Способ получения полисахаридов, обладающих противоопухолевым действием Советский патент 1980 года по МПК A61K35/70 

ния плохой, а период экстрагирования превышающий 360 мин, может вызывать разложение активной составной части.

Операция экстрагирования может быть выполнена повторно при выше упомянутых условиях, или исходный материал базидиомиценты) может быть погружен в водный растворитель при Угемпературе ниже перед операцией экстрагирования, или полученный экстракт может быть промыт водным растворителем nprf температуре ниже после экстрагирования, в качестве растворителя используют чистую воду, водный кислый или щелочной раствор, водный раствор 15 очевины и водный раствор аминокислоты. Наиболее предпочтительным водным растворителем является вода или разбавленный менее чем 1 и щелочной раствор.

Полученный таким образом экстракт затем очищают посредством ультра.фильтрации,высаливания,диализа,обрат ного осмоса или другими способами, которые могут применяться по отдельности или в сочетании, чтобы удалить вещества с низким молекулярным весом (вещества с молекулярным весом менее 5000) из экстракта.

Такая очистка позволяет ПОЛУЧИТЬ азотсодержащий полисахарид с высокой противоопухолевой активностью, с высоким тормозящим действиегл против сплошного (Solid) рака Саркома-180, не только при внутрибрюшинном введении, но также и при стоматическом введении мышам.

Полученные полисахариды эффективны не только для предотвращения побочных действий при химической терапии больных, пораженных опухолью и обнаруживающих повышение чувствительности к радиотерапии, но также повышают сопротивляемость против заражения вирусами или бактериями, .когда иммунитет или фгизическое состояние больного слабые, стоматическое введение полисахаридов улучшает деятельность печени, улучшает аппетит, излечивает желудочные расстройства , улучшает мочеиспускание и является эффективным при лечении лепры. Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Грибницу Coriolus versicolor (Fr.) QueJ, полученного искусственным разведением, высушивают до содержания воды 10% и делят на пять частей. Затем каждую часть смешивают с 12,5-кратным количеством (по весу) воды и загружают в автоклав, в котором проводят экстрагирование при условиях экстракции, показанных в табл. 1. Экстракт, полученный из каждой части, затем фильтруют, чтобы отделить раствор экстракта, и полученный раствор экстракта подвергают диализу при 72-часовом токе воды при , используя диализную

трубку в соответствии с обычным методом. Эта дИалитическая обработка устраняет из экстракта вещества с низким молекулярным весом (вещества с молекулярным весом менее 5000). Диализованный раствор затем концентрируют, чтобы получить красно-коричневый порошок с содержанием воды около 7%. Этот порошкообразный материал имеет средний молекулярный вес более 10000. Результаты элементарного анализа и различные испытания на цветную реакцию, приведенные в табл. 2, доказывают, что это вещество представляет собой азотсодержащий полисахарид.

Из результатов приведенных выше испытаний видно, что полученные -продукты представляют собой полисахариды, содержащие первичный пептидносвязанный азот.

Для того, чтобы определить противоопухолевое действие азотсодержа-. щих полисахаридов, полученных в соответствии с настоящим изобретением, проводят следующие испытания.

Опухолевые клетки Саркомы-180 пересаживают в брюшные полости мышей и через семь дней (после достаточного размножения клеток) 10 кусочков клеток пересаживают затем другой группе мышей в подкожную область подмышечной впадины для развития твердых опухолей. Внутрибрюшинное введение полисахаридов начинают через 24 ч после пересадки. Вещест-во вводят один раз в день через день в количестве 10 мг/кг за одно введение в общем количестве 0,2 мл/20 г (живой вес мыши). На 25-ый день после пересадки удаляют опухоль каждой мыши и определяют ее вес. Тормозящее действие полисахаридов на рост опухолей вычисляют из среднего веса опухолей в группе мышей, которым вводили полисахариды, а среднего веса опухолей в контрольной группе.

