Способ получения циклогексиламмониевой соли трифосфоинозитида Советский патент 1980 года по МПК C07F9/117 A61K49/00 

1

Изобретение относится к новоглу химическому методу получения трифосфоинозитида формулы ли

-| -OdH«

О- НСООЙбпНэв Нгсооббгтнз

iS

принадлежащего к классу природных биологически активных соединений, ответственных за происхождение целого ряда важнейших биологических процессов в клеточных мембранах.

Известен способ получения трифосфоинозитида выделением из головного мозга млекопитающих путем экстракционных и хроматографических методов

1.

Недостатком известного метода получения трифосфоинозитида является длительность процесса (многократные экстракции, отделение от балластных примесей и хроматография) и получение целевого продукта в виде смеси трифосфоинозитидов с различными жирными кислотами.

Целью изобретения является упрощение процесса и улучшение качества

2

целевого продукта (получение индивидуального целевого продукта).

Цель достигается разработкой нового химического метода получения трифосфоинозитида формулы I, заключаюmerouij в том, что 1 (3) ,2-0-циклогексилиден 3(1), 6(4)-ди-0-бензилsn-миоинозит общей формулы Ц

10

15

ОВг1

обрабатывают восьмикратным избытком дианилидохлорфосфата в пиридине с последующим нагреванием с 80%-ной уксусной кислотой при 90-100 С,

20

двойной избыток полученного 1(3), 4(6)ди-0-бензил-5,6(4)-ди-О-дианилидофосфорил-sn-миоинозита вводят во взаимодействие с 1,2-ди-О-стеаро25 ил-3-О-фосфорилглнцерином в присутствии тройного избытка 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине с последующим удалением зашщтных групп действием тридцатикратного избытка изоамклнитрита в смеси пиридинуксусная кислота (1:) и гидрогено™ лизом в присутствии палладиевой черни. Выход целевого продукта 6,9%.

Пример. К охлажденному до раствору 4,1 г 1 (3) , 2 0 циклорексилиден-3(1),6(4)-ди-О-бензил-зпьдаоинозита (П) в 25 мл пиридина прикапывшот при перемешивании раствор 35 г дианилидохлорфосфата в 130 мя пиридина. Перемешивание продолжают при 18-20 С в течение 2 сут, затем добавляют 240 мл 5%-ного раствора уксуанокислого калия и через 30 мин экстрагируют полученное вещество хлороформом, промывают 20%-ным раствором кидлого сернокислого натрия и водой, сзушат, удаляют растворитель и остаJOK разделяют .хроматографией на силикагеле. Выход 1(3),2-0-циклогексили,ден-3 (1) ,6 (4)-ди 0-бензил 4(6) ,5-ди-, О-дианилидофосфорил-Sn лконозитс. (Щ

6,87 г (82,0%), т.пл,12б-127с (из спирта) ,73 {силикагель, бензолацетон, 7:3). ИК-спектр () : 3100 (Н 3100, 3020, 1610, 1505 (бензольные кольца), 1400 (P-N), 1220 ( ), 1110, 1085, 1060, 1035, 1010 (С-О-С), (Р-О-С), 870 (P-N).

Найдено,% : С 64,66; Н 6,24; N 6,51; Р 6,34.

CsoHp OgN PgВычислено,%: С 66,65; Н 6,04, N 6,22, Р 6,88,

Затем растворяют 1,8 г соединения (III) в 54 мл 80% уксусной кислоты и перемешивают в течение 2 ч при 90100с, уксусную кислоту удаляют в вакууме, остаток разделяют хроматографией на силикагеле. Выход 1(3), 4(6)-ди-0-бензил 6(4),З-ди-О-дианилидофосфорил-зп-миоинозита (IV) 0,83 г (50,3%), т.пл.182-183с (из спирта), ,28 (силикагель, бензол - ацетон 7:3), RJ 0,55 (силикагель, хлороформ ацетон - метанол, 17:2;3 (ИК-спектр 3300 (ОН), 3200, 1710, 1670, 1550(Ш), 3100, 3060, 3040, 1610, 1505 (бензольные кольца) 1420 (P-N), 1220 () , 1070-1080, 1010 (С-О-С, .С-ОН, ),890,860(P-N).

Найдено,%: С 61,78, Н 5,88, N 6,55, Р 7,32.

