Изобретение относится к чимии прироцнык соединений, а именно к химическому способу получения 1,2-аи-О-пальHjidijo е о dHt Нз,с1,90йо -- d-н L
принадлежащего к классу прироаных биологически активных соединений - фосфогликолипидов - веществ, выполняющих роль липицного якор для присоединения к гидрофобной бактериальной мембране гидрофильной липотейхоевой кислоты, обладающей иммунологическими свойствами р.1.
Изучение метаболизма фосфогликолипиаов и его вклада в функционирование
мембранного аппарата клетки на модельISных искусственных мембранах не может быть удовлетворено малодоступными природными образцами, представляющими собс сложные смеси соединений с различ- JJJ ным набором гидрофобных компонентов. Потребность в молекулярных образцах фосфоглйксшипидов выдвигают на первый план проблему направленного химического синтеза этого нового класса соединемитоил-З-О- ( 1,2-ди-О-пальмито- ил-$П-глицеро-3-О-фосфорил) - ot-T)-глюкопиранозил -$УТ-глицерина общей формулы I но it- -ociodjsHsi 3izdodocii5H3i
НИИ. Новые данные о строении биологических, мембран патогенных бактерий явятся дополнительным вкладом в борьбу с инфекционными заболеваниями.
Известен способ получения фосфогликолипиаа выделением из бактерий
Pseudowonas d-im-ivivita- 2.
Способ характеризуется ьольшими экспериментальными трудностями-, длительностью процесса и ничтожным выходом целевого продукта (0,9%). Кроме того, полученный при выделении из природных источников фосфогликолипид представляет собой не индивидуальное химическое соединение, а гомологическую смесь по жир- нокислотной структуре отдельных фосфогликолипидов. Отсутствие же индивидуальных соединений при проведении биохимических исследований затрудняет их интерпретацию.
Шль изобретения - разработка нового способа химического синтеза индивидуального фосфогликолипида 1,2-ди-О-пальмитоил-3-О- б-О-( 1,2-аи-О -пальмитоил- -глицеро-3-О-фосфорил) D-глюкопиранознл)-5У1-глицерина, обеспечивающего значительное увеличение выхода целевого продукта.
Посгавленная цель достигается способом, который заключается в том, что 3,4,6-три-О-ацетил-R- 1)-глюкопираноаилхлориц (Г1) вводят во взаимодействие с 1,2-ди-О-бензил-511 глицерином (Ш) в сухом диоксане в присутствии сукцината 2-х валентной ртути в качестве катализатора и стехиометрических количеств иодица натрия. Добавление иодида натрия в реакционную массу способствует ускорению реакции и повышению выхода 1,2-ди-О-6ензил-3-О-( 3, 4,6-три-О-ацетил- D -глюкопиранозил)BztOClHz
-5И-1 лицерина (1У) за счет образования более реакционноспособного промежуточного глюкозилиодида. Полученное с 67% выходом соединение ( 1У) по данным газожидкостной хроматографии на 93% состоит из нужного нам о -аном6тра.
Далее соединение (1У) действием 3-х кратного избытка уксусного ангидрида в среде сухого пиридина переводят в перацотилированный глюкозид 1,2-ди-О- -бензил-3-0-( 2,.3,4,б-тотра-О-ацетил-.D-глюкопиранозил)-5п-глицерин (У) с последующим снятием бензильнык защит гидрированием на палладиевой черни в этилацетате. Полученный 3-0-(2,3, 4,6-тетра-О-ацетил- Т)-глюкопиранозил)-6УУ-глицерин (У1) ацилируют: 3-х кратным избытком хлорангидрида пальмитиновой кислоты в среде кипящего толуола в, присутствии сухого пиридина и образующийся при этом 1,2-ди-О-пальми тоил-3-О-( 2,3,4,6-тетра-О-ацетил- D-глюкопираноаил)-51т-1 лицерин (УИ) разделяют на аномеры колоночной хро атографией на силикагеле U 1ОО/160.сЬ-Аноме соединения (УН) кипячением с-гидразин-гидратом в метаноле переводят в 1,2-ди-О-пальмитоил-3-О-( оС- D-глюкопиранозил)-5)1-глицерин (У111).
