Способ определения активности полифенол-оксидазы Советский патент 1979 года по МПК G01N31/14 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЬЛИ« ЕНбЛОКСИДАЗЬГ

Изобретение относится к области аналитической хнмни, a именно к способам определения активности полифенолоксидазы. Известен способ определения активности пол фенолоксидазьт, основанш й на измерении колй чества поглощенного кислорода {1}. Недостатком способа является невысокая ,| точность определения. Наиболее близок к описываемому по технической сущности и достигаемому результату способ определения активности полифенолоксвдазы, заключающийся в обработке анализирующей пробы субстратом-хлорогеновой кислотой с последующим спектрофотометрированнем полученного раствора 2. Недостатком способа является низкая чувствительность (минимальная определяемая концентрация равна 10 М). Цель изобретения - повышение чувствитель ности определения. Поставленная цель достигается описываемым способом определения активности полифенол-, оксидазы, заключающимся в обработке анализируемой пробы эскулетипом при рН среды ,0 и измерении люминесценции полученного раствора. Эскулетин принздлежнт к классу природных фенольных соедннёний - кумаринов. Прёдлагаёмъ1Й позволяет определ}пъ активность полифенолоксидазы с высбкой чувствительностью приконцентрации С 10- М. П р и М е р. 50 мг ацетонового препарата, приготовленного из клубней картофеля или водорослей нителлы вносят в колбу с 50 мл раствора эскулетина в фосфатном буфере при рН и чёрёУнекоторьГе промежутки времени отбирают пробы ло 2-3. мл , переносят в кювету с 1 1,5 мм, записывают спектр люминесценции на спектрофотометре MPS 50. .Активность выражают как изменение интенсивности свечения за 5 или 10 мин 1 мг препарата-. Интенсивность свечения растворов эскулетина (Ю и 5-10-М) при добавлении ферме ггных препаратов нителлы и картофеля (Пмг/мл) привеДёйа в табл. 1..

Активность полифенолоксидазы в ацетоновых препаратах нитеплы и картофеля приведеНЬ1 в табл. 2.,

Таблица 2

Время

5 мин I 10 мин

0,20 0;28

0,15 0,20

Оптимальной областью, тфигодной для аналитических определений люминесцентным методом, является область рН от 6,5 до 8,0.

Активность препаратов фенолоксщаз при различных рН (изменение интенсивности люминесценции за 5 мин 1 мг препарата) приведена в табл. 3.

Таблица 3

706771

4 Таблица I

Продолжение таблицы 3

Формула изобретения

Способ определения активности полифенодоксвдазы путем обработки анализируемЪй пробы субстратом, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, в качестве субстрата используют эскулетин, обработку ведут при рН среды 6,5-8,0 и измеряют люминесценцию полученного раствора.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

iHesst.H ppe pVienotasi о| ТоЬси со c(n«ritB Par icipatiort inAwino Metabo,ism AfcWv В-(.Ъ10р - 5-1958,гП4, p 198-208.

2.sis-ter E-C-Jvans )ire-ct spectropliotometric acid Biodiew.Bioplrse.Ac-td l«)58,,p-6b8-639