С44Н4ьОЛР2-2Н20 .

Вычислейо,%; С 51,87, И 5,88 N 6,55, Р 7,24.

Вслед за тем, растворяют в 25 сухого пиридина, свежеперегнанного над натрием, 0,82 г соединения (IV), высушенного в BaKyyjvje, добавляют 0,457 г 2, 4,.Ь-триизолропилбензолсульфохлорида и перемешивают 40 мин при 18-20С. Добавляют 0,322 г 1,2-ди-Остеароил-З-О-фосфорилглицерина (V) и реакцию оставляют на 2 сут при 18-20 После этого приливают 40 глл сухого хлороформа и перемейжвают 1 ч. Удаляю растворитель в вакууме, остаток разделяют хроматографией на силикагеле. Выход 1(3)-0-(1,2-ди-0-стеароилглнцеР0 3-0-фосфорил) -3(1) ,6 (4) -ди 0- бензил-4 (6) ,5-;ци 0-диа.нилидофосфорилsn-миоиноэита (VI) 0,38 г 52,0%, считая на вступивший в реакцию исходшлй спирт),R 0,38 (силикагель, хлороформ - ацетон - метанол, 17:2:3), RxO,66 (силикагель, хлороформ - метHoh - вода, 65:25:4). ИК-спектр ( 3300-3200 (NH), 1750-1730 ( в COOP) , 16lOf 1510 (бензольны кольца 1345(-С-Ы), 1275 () , 890, 860 (P-N

.Найдено, %: С 65,43; Н 8,57;N 3,61 Р 5,83.

. въЩгл

Вычислено,%: С 66,11; Н 8,88 N 3,71; Р 6,16,

Далее растворяют 0,28 г соединения ( ) в 7 мл смеси пиридин-уксусная кислота (1:1) и добавляют 2,8 мл изоамилкитрита. Перемешивают 24 ч при 18-20С, отгоняют растворитель и изоамилнитрнт в вакууме, добавляя пириду.1н. Обрабатывают остаток ацетоном и полученный осадок без дополнительной очистки гидрируют в 20 мл смеси метилового спирта и хлороформа (4:1) при 18-20с. Катализатор отфильтровывают. Переводят вещество в циклогексиламмониевую соль, обрабатывают раствор смолой Dovjex (, . 200-400 меш в Н-форме) и доводят рИ до 8,5 циклогексиламином. Выход циклогексиламмониезой соли трифосфоинозитида (1) 0,07 г (32,0%) т.пл. 165-168°С (из ацетона), К 0,51 силикагель, н-пропанол-4н-аммиак), ,28 (обработанная формальдегидом бумага, верхняя фаза смеси н.-бутанол:ледяная уксусная кислота;вода - .). ИК-спектр (см-) : 2860 (МН) (1730 (С 0 в COOP), 1195% (Р.-0) , 1070-1050 (С-О-С, ,С-О-Р).

Найдено,%: С 53,72; Н 10,54; N 3,87; Р 6,66.

C6Q«141 Вычислено,%: С 54,09; Н 10,06

Н3,90; Р 6,0-6.

Формула изобретения 1. Способ получения циклогексиламмониевой соли трифосфоинозитида общей формулы I

ОН О O-P-Oi H

о- НЙООЙбпНэь:

OjFO НгбООЙйпНзз

отличающийся тем, что с целью упрощения процесса и улучшения качества целевого продукта 1(3), -циклогексилидек-3(1),6(4)-ди-0 бензил-5м-миоинозит общей формулы Е

обрабатывают восьмикратным избытком дианилидохлорфосфата в пиридине с последующим нагреванием с 80%-ной уксусной кислотой при 90-100®С, двойной избыток полученного. 1(3), 4(б)-ди-0-бензил-Ь,6(4)-ди-О-дианилидофосфорил-Sn -миоинозита вводят во взаимодействие с 1,2-ди-О-стеароил-3-О-фосфорилглицерином в присутствии тройного избытка 2,4,6триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине с последующим удалением

защитных групп действием тридцатикратного избытка изог1милнитрит а в смеси пиридин - уксуснаякислота (1:1) и гидрогенолизом в присутствии палладиевой черни.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Дворкин В.Я.,Киселев Г,В. Фракционирование и характеристика фосфоинозитидов головного мозга.Биохимия, 34.1245, 1969 (прототип).