Питательная среда для производства бактериальных инсектицидов на основе Советский патент 1980 года по МПК C12K1/06 

Изобретение относится к сельско хо:зяйственной микробиологии. Известна питательная среда для производства бактериальных препара тов на основе Вас.thuringiensis содержащая кукурузный экстракт, мальтозу, хлористый натрий и. воду 1, Известна также питательная сред для производства бактериальных инсектицидов на основе Вас.thuringie sis, которая содержит кормовые дро жи, кукурузную муку и воду 2. С целью расширения ассортимента сырья предлагается питательная сре включающая кормовые дрожжи как источник азота, источник углерода спирт С,,- Cg и воду при следующем их соотношении, вес,%: Кормовые дрожжи 2,0-3,0 Спирт Cg- С,0,1-2,0 ВодаОстальное Для изучения эффективности пред лагаемой питательной среды в сравнении с известной 2 используют среды следующих составов, вес,%: Предлагаемая среда: Дрожжи кормовые 3,0 Спирт (этиловый, бутиловый или амиловый)0,1-3,0 Водопроводная вода До 100 мл рН после стерилизацииG ,8-7,2 Контрольная среда без источника углерода: Дрожжи кормовые 3,0 Вода водопроводная До 100 MTI РН6,8-7,2 Контрольная дрожжеполисахаридная среда (прототип): Дрожжи кормовые 3,0 Кукурузная мука 1,0 Водопроводная вода До 100 мл рН6,8-7,2 Результаты исследования показали, что опытная среда, содержащая 3,0% дрожжей, 0,1 и 0,25% этанола, обладает такой же продуктивностью, как и известная 2 Среды, включающие до 0,5 и 1,0% этанола, повышают количество жиной биомассы до 16-19%. Дальнейшее увеличение в среде количества этанола (свыше 1 ,0%,) не дает положительных результатов. Таким образом, оптимальное количество этанола в комбинации с кормовыми дрожжами 0,5 и 1,0%. Однако среда.

;одержащая 0,1 и 0,25% этанола, мож быть использована вместо кукурузной муки или других продуктов, включающих полисахариды.

При введении в дрожжевые среды: вместо кукурузной муки бутанола -установлено, что оптимальными дозами его являются 0,5-2,0%, которые дают оптимальный эффект продуктивности до 17--19%. Бутанол в количестве 0,1-0,25% дает такой же эффект, как и кукурузная мука. Оптимальными дозами амилового спирта в :среде являются 0,25-0,5%. Дозы вцше или ниже указанных не вызывают повытения продуктивности.

; Одновременно с этим проведено исследование эффективности питательных сред, включающих 2% кормовых дрожжей и такое же количество спиртов, которые прибавляют к среде с 3 кормовых дрожжей,и при этом получены вполне сходные результаты.

Таким образом, установлено, что культура Вас.thuringiensis, выращенная в средах состава, %: кормовые дрожжи 2-3, этанол 0,5-1,0, бутанол 0,25-2,0 или амиловый спирт 0,25-0,5, в сравнении с культурой, полученной в известной среде,котора включает источник азота, кормовые дрожжи и источник углерода - кукурузную муку, содержит живых спор на 15-10% больше, а в сравнении с культурой, выращенной в среде с кормоBfciMH Дрожжами без кукурузной муки, на 46-80% больше.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что наличие в среде кормовых дрожжей и спиртов создает благоприятные условия для развития продуцентов бактериальных инсектицидов. Кроме того, они свидетельствуют о том, что полисахариды (кукурузная мука) в известной 2 среде могут быть заменены на спирты.

