Способ получения 5 -цианэтиловых эфиров -защищенных дезоксирибоолигонуклеотидных блоков Советский патент 1980 года по МПК C07H19/18 C07H21/04 A61K29/00 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-ЦИАНЭТИЛОВЫХ ЭФИРОВ

N -ЗАЩИЩЕННЫХ ДЕЗОКСИРИБООЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ БЛОКОВ

Изобретение отйосится к усовершенствовэнному способу получения 5-цианэтиловых эфировН-защищен-. ных дезсжсирибоо. гигонуклеотидных блоков, являквдихся промежуточными продуктами синтеза олигонуклеотидов важного класса природных соединений широко применяющихся в биологичес- ; ких исследованиях. Известен способ получения 5-циан этиловых эфиров Н-защищенных олигонуклеотидов, заключающийся в конденсации 5-цианэтиловых эфиров N -защищенных дезоксирибонуклеотидо с З-О-ацетильными производными N -защищенных нуклеозид-5 фосфатов., в присутствии.мезитиленсульфохлорида или 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида с последующим удалением 3-О-защитной группы действием водной щелочи и .5-цианэтилироВании полученного N -защищенного динуклео тида в присутствии дициклогексилкар бодиимида 1. Недостатками известного способа получения 5-цианэтиловых эфиров защищенных дезоксирибоолигонуклеоти ных блоков являются многостадийно ;т процесса, невозможность избиратель ного отщепления 3-О-адильной згицитной группы в. присутствии 5-цианэтильной, проведение 5-цианэтилирования в присутствии больших избытков дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) и гидракрилонитрила. Целью изобретения является упрощение процесса. Указанная цель достигается использованием в качестве 3-О-ацильных производных З-О-метоксиацётйльных производных нуклеозид-5-фосфатов и удалением З-О-защитной группы обработкой полунасыщенным раствором аммиака в абсолютном метаноле в течение 10-12 мин, что позволяет избирательно удалять только 3-Озащитную группу и изъять из процесса стадию цианэтилирования динуклеотида, а также большое количество токсичных реагентов (ДЦК). Способ получения 5-цианэтиловых эфиров N -защищенных дезоксйрибоолигонуклеотидных блоков, согласно изобретению, заключается в конденсации З-цианэтиловых эфиров N -защищенных дезоксириборлигонуклеотидов с З-О-метоксиацетйльными

производными SI -ашйщеиных нуклеозйд-5-ф6сфатйй с п6слёдУ1ацим удалением 3-О-метоксиацетильной обработкой полунасьлценным раствором аммиака в абсолютном метаноле в течение 10-12 мин. С р&ёЙ1Гё пеЙуЧётайах соединения подтверждено данными хроматографического анализа г УФ-спектрами и методом ПМР., П р и м е р 1, Получение 3 -О-ме окЪиЖЙ(етшШ1ых1тррйзШбдШ5Г . симуклеозид-5-фосфатов (и. а-г)

о-р-о йн1-в

0-Р-0-СН1„ В 0

он

i(a-r)

;; о

1Л(ЙНг гО-Р-6-(5Нг в .

С{йЩ)гО-Р-О-Йи в

-«

П1 (о-в)

в

i -o-eHt

9

О-Р-о- О

о р-о-ен«„ Б

Пиридиниевую соль 1 а-г (1 ммоль) -йыеуаГивают упариванием с абсолютным ййридином, растворяют в , абсолют йр;гОпиридина, добавляют 1 мл мё-,

fШШyйeVc bгв aSfFШ;№Ш7BШepжи- .

вают 4 ч при , добавляют 2 мл абсолютн Ь этанола при О С и выдерживают 1 ч при 0°С.:Рас твор1Й1эль - а-алжт в вакууме до сиропа,, промывают 3x10 мл абсолютного эфира, а йт ируя рас творит ель V Ост ат 6 к выдерживают в 10 мл50|-ног-о вйДного пиридина J ч при 2О°С, упаривают, переупаривают 3 х 5 мл ;воды и пропускают через колонку с Смолы Дауэкс-50 (i- ) , элкЫруя во- /

дои.

i jterH X I f s-

717063

в соединениях I и и а)В-тимин;

б)6- |-6-бензоилаленинг

в)B-N-4-беизоилцитоэинI

г)B- -2-aцeтилгyaJ ин, В соединениях Ж и 5

а)В-В-тимин

б)B-B-N-б-беизоиладенин;

в)в-К -бёнзоиладенин, В-М-4-беноилцйтозин. В соеДИйении V:

В -В-тимин, В-К-4-бензоилцитидии

D -i OCoCHjOtHs

ll(a-r)

а 0

о

O p-OtHf в

ч

р

он

IV (а-в)

g

Раств6р уйар ваот7 переупаривают с

аВсоШ1Ш ЖШ1Гбй7 за-тем с изопропаном Остаток промывают 4x5 мл аВсоЛШбгЬ 1йгзбпрЬпанола, продукт

выделяют федё рёШанией-или центрифугированием в виде литиевой соли,

промывают абсолютным эфиром и сушат в вакууме. Выход соединений,%: Н а 93; Т б 90; в 92; Пг

П р и мер 2. Получение 5-цианэтилового эфира дезокситимидилил- ()-Жё9 экситимидина (IV а).

