Изобретение относится к усоверше ствованному способу получения ионоциаиэтиловых эфироа защищенных моно нуклеотидов общей формулы 1 в,ос РК. о (Id) OCjHi Cl o-p-o-cj o в он «Cj RjO где В - урацил, цитозин, аденин, гуанин с защищенными реакционными центрами; являющихся промежуточными соединениями для получения олигонуклеотидов,
391
применяемых в молекулярной биологии и молекулярной генетике.
Известен способ получения моноцианэтиловых эфиров защищенных мононуклеотидов формулы I путем взаимодействия В пиридине защищенных нуклеотидов с 2-цианэтанолом в присут ствии триизопропилбензолсульфохлорида, экстракции хлороформом и последующей обработки смеси эфиров смеС1 ю абсолютных триэтиламина и пиридина 6 соотношении 1:1 til. Выход целевых продуктов Й0-б5. Время проведения процесса 18ч.
Недостатками такого способа являются значительная продолжительность процесса (18 ч) и относительно невысокий выход целевого продукта (kO65%}.
Целью изобретения является упрощение процесса и повышение выхода целевого продукта.
Цель достигается тем, что при получении моноцианэтиловых эфиров защищенных мононуклеотидов формулы в качестве конденсирующего агента используют арилсулъфотетразолид, а в качестве органического растворителя смесь хлороформ - бутанол в соотношении 7:3.
Выход целевых продуктов 60-80%. Время проведения процесса 1-3 ч. Отличиями предлагаемого способа получения моноцианэтиловых эфиров монозамещенных нуклеотидов являются использование в качестве конденсирующего агента арилсульфотетразолида и использование в качестве органичес кого растворителя при экстракции сме си хлороформ - бутанол в соотношении 7:3, что позволяет сократить вре мя проведения п(эоцесса до 1-3 ч и
6494
Увеличить выход целевого продукта до 60-80%,
П р и м е -р. мг (0,3 ммоль) 5 -О-диметокситритил-2 -0-тетрагидро5 пиранилуридин-3-фосфата (в виде триэтиламмонийной соли) сушат многократным упариванием с абсолютным пиридином, растворяют в 1,5 мл абсолютного пиридина, добавляют 227 мг(0,Э ммоль)
10 мезитиленсульфотетразолида, через 10 мин - 0,2 мл (3 ммоль) 2-цианзт нола. Контроль за ходом реакции тонкослойная хроматография (ТСХ) на силикагеле в системе А {хлороформ:
15 : метанол: триэтиламин, 75: 1).
Через 2 ч реакцию прекращают, реакционную смесь упаривают досуха на ротационном испарителе при 30°С, растворяют в 30 мл охлажденной льдом смеси хлоррформ-н-бутанол (7:3) и энергично встряхивают с 30 мл охлажденного 1 М триэтиламмонийбикарбонатного буфера. Слой буфера отделяют, промывают хлороформом (20 мл 2). Объединенные органические слои упаривают, сушат с добавлением абсолютного пиридина, растворяют в смеси абсолютный триэтиламин - абсолютный пиридин. Контроль - ТСХ в системе А. Через 3 ч
30 реакционную смесь упаривают досуха, сушат упариванием с абсолютным этанолом и осаждают вещество из хлороформного раствора его в смесь петролейный эфир - серный эфир (1:3). Получают 15б мг (60) 5 0-диметокситритил-2-0-тетрагидропиранилуридин-3-цианэтилфосфата (триэтиламмонийной соли).
Выходы и характеристики синтезированных моноцианэтиловых эфиров защищенных нуклеотидов приведены в таблице..
I a, В-урацил
)
2 60
B -сн;о -оснз
о) (jDrtTr) ОСНз
11 а,В- N-бензоилцитозин
R,-DMTr i 6, В-Н,Н-дибензоиладенин
#
75.
0,32 0,53 0,55(отн,Ир)
A«A
0,«3 0,5 0,3(oTH.Cp.)
81
)(
0,36 0,55 0,33(oTH.pA)
1,5 77
Хроматографическая подвижность на Kieselgel 60 F 25 (Merck); системы растворителей: A - хлороформ-метанол-триэтиламин, 7-S:2k:} (no объему), Б - аиетонитрил-вода, iH (по объему). Электрофоретическая подвижность в 0,03 М триэтиламмонийбикарбонатном буфере рН 7,5; 1,3 kv; V5 мин.ДМТг-группу предварительно удаляют выдерживанием с 2|-ным раствором бензолсульфокислоты в хлороформе при в течение 7 мин.
Конденсирующий агент-мезитиленсульфотетразолид. Конденсирующий агент - бензолсульфотеТразолид.
Формула изобретения
Способ получения моноцианэтиловых эфиров защищенных мононуклеотидов 50 формулы
, о В
СКСЗоЖО. ГТ РО ORi
™ « ;.)
0«F-d-JC ff, о I .
ОН
ORj
(Jffl
где В - урацил, цитозин аденин, гуанин с защищенными реакционными центрами
путём взаимодействия р пиридине за щищенных йуклеотидов с 2-цианэтано лом В присутствии конденсирующего
агента, экстракции органическим растворителем и последующей обработки образующейся смеси эфиров смесью абсолютных триэтиламина и пиридина в соотношении lil отличающийс я тем, что, с целью упрощения процесса и увеличения выхода целевого продукта, в качестве конденсирующего агента используют арилсульфотетраto золид, а в качестве органического растворителя смесь хлороформ-бутанол в соотношении 7:3.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
5 1. R.W. Adamiak et al. The che mjcal slnthesfs of the anticodon loop of eukoryotic initiator tRNA containing the hypermodified nucleosix .de N rN-threonyicorbonyi3adenosinet A 20 Nucl. Acids. Res. 5, 1889-1905(1978) (прототип).