Фосфорилирование соединения (УП1), учитывая повышенную реакционную способность первичной гидроксильной группы по сравнению со вторичной, проводят путем взаимодействия последнего с 1,2-ди-0-папьмитоил-5)1-Глицеро-3-0-4)осфорной кислотой в присутствии 2,4-6-триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине при соотношении компонентов 2:1:3. Целевой продукт выделяют известными приемами. Процесс проводят по следующей схеме.
HodHz -o
ОЙHo -f
но H-c -orioeisH3i
Hjcioeoeigiiaj
УТТГ ai-isOdo Hz 31Ч50С10 -d-H о Нгс1о Р 1ос1 но j- Пример 1. Смесь 0,83 г 3,4,6-три-О-ацетил-|Ь - D-глюкопиранозилхлориаа (11) и 0,38 г прокаленного иодида натрия в 6 мл сухого диоксана перемешивают в течение ЗО мин при 19-20°С, добавляют 1,35 г 1,2-ди-О-бензил-5и-глицерина (П) и 0,415 г сукцината 2-к валентной ртути и перемешивают еще 20 ч. Реакционную массу фильтруют, упаривают. Остаток растворяют в 1ОО мл эфира, промывают раствором No Зк10 мл), водой, сушат, упаривают в вакууме. Полученное масло растворяют в 3,6 мл сухого пиридина и добавляют 3 мл уксусного ангидрида. Оставляют на 16 ч при 19-20 С. Вносят 5 мл воды, выдерживают 1 ч и упаривают в вакууме. Остаток растворяю в 50 мл хлороформа, промывают холодной водой (3x10 мл), насыщенным раствором Т4 О .( 3x5 мл), водой, сушат. Ве щество выделяют колоночной хроматографией на силикагеле Ь 4О/100, элюиоуя хлороформом. Выход 0,86 г (67%),, ,бО(с 1,1, СНСе1),Тг. 0,5. Найдено,%: С 61,63; Н 6,30. C-VI Вычислено,: С 61.78; Н 6,31. Затем 0,27 г 1,2-ди-О-бензил-З-О-( 2,3,4,6-тетра-О-ацетил-D-глюкопира. нозил)-8и-глицерина (У) гидрируют на палладиевой черни в 8 мл сухого этилацетата при 20 С 3 ч. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Выкод 3-0-( 2,3,4,6.-Jгeтpa-0-aцeтшl-ТЗ-глюкопиранозил) - Зп-глицерина (У1) 0,2 г (96%), Ыа +100,4 (с 1,0, снсе,,,4. Найдено,%: С 47,20; Н 6,08. sb ia5i3jcli50ciodHzHjidisodo
KZ e 0 - P-( OH) 2 IX Кон HoY н-с1-odoeigJiai HzdociodigHii Вычислено,%: С 47,39; Н 6,16. Вслед за тем к раствору 0,2 г полу- чанного соединения (У1) в 15 мл сухого толуола и 1,5 мл сухого пиридина при 0°С и энергичном перемешивании прибавляют по каплям 0,7 г хлорангидрида пальмитиновой кислоты. Через 3 ч реакционную массу доводят до кипения и кипятят 4 ч, затем фильтруют, осадок промывают толуолом, фильтрат упаривают. Вещество выделяют колоночной хроматографией на силикагеле i, 10О/160 элюируя смесью пегролейный эфир-эфир, 75:25. oL -Аномер 1,2-ди-О-пальмитоил-З-О(2,3,4,6-тетра-О-ацетил- ТЭ-глюкопираноаил)-Sn -глицерина (УП): выход О,34 г(80%), т. пл7 29-30°С, ,l(c 1,1, СНСС), ,6. Найдено,%: С 65,37; Н 9,58. - 49 5б 14Вычислен о, %: С 6 5,5 О; Н 9,65. j Аномер соединения (УП): выход 0,026 г (6%), т. пл. 79-80 сДо1Д -6,9(с О,5, CHCCj),,57. 