Результаты измерений представлены в табл. 3. Подробности получения соответствующих образцов, использованных в этом опытё, т.е. количество использованного водного растворителя (воды), температура и время экстрагирования, степень экстрагирования селективность и выход также показаны в табл. 3.

Из результатов, приведенных в табл. 3 видно, что в опытах, проведенных на мышах, которым были пересажены подкожно опухолевые клетки Саркомы-180, каждый из азотсодержащих полисахаридов, полученных в соответствии с этим изобретением, показывает равную или более высокую противоопухолевую активность по сравнению с подобными препаратами, полученными при обычных условиях экстрагирования. Выход по отношению

к количеству использованного гриба заметно улучшается.

Пример 2. Грибницу.того же самого базидиомицета, который исполь зуют в примере 1, делят на восемь частей и каждую часть загружают в автоклав вместе с 12,5-кратным (по отношению к весу грибницы) количеством щелочного или по существу нейтрального водного раствора, описанного в табл. 3. Далее проводят экстрагирование в условиях давления и температуры, показанных в табл. 3. После экстрагирования материал в автоклаве нейтрализуют и фильтруют, чтобы, отфракционировать раствор экстракта путем отделения от нерастворимых как остатка от экстракции. Это раствор экстракта подвергают обработке методом диализа в соответствии с процедурой, описанной в примере 1, получая вещества со соедним молекулярным весом свЕлше 10000. Когда эти вещества проверяют на различные цветные реакции, представленные в табл. 2, подтверждается, что они представляют собой азотсодержащие полисахариды. Чтобы определить противоопухолевую активность полученных таким образом азотсодержащих полисахаридов, образцы с 1 по 8 этих веществ вводят мышам, которым подкожно пересажена Саркома-180. Результаты

показывают (см. табл.4), что эти вещества производят равное или более высокое противоопухолевое действие по сравнению с азотсодержащими полисахаридами, полученными в соответствии с обычньви методом экстрагирования горячей водой при нормальном давлении.

Предлагаемый способ позволяет получить полисахариды с высокой противоопухолевой активностью.

Таблица

1 2 3 4 5 П

0,71 0,72 0,72 0,73 0,73 Образец для сравнения представляет собой образец, полученный с использованием того же самого базидиомицета, что и для образцов с 1 по 5 в соответствии с изобретением, но путем экстрагирования при нормгильном давлении в соответствии с обычным методом. Степень экстрагирования представляет собой степень .растворенного гриба, использованного в качестве исходного материала, которая выражена в вес.%. Селективность представляет собой процентный выход азотсодержащих- полисахаридов с молекулярным весом свыше 10000, полученных из экстракта. Выход по отношению к грибу представляет собой процентный выход азотсодержсвдих полисахаридов с молекулярным весом свыше 10000 по отношению к общей загрузке гриба. При-мечание.

Таблица 2 Образец для сравнения представляет собой образец, полученный с использованием того же самого баэидисмицета, что и для образцов с 1 по 8, в соответствии с обычным методом экстрагирования горячей водой при нормальном давлении.

Таблица4

Сравнительные данные по противоопухолевой активности (%)

Формула изобретения

последующей очисткой целевого продукта от балластных примесей, отличающийся тем, что, с целью повышения противоопухолевой активности полисахаридов, экстракции подвергают грибы Coriolus biformis, Cofiolus conchifer, Coriolus consors, Coriolus hirsutus, Coriolus pargamenus, Coriolus pubecens или Coriolus versicolor, экстракцию ведут водой или разбавленным раствором щелочи

0 при автоклавировании под давлением в течение 5-360 мин при 150-200 С,

Способ ПОП.1, отличаю

Щ и и , - . . с я тем, что экстрагирование

ведут под давлением 5-20 кг/см .

5

Источники информации,

0 принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Японии 50-32304, кл, 30 А 32, опублик. 20.10.75,