Смесь ПйриДиииевых солей Aj а (0,S ммоля) и jT а (1 мноль) высуши ваютг упаривани ём с абсолютным пиридином, растворяют в 5 мл абсолют.: V - - ного пиридина, добавляют .3 ммоля мезитиленсульфохлорида, смесь концентрируют до объема 3 мл и перемешивают 3,5 ч при 2Q°C, затем охлаждают до 0°С и добавляют 6 мл 1М триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5), выдерживают 14 ч При 4 с, затем упаривают и переупа ривают (3x5 мл) ri 50%-ным этанолом. Смесь растворяют в 5 мл полунасыщенного раствора NHj в абсолЪт ном метаноле, вьщерживают 15 мин при 200с, упаривают, переупаривают с абсолютным этанолом, растворяют в воде, наносят на колонку (5 х 40 с целлюлозой ДЕ-32 (HCOj,) и хроматографируют в линейном градиенте концентрации (0-0,15 М; 9 л). Продукт упаривают, nepeVnaривают с водой и лиофилиэуют. Выход 52%. Примерз. Получение 5-циа этилового эфира Н-б-бензоилдезокси аденилил-()- -6-бензоилдезокс денозина (IV б). Смесь пиридиниевых солей Мб (0,5 ммоля) и ш б (1,6 мм высушивают упариванием с абсолютньвд пиридином, растворяют в 5 млабсол ного пиридина, добавляют 3 ммоля 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлор да, смесь концентрируют до объема 3 мл и перемешивают 4,5 ч при 20 С затем охлаждают до -30°С, добавляют 6 мл 1 М раствора триэтиламина в абсолютном пиридине, выдерживают при охлаждении 1 ч добавляют при О С равный объем IM триэтиламмоний бикарбонатного буфера и оставляют на 14 ч при 40с. Водный раствор экстрагируют (4 х 50 мл) эфиром, упаривают, переупаривают (3 х 5 мл) с 50%-ным водным этанолом, затем (5 X 5 мл) с абсолютным этанолом, растворяют в 5 мл полуиасыценного раствора NHj в абсолютном метаноле, выдерживают 15 мин при 200с, упаривают, переупарнвают (3 X 5 мл) с абсолютным этанолом, растворяют н воде и хроматографируют, как в примере 1. Выход . П р и м е р .4. Получение 5 -цианэтилового эфира К-4-бензоилдезокcицитидидил-()-N-б-бeнзoилдезоксицитидина () . Нуклеозидный компонент -Шв 1.0,5 ммоля), нуклеотидный компонент11 б (1,0 ммоль), конденсируйщий реагент - 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорид (3,0 ммоля). Методика аналогична примеру 3. Выход 40%. Пример 5. Получение 5-цианэтилового эфира дезокситимидилил- (З-Б )-дезокситимидилил-(3-5 )-W-4-бензоилдезоксицитндина ($) Нуклеозидннй компонент - JO,5 ммоля), нуклеотидный компонент11 в (1,0 ммоль), конденсирующий реагент - ме итиленсульфохлорид (5,0 ммолей). Методика анаПогична| примеру 2. Выход 42%. . ; Формула изобретения Способ получения 5-цианэтиловых эфиров N -защищённых дезоксирибоолигонуклеотидных блоков путем конденсации 5-цианэтиловых эфиров N-защищенных дезоксирибоолигонуклеотидов. с 3-0-ацильными производными N -защищенных нуклеозид-5-фосфатов в присутствии мезитиленсульфохлорида или 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида с последующим удалением 3-о-защитной группы, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве 3-О-ацильных производных спользуют метоксиацетильные производные N -защищенных нуклеоэид-5-фосфатов, а последук)щее удаление ащитной 3-О-метоксиацетильной руппы осуществляют обработкой поунасыщенным раствором аммиака в бсолютном метаноле в течение 0-12 мин. Источники информации, ринятые во внимание при экспертизе 1 ., Khoi- cinq н4 Situd-iea onpoBvuc,eeot-idl 6 cgT.Woe.Bioe, .1972, .72, 219-249 (прототип).