЙСТВАМИ | 2006 |
|
RU2327475C1 |
Предлагаемый способ получения препрепарата тимуса, стимулирующего созре вание Т-лимфоцитов, позволяет выделить фактор с помощью одной хроматографической процедуры, не требующей применения колонок, из любого количеств исходного материала; предусматривает этооцию конечного продукта водой, что избавляет от необходимости очистки конбчного продукта от солей и тем самыМ удешевляет его наработку. Для выделения фaJcтopa по методу Баха требуется 10 препаративных приемов, а по предлагаемому способу - 3. и диагностики иммунодефицитных состояний. Ф о р м у л ,а и 3 о б р е т е н и я Способ получения вещества, стимули- рующего созревания Т-лимфоцитов, путем диализа животного сырья н хроматографии, отличающийся тбм, что,-с целью упрощения технологического процесса, ткайьтимуса крупного рогатого , скота измельчают, диализуют против воды 6 течение 20 - 24 ч, диализат хроматографируют на иммобилизированном эуглобулине при ибнной силе 0,14 0,15 и элюируют делевой продукт водой. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент Франции № 2265404, А 61 К 37/24,опублик. 1977 (прототип).
