Способ получения экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием,из клеток псевдодифтерийных палочек Советский патент 1980 года по МПК A61K35/74 

путем центрифугирования при температуре 0-6°С.

BoflopacTBOpHjviHe экстрактгы затем получают в сухом состоянии, например путем лиофилизации из растворов, полученных в предыдущих стадиях, которые не диализуются через мембраHVf непроницаемую ,цля веществ с молекулярным весом выше 1000.

Водорастворимые .экстракты очищают и разделяют на их составляю1ди:е физико-химическими cnoco6a viH, а именно хроматографией на адсорбентах, таких как ДЕАЕ-целлюлоза, или фильтрованием, например, через гель полиакриламида, например Р10 , Biogel Рб или Biogel Р4 , Полученный водорастворимый сырой экстракт после хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе содержит в основном тетрасахаридгептапептид, ассоциированный с неаминированными- редуцирующими саха™ р ами.

ВодорастворигФае экстракты обла-дают им / уностимулирую1цим действием. Так, у морской свинки при подкожном взедении этих экстрактов при дозах выше или равных 0,1 мг увеличивается процентное содержание анти,тел.

Водорастворимые эксть- акты вводятся в организм человека или животного для усиления его сопротивления инфекциям вирусного или бактериального происхождения. Поскольку их введесие вызывает образование антител, пригодных для борьбы с патогенными организмами, они могут быть добавлены в вакцины для обеспечения максимума реакции антител.

Водорасгворимые экстракты могут быть добавлены в лекарственные средства и антибиотики, в количестве выше 0,1% (по весу) Применяют их перорально, ректально, парентерально или в виде аэрозолей. Для взрослого чзловека дозы составляют 10-50 мг в день.

Пример. 50 г бактериальных обезжиренных клеток Corynebacte rium parvum измельчают и гомозениЗ11руют в 250 см воды, содержащей 0,1 см детергента 1ЯР-40. После перемешивания а течение 48 час . гфи температуре и центрифугирования в течение 30 мин при температуре верхний слой нагревают до . Добавляют сульфат аммония с целью получения раствора с 40%-ным насьвденнем и через 12 час центрифугируют в течение 30 мин при температуре , получают осадок О , к верхнему слою добавляют сульфат а;имония с целью получения раствора с 70%-ным насыщением. Через 12 час раствор центрифугируют в течение 30 мин и получают осадок Оу .

Осадки , 070 и последний полученный верхний слой С710 затем

диализуют раздельно по отношению к дистиллированной воде. Растворы, которые не диализуют, лиофилизируют получают 3,175 г фракции ,0,750 фракции O,Q и 1,380 г фракции , которая образует водорастворимый сырой экстракт.

Пример 2. Фракцию CJQ , полученную в примере 1, очищают путем хроматографии на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой (высота 92 см, диаметр 2,5 см), уравновешенной 0,05 М буферным раствором веронала с рН 7, элюируют 0,05 М буферным раствором цитрата натрия с рН 3 и собирают фракции по 2,3 см , с весом от 1 до 500. Фракции 150-220 объединяют, они содержат тетрасахарид;ептапептид, ассоциированный с неаминированны ди редуцирующими сахарамн. После лиофилизации пачучают 0,,125 г водорастворимого экстракта, имеющего следующие характеристики:

Внешний вид: сыпучий порошок белого цвета.

Состав:

а)Аминокислоты (молекулярное соотношение): аланин

3, глутаминовая кислота 2, диаминопмелиновая кислота (ДАП) 2, аспарагивая кислота,2, глкцин 2.

б)Aм п ocaxap

(молекулярное соотношение): N-ацетимураминовая кислота 2, N-ацетилглюкозамин2,

Молекулярное соотношение, считая на основании с 3 остатками аланина в молекуле: 4000 -ь 200.

Содержание аминокислот равно 21 + 4%, а аминосахара г 24,5 + 3%.

Остаток состоит из неаминированных восстановительных Сахаров, процентное содержание ДАП 9,5 + 1.

Предлагаемый способ позволяет получить водорастворимые экстракты с высокими иммуностимулирующими свойствами .

Формула изобретения

1.Способ получения экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием, из клеток псевдодифтерийных палочек путем их дезинтеграции с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью получения водорастворимых экстрактов с высокими иммуностимулирующими свойствами, клетки псевдодифтерийных палочек предварительно обезжиривают и дезинтегрируют путем гомогенизации в водной среде.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что гомогенизацию ведут в присутствии неионного детергента.

727U2&

3. Способ по п.1,отличаю-Источники информации д и и с я тем, что выделенный целе-принятые во внимание при экспертизе вой продукт очищают, путем хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе, уравновешен-1. Журнал микробиологии, эпиденой буфером с рН 7,0±0,1 и элюируютмиологии и имлтунологаи, 1972, № 11, целевой продукт буфером с рН 3,0+0,1.§ с. 39-43.