Способ получения кардиолипина Советский патент 1980 года по МПК A61K38/01 A61K38/17 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения активных реагентов, используемых в серодиагностике сифилиса .

Известен способ получения кардиолипина путем экстракции ацетоном измельченной ткани сердца крупного рогатого скота, обработки метанолом, осаждением целевого продукта раствором хлористого бария и выделения в виде натриевой соли 1.

Однако известный способ является трудоемким и обеспечивает невысокий выход целевого продукта (0,35 г из 1 кг сердечной мыыцы) с высоким содержанием примесей до 20-25%.

Целью изобретения явл-яется повышение качества, выхода целевого продукта и упрощение технологии производства.

Цель достигается тем, что экстракцию ацетоном проводят в атмосфере инертного газа при температуре от -2 до и осаждение бариевой соли кардиолипина проводят при температуре от +3 до +5°С.

Способ осуществляют следующим образом.

Сердечную мышцу измельчают на гомогенизаторе, затем трижды проводят экстракцию ацетоном при температуре от -3 до -10°С. Из обезжиренной и обезвоженной сердечной мышцы трижды экстрагируют фосфолипиды метанолом при коцнатной температуре. Общий метанольный экстракт фосфолипидов осаждают водным раствором хлористо0го бария. Полученный осадок растворяют в эфире и дважды переосаждают раствором хлористого бария в метаноле. Бариевую соль кардиолипина растворяют в смеси эфира и этанола и при

5 помощи раствора хлористого натрия переводят в натриевую соль кардиолипина. К полученному раствору добавляют равный объем метанола, а затем кардиолипин осаждают из раствора в

0 виде бариевой соли путем добавления водного раствора хлористого бария. Процесс переосаждения кардиолипина и перевода его в натриевую форму повторяют. Полученный раствор нат5риевой соли кардиолипина в эфире обезвоживают сернокислым натрием, упаривают в токе неокисляюшего газа. Осадок растворяют в абсолютном этаноле. Процессы осаждения и отделе0ния осадков солей кардиолипина проводят при температуре +3 до +5°С. В целях уменьшения процессов окисления весь технологический цикл получения кардиолипина проводят в атмос фере неокисляющего газа (углекислого газа Или азота). П р и м е р. 1 кг обезжиренной ткани сердечной мышцы крупного рога того скота измельчают на гомогенизаторе при 8000 об/мин с ацетоном, охлажденным до температуры -3 К полученному гомогёнату добавляют ацетон до общего объема 2,0 л (далее все объемы указаны на 1 кг сердечной ткани), и проводят экстракцию в реакторе с мешалкой при 150200 об/мин и температуре -3 10°С в течение 3 ч в атмосфере неокисляюще го газа. Ацетон удаляют фильтрацией. Весь процесс проводят трехкратно. Осадок заливают 2,0 л метанола и экстрагируют фосфолипиды в течение 3 ч в реакторе с мешалкой при 150200 об/мин в атмосфере неокисляющего газа при комнатной т&лпературе. Метанол отделяют фильтрацией. Процесс проводят три раза. Все три метакольных экстракта объединяют. И охлажденных до +3 экстрактов осаждают кардиолипин, добавляя 60 м водного раствора 20%-ного хлористого бария (в дальнейшем все процессы осаждения и отделения осадков прово при 3-5°С). Формирующийся 12-18 ч осадок отделяют центрифугированием и промывают 0,5 л метанола. Промыты метанолом осадок бариевой соли кардиолипина растворяют в 100 мл эфира К полученному эфирному раствору добавляют два объема метанола, содержащего 0,2% хлористого бария, размешиваютв течение 30 мин и центрифугируют. Операцию повторяют. Осадо бариевой соли кардиолипина растворяют в 100 мл эфира и 20 мл этанола и добавляют 12 мл 18%-ного раствора хлористого натрия. Водно-спиртовой слой удаляют. К эфирному раст вору добавляют 20 мл этанола и 120 18%-ного раствора хлористого натри Размешивают в течение 40 мин, после чего водно-спиртовой слой удаляют , Операцию повторяют. Указанными операциями переводят бариевую соль кар диолипина в натриевую. К 100 мл эфирного раствора натри евой соли кардиолипина прибавляют 33 мл метанола (1/3 от объема эфира) , Осадок удаляют центрифугированием. К эфирно-метанольному раствору- натриевой соли кардиолипина добавляют 67 мл метанола (так, чтобы соотношение эфир метанол было 1:1) и осаждают кардиолипин в виде бариевой соли добавлением 20 мл водного раствора 20% хлористого бария. Осадок формируется за 12-18 ч, после чего его промывают 100 мл метанола, центрифугируют и растворяют в 100 мл эфира. К полученному эфирному раствору бариевой соли кардиолипина добавляют 200 мл (2 объема) метанола, содерх ащего 0,2% хлористого бария. Размешивают 30 мин и центрифугируют. Операцию повторяют. Осадок растворяют в 100 мл эфира, 20 мл этанола и прибавляют 120 мл 18%-ного хлористого натрия. Размешивают 40 мин и водноспиртовой слой удаляют. Операцию повторяют. Полученный эфирный раствор натриевого кардиолипина Обезвоживают при помощи сернокислого натрия (безводного) и упаривают в токе неокисляющего газа при . Осадок при этом процессе составляет 0,48-0,52 г. Готовый продукт растворяют в 100 мл абсолютного этанола , хранят в темном месте при 3-8°С в атмосфере неокисляющего газа. Предлагаемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта (0,5 г из 1 кг сердечной мьпицы) , умень 11ить количество примесей до 7-10%, упростить технологию производства и сократить технологический процесс с 12 суток до 6 суток. Формула изобретения Способ получения кардиолипина путем экстракции ацетоном измельченной ткани сердца крупного рогатого скота, обработки метанолом, осаждением целевого продукта раствором хлористого бария и выделения в виде натриевой соли, отличающи йс я тем, что, с целью повышения качества выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, экстракцию ацетоном проводят в атмосфере инертного газа при температуре от -3 до -Юс и осаждение бариевой соли кардиолипина проводят при температуре от -t-3 до +5С. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе -1 . Реглсхмент получения кардиолипинового антигена для реакции Вассермана № 36-75, 11.06,75.