Установлено также, что в культур Вас.thuringiensis, выращенной в среде с кормовыми дрожжами и спиртом, накапливается на 10-20% больше кристаллов (эндотоксина.), чем в культур полученной в дрожжеполисахаридной среде, что указывает на ее высокую активность. Морфология спор и кристаллов для Вас,thuringiensis является вполне типичной. Выращенная культура легко осаждается при стоянии и центрифугировании, давая рыхлую массу Активность (вирулентность) для насекомых CL Qсоставляет не более 1%. Указанные показатели свидетельствуют о том, что биомасса, полученная в дрожжеспиртовой среде, высокого качества и может быть использовано для производства бактериальных инсектицидов и что полисахариды (кукурузная мука) в (Питательной среде могут быть заменены на спирты. Для этой цели пригодны спирты неочищенные, технические, что значительно снижает стоимость производства в сравнении с применением полисахаридов. Способ приготовления среды. Для производства бактериальных инсектицидов используют питательные среды составов (г/л), приведенных в примерах 1-4.

Пример. Состав применяемой среды, г/л:

Дрожжи кормовые3,0

Спирт этиловый1 ,0

Вода водопроводная До 1000 мл рН после стерилизации6,8-7,2 Для приготовления среды в ферментере отвешивают кормовые дрожжи в нужном количестве и прибавляют к ни 1/3 необходимого объема водопроводной воды, смесь тщательно перемешивают, нагревают до 90-100°С в течение 5 мин, после чего к ней приливают водопроводную воду до нужного объема, перемешивают и устанавливаю рН с таким расчетом, чтобы после стерилизации он был равен 6,8-7,2. Стерилизуют при 120°С в течение 45 мин или путем пропускания через установку непрерывной стерилизации (УНС). Простерилизованную среду в ферментере охлаждают до 30-34 С, попе чего, строго соблюдая стерильность, прибавляют расчетное количесво спиртов. В процессе роста в случае, необходимости концентрацию спирта поддерживают равной 0,1%. Биомассу продуцентов бактериальных инсектицидов выращивают при 28-ЗО С глубинным способом. Эта среда характеризуется такой же продуктивностью что и известная.

П р и м е р 2. Состав приготовляемой среды, г/Л:

Дрожжи кормовые3,0

Спирт этиловый2,5

Вода водопроводная До 1000 мл рН после стерили- зации6,8-7,2.

Условия приготовления среды и стрилизации те же, что в примере 1,

Эта среда характеризуется такой же продуктивностью, как и известная 12 .

Пример 3. Состав среды, г/ Дрожжи кормовые30,0

Спирт этиловый5,0

Вода водопроводная до 1000 мл рН после старилизации.6,8-7,2,

Условия приготовления среды и стрилизация те же, что в примере 1.

В сравнении с известной 2 сред в этой среде продуктивность повышается на 16%.

Пример 4. Состав среды,г/л Дрожжи кормовые3,0

Спирт этиловый10,0

Вода водопроводная До 1000 мл рН после стерилизации6,8-7,2, Условия приготовления среды и стерилизации те же, что в примере 1. В сравнении с известной 2 средой в этой среде продуктивность повышается на 19%.

При введении в питательную среду этанола больше 1% продуктивность значительно ниже, чем при использовании среды с 1%.

Среда, содержащая меньше 0,1% этанола, характеризуется значительно меньшей продуктивностью, чем известная 2 .

В технико-экономическом отношении использование в питательных средах спиртов вместо полисахаридов и других углеводов дает возможность повысить продуктивность среды на 15-18%, снизить потери биомассы при концентрировании, улучшить качество культуры (повышение кристаллического эндотоксина) , а также расширить ассортимен источников углерода.

Формула изобретения

Питательная среда для производства бактериальных инсектицидов на основе Bacillus thuringiensis, содержащая кормовые дрожжи, источник углерода и. воду., отличающаяся тем, что, с целью расширения ассортимента сырья, она содержит в качестве источника углерода спирт Cg - Cg. при. следующем соотношении компонентов, вес.%:

Кормовые дрожжи

2,0-3,0

Спирт С„ - С, 0,1-2,0 ВодаОстальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Авторское свидетельство СССР №485149, кл. С 12 К 1/06, 1974.

2.Авторское свидетельство СССР №362048, кл. С 12 К 1/06, 1970 (прототип) .