0,5 г (i-аномера соединения (УП) кипятят в 26 мл метанола, содержащего 0,22 мл гидразин-гидрата, 1,5 ч. Реакционную массу охлаждают, нейтра- лизуют муравьиной кислотой, выдерживают при 24 ч. Осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из метанола. Выход 1,2н1И-О-пальмитоил-3-0- ( oL Э- люкопиранозил)-8и-глицерина () 0,2 г (52%), т. пл. 8182 Col:I +37(c 0,5, СНСС.), ,8. Найдено,%: С 66,83; Н 10,21. Вычислено,%: С 67,08; Н 1О,75. .Затем 70 мг соединения (УШ) и 43,5 мг ТПС растворяют в 3 мл сухого свежеперегнанного над натрием пиридина и перемешивают при 19-20 0 ЗСХ 40 мин. После чего добавляют 31 Мг 1,2-ди-0-пальмигоил-511-глицеро-3-О-фосфорной кислоты (ГХ) и продолжают перемешивание 2-3 дня. Приливают 3 м воды и через 30 мин растворитель отго няют, осадок хроматографируют на колон ке с силикагелем Ь 10О-160, элюируя вещество смесью хлороформ-метанол, 97:3. Выход целевого продукта (1) 45 мг (ЗО%), считая на соединение (У т. пл. 53-53,5°С, о((с 1,0, СНСЕ),Тг 0,39. Найдено,%: С 66,72; Н 1О,29; Р 2,13. 16% Р H3jei50CioeH2 Hjjciisodo е-н отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, 1,2-ди-0-бензил-5И-глицерин гликозилируют 3,4,6-три-О-ацетш1-) -D -глюкопираноэилхлоридом общей формулыЛСОСН, С ОН в сухом диоксане в присутствии сукцина Т9 2-х валентной ртути и стехиометрического количества иодида натрия, полученное соединение обрабатывают 3-х кратным избытком уксусного ангидрида -в среде сухого пиридина, после чего образующийся 1,2-ди-0-бензил-3-0-( 2,3, 4,6-тетра-О-ацетил- Т) -глюкопиранозил) 9к -глицерин гидрируют на палладиевой черни в этилацетате, выделенный продукт ацилируют 3-х кратным избытком хлорангидрида пальмитиновой кислоты в толуоле в присутствии сухого пиридина Вычислено,%: С 67,07; Н 10,66; Р 2,28. Суммарный выход целевого продукта на исходное по схеме соединение (И) составляет 8%. Таким образом, впервые осуществлен химический синтез 1,2-ди-О-пальмитоил-3-0-Гб-0-( 1,2-ди-0-пальмитоил-Зи -глицеро-3-0-фосфорил)-с{.- D -глюкопиранозил -Sh-г-лицерина (1), в результате которого выход целевого продукта повышен в 8,9 раза. Формула изобретения Способ получения 1,2-ди-О-пальмитоил-3-0- б-О-( 1,2-ди-О-пальмитоил-5л-глицеро-З-О-фосфорил)-о(.-Э-глюкопиранозилЗ-Зи-глицерина общей формулы оенг H-e-odod-tsHji HzCJociOCJisHji при кипении, аномерную смесь 1,2-аи0-пальмитоил-3-0-{ 2,3,4,6-тетра-О-ацетил- Т)-глюкопиранозил)5и г 1ицеринов разделяют на аномеры колоночной хроматографиёй на силикагеле L 10О/160 и с -аномер кипячением с гидразин-гидратом в метаноле переводят в 1.2-ди- -0-пальмитош1-3-О(с(,-1)-глюкопиранозил) -5 -глицерин, который подвергают взаимодействию с 1,2-аи-О-пальмитоил-БИ- лицеро-З-О-фосфорной кислотой в присутствии 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине при соотношении компонентов 2:1:3. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе i SViaw Н. BacieridE g-e cotipids qna ,ophosp1io«,-ipid.. AAjo-otiioe., -1915,V./12,;). 141.. a.i l iwBon S.G-aind Bete M-E-Tlne pbosp og tucotipid from Pseudomonae divninuia.- . et biopti S.. 1)1l,N.248,pp.293-299 СпрототмрУ
