Изобретение относится к усовершенствованному способу получения фрагментов рибонуклеиновых кислот (РНК) , соединений, которые могут применяться в биохимических исследованиях и генетической инженерии.
Известен способ получения фрагментов дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК), заключающийся в инкубации дак с комплементарным к заданному участку ДНК олигодезоксирибонуклеотидом, связанным с агентом, модифицирующим ДНК, с последующим выделением фрагментов изменением рН-срет да I. Однако данный метод позволяет получать фрагменты только ДНК, поскольку РНК устойчива к такому изменению рН,
Известен также способ получения фрагментов РНК, в котором РНК гидролиэуют рибонуклеаэами, специфическими к определенным основаниям 2,
Недостатком известного способа является то, что оснований, составляющих цепь РНК, всего четыре (не считая миноров) и получение фрагментов заданной структуры способ не обеспечивает.
Целью изобретения является обеспечение строго направленного расщепления РНК.
Это достигается тем, что РНК инкубирует с олигодезоксирибонуклеотидом комплементарным к заданному участку РНК с последующим расщеплением РНК в области образсГвавшегося комQ плекса обработкой рибонуклеазой Н.
Предлагаемый способ получения фрагментов РНК заключается в инкубации РНК с олигодезоксирибонуклеотидами комплементарными к заданному участку РНК, в последующем расщеплении РНК в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой Н(РНКаза Н) .
Пример 1. 30 мкг РНК бактериофага MS2 (3659 нуклеотидных
0 звеньев) инкубируют с 1,5 мкг октадезоксирибонуклеотида дезоксицитидилил-(3 -5 ) -тимидили.л.-т(3 -5 ) цитидилил-(3 -5 ) -аденилил- (З -5 ) -тимидилил-(3 -5 )-ГУанилил-(3-5)5-тимидилил-(3 -5)-тимидина комплементарного участку РНК между 1745 и 1752 нук.пеотидными звеньями в 0,05 мл буфера (рН 7,9) в течение
30 мин. при 4 С. Затем добавляют
30 :
.
« JF А
. .. ..yi-i
3 .722921
0,3 единицы РНКазы Н и выдерживают 5 ч при той же температуре,
Реакцию останавливают добавлением додецилсульфата натрия до концентрации 0,5% и смесь прогревают в течение 4 мин при , Продукты реакции, исследованные методом электрофореза, в 3%-ном полиакриламидном геле, отличаются по подвижности от исходной РНК, но образуют одну зону из-за близости молекулярных весов получающихся фрагментов (0,6 10 и 0,58 10) ,
Пример 2, 40 мкг РНК бактериофага MS2 инкубируют с 2 мкг додекадезоксирибонуклеотида дезокситимидилил-(3 -5 ) -тикшдилил-(3 -5) -тимидилил-( )-цитидилил-(3 -5 )-цитидилил-(3 -5) - аденилил-(3 -5 ) -тимидилил- (3 -5 ) -цитидилил- (3 -5) -тимидилил- (З -5 ) -тимидилил- (3 -5 ) -тимидилил-(З-5)-тимидина комплементарного участку РНК между 1679 и 1690 нуклертидными звеньями в 0,05 мл буфера (рН 7,9) в течение 30 мин при , Затем проводят обработку О,3 единицы РНКазы Н в течение 5 ч при 4°С„ Реакцию останавливают добавлением этилендиаминтетраацетата до концентрации 0,1% и смесь прогревают 4 мин при 70°С. Продукты
реакции, исследованные методом электрофореза в 3%-ном полиакриламидном геле, образуют две дискретные зоны (0,63 X 10 мол. вес. и 0,55 х Х10 мол, вес.
Формула изобретения
Способ получения фрагментов рибонуклеиновых кислот (РНК) , отличающийся тем, что, с целью обеспечения строго направленного расщепления РНК, РНК инкубируют с олигодезоксирибонуклеотидом ког.тлементарным к заданному участку РНК с последующим расщеплением РНК в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой Н,
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1.-Кнорре Д.Г, Аффинная модификация белков, нуклеиновых кислот и их комплексов. Мол. биол, П, 1304-1310. 1977i,
2 W. Fiers. R. contreras, F. DucrincH, G.Haegeman,D.3serentQnt, J.Merregoert, W.Min Jou F.
Motemons, A.RaeymQerters A.Vanden Betwhe Q.VoeckQerl, M.Osebaert Cornpeete nuceeotide Seq,uence of -bQcteriophoge MS2 RNA, Nature , 260, p, 500,.1976 (прототип).
