Способ количественного определения иммуноглобулинов в желудочном секрете Советский патент 1980 года по МПК A61K39/00 G01N33/16 

1

Изобретение относится к медицинской иммунологии.

Известен способ количественного определения иммуноглобулинов в желудочном секрете путем проведения реакции преципитации в агаре с последующим инкубированием реакционной смеси и определением количества иммуноглобул нов по величине кольца преципитации .

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности определения иммуноглобулинов.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Эта цель достигается тем, что для проведения реакции используют нативный желудочный сок и после инкубирования агар с реакционной смесью обрабатывают 1-7%-ным раствором ледяной уксусной кислоты.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят 1,25%-ный агар Дифко на веронал-мединаловом буфере рН 8,6,

0,1 М при нагревании в водяной бане. Расплавленный агар охлаждают до и смеш гвают с заранее разведенной в 3-5 раза моноспецифической антисывороткой в соотношении 1:11. Смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой в течение 15 мин при . Затем на диапозитивное стекло размером 90X120 мм, установленное в строго горизонтальном положении, наносят смесь

to araga с антисывороткой. После застывания смеси в агаре выбирают лунки диаметром 2 мм. Расстояние между лунками 15 мм. На такой пластинке разме-г щают 40 лунок. При помощи микрошприца МШ-1О вносят в каждую лунку по . 3 мкл исследуемого секрета. В шести лунках по cepeд шe агаровой пластинки вносят по 3 мкл стандартных сыво()оток

20 с различными разведениями - от J:4 до 1:512. После внесения в лунки исследуемых секретов и стандартных сывороток шластинку помещают во влажной камере при комнатной температуре. После окон373чания реакции антиген - антитела т. е. через 24 ч для . и чорез 48 ч дляЗдгМ, пластинку обрабатывают 1-7%-ным реютвором ледяной уксус ной кислоты до проявления четких преципитационных колеа, при этом преципитационные кольца, проявившиеся до обработки пластинки уксусной кислотой, сохраняются. Затем производят учет результатов. Предлагаемый способ обеспечивает повышение точности полученных результа тов, сокращается время, отведанное постанобкё реакции на 1,5-2 ч, упрошается технология за счет процесса многократного измерения рН секретов. Формула изобретения Способ количественного определения иммуноглобулинов в жегтудочном секрете путем проведения реакции преципитации в агаре с последующим инкубированием реакционной смеси и определением количества .иммуноглобулинов по величине кольца преципитации, отлич аю- щ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения, для проведения реакции используют нативный желудочный сок и после инкубирования агар с реакционной смесью обрабатывают 1-7%-ным раствором ледяной уксусной кислоты. Источники инфqэмaции, принятые во внимание при экспертизе 1. Чернохвостова Е. В. и др. Количественное определение иммуноглобулинов методом раздельной иммунодиффузии в иле, М., 1975, с. 27-32 (прототип).