Способ определения фосфатазной активности микроорганизмов Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/42 

мических свойств. Субстратный карандаш приобретаеттвердопластичную консистенцию, имеет белый цвет и обладает хорошими пишущими свойствами по стеклу, фарфору и другим поверхностям.

Все субстратные карандаши на фоефа- тазу, содержащие ингредиенты в пределах граничных значений их количественного содержания, изготовляются строго аналогично приведенному примеру и обладают хорошими пишущими свойствами, пластичностью, длительной сохранностью и обеспечивают высокую скорость прохождения реакции.

Бумажные диски для учета результатов опыта готовят следующим образом.

Берут обеззоленный фильтр площадью 70-80 см2, опускают в чашку Петри с 1%- ным раствором гипероксида калия и выдерживают 3 мин для равномерного пропитывания щелочью, затем диск высушивают и разрезают на диски или квадратные пластины площадью 1 см и хранят в темном, сухом месте при комнатной температуре,

Для определения фосфатазной активности микроорганизмов на чистое предметное стекло наносят субстратным карандашом штрих длиной до 1 см. Затем на штрих наносят каплю физраствора и в ней эмульгируют полную бактериологическую петлю суточной агаровой исследуемой микробной культуры. Предметное стекло помещают во влажную камеру чашки Петри и инкубируют при 37°С 15-20 мин, после чего извлекают чашку из термостата и вносят в культурально-субстратную смесь бумажный диск, пропитанный гипероксидом калия. Учет результатов опыта проводят по хромогенной реакции. При положительном результате диск мгновенно окрашивается в розовый цвет вследствие взаимодействия фенолфталеина с гипероксидом калия. При

отрицательном результате диск сохраняет инициальную белую окраску.

Сравнительное определение фосфатазной активности микроорганизмов с помощью субстратного карандаша и классическим способами 13 музейных и 351 клинических штаммов показало 100%-ное совпадение результатов, что свидетельствует о высокой специфичности способа.

Кроме того, способ отличается экспрес- сностью анализа, экономичностью и простотой в постановке, что делает его доступным для любой лаборатории. Формула изобретения Способ определения фосфатазной активности микроорганизмов, предусматривающий внесение исследуемой культуры в среду, содержащую субстрат - фенолфтале- инфосфат натрия, инкубирование полученной смеси при оптимальной температуре, подщелачивание и учет результатов по хромогенной реакции, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, исследуемую культуру суспендируют в капле физраствора в присутствии среды, дополнительно содержащей полиэтиленг- ликоль 4000, сахарозу, бычий сывороточный альбумин и глицерин при следующем соотношении компонентов, мас.%: Полиэтилен- гликоль 400060,6-62,5 Сахароза 7,58-7,81 Бычий сывороточный альбумин6,06 - 6,25 Глицерин 7,58 - 7,81 Ф е н ол фтал еинфосфат натрия15,63-18,18 и выполненной в виде карандаша, штрих которого наносят на предметное стекло, смесь инкубируют 15-20 мин, подщелачивание проводят введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта.

Использование: медицинская микробиология, определение фосфатазной активности микроорганизмов. Сущность: микробную культуру суспендируют в капле физраствора в присутствии среды, выполненной в виде карандаша. Смесь инкубируют 15-20 мин, подщелачивают введением бумажного сухого диска, пропитанного гипероксидом калия. По изменению окраски диска учитывают результаты опыта. Среда содержит (в мас.%): полиэтиленгликоль 4000 60,6-62,5: сахарозу 7.58-7,81; бычий сывороточный альбумин 6,06-6.25; глицерин 7,58-7,81; фенолфталеинфосфат натрия 15,63-18,18. ратуре 15-20 мин, подщелачивают введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта. Для осуществления способа предварительно готовят компоненты необходимые для его постановки: субстратный карандаш, содержащий в качестве специфического субстрата фенолфталеинфосфат натрия, и бумажные диски, пропитанные гипероксидом калия для учета результатов опыта. Пример. Для приготовления субстратного карандаша в фарфоровую ступку последовательно вносят полиэтиленгликоль 4000 2 г, сахарозу 0,25 г, бычий сывороточный альбумин 0,15 г и тщательно растирают 10 мин до получения мелкой пудры. Затем ступку вносят b мл 1и%-ного раствора фе- нолфталеинфосфата натрия и 0,2 мл глицерина и продолжают растирать под струей теплого воздуха до образования однородной массы вязкой консистенции, которую формуют в виде карандаша и оставляют на 5 сут при 4°С для стабилизации физико-хи- f Ё