Способ контроля биосинтеза пенициллина при глубинном способе производства Советский патент 1949 года по МПК G01N33/15 

Прсдлагаелгый способ характеризуется тем, что контроль oiiociinreза пенициллина пронзводится опреде,:еи1 ем нанболее стаднС ферментации: стадии наиболее активного вегетативного роста, стадии начала деградации клетки и стадии макснл алыюго 1 акоплеи11я аигиб1ютика.

Установлено, что в ироцессе глубинной фермеитаци ; грибок проходит семь стадий развития, из которых три первые объединяют период вегетативного роста грибка, а четыре последующих относятся к периоду деградаци) мицелия, сопровождаюиАСмуся накоплением пенициллина.

Для более точного определения стадш развития микроорга;11 змо;. продуцирующих иенициллии, тюмимо исследования нативиых иреиаратов, нриме;1яются следующие гистохимические и щггофизио.югические методы.

. Нативный прснарат мицелия окраи1ивается в течеи; е 10-30 сек иасышеииым сииртовым раствором масляио-желтого красителя, иосле чего на тот же препарат наливается иа 30-60 сек бактериологический раствор метиленовой синьки (1 сл/.« иасьпцениого спиртового раствора иа 50 см- дистиллированной воды).

Препарат накрывается цокровным стеклом н просматривается в воде. При -iTOM жировые и липоидные включения окрашиваются в желтый и зеленовато-желтый цвет, а остальцой мицелий в голубые и синие тона. Это облегчает наблюдения за накопленнем н исчезновеиием в мицелии заиасиых .веществ - жиров и лииоидов. При окраске м; целия можно употреблять и другие жиро-красящие вещества, например Судан П.

2.Пативиый иренарат обрабатывается раствором 1 ейтра.тьной краски в дистиллированной воде концентрации 1/5000-1/10000. Через 3-5 мин. иосле обработки преиарат накрывается покровным стеклом ц быстро просматривается. Тип окраски, накопляющейся в клетке, зависит от стадии развития грибка.

3.Приготовляются восстановлеииые гнносульфитом лейкобезы из растворов мегилоновой и толуидииовой синьки, азура 1, тионниа, брил№ 76131- 2 -

лиант крезнловой синьки и других красителей концентрации 1/5000 в дистиллированной воде, подкисленных соляной кислотой до рН 3,0-4,0. После добавления гипосульфита растворы выдерживаются 24-48 час в темноте и по обесцвечивании применяются для окраски нативных препаратов. Нативные препараты после обработки их лейкобазой (пеобходимо хс-рошс перемешать лейкобазу с мицелием) накрываются покровным стеклом и быстро просматриваются. При такой обработке окрашиваются диффузно места, обладающие максимальной энергией роста или окисления . Это особенно на ранних стадиях развития грибка и в момент начала деградации клеток.

Посредством такого метода наблюдения можно в течение первых 24-48 час от начала ферментации сделать заключение:

1) о пригодности для ферментации даппого штамма-продуцента (малоактивные штаммы имеют энергию окисления и липоидов почти не накопляют);

Sf о пригодности питательной среды;

3)i о степени удовлетворительности принятого технологического режима фермёнтации, т. е. аэрации, температуры и перемешивания.

«.

Предметизобретения

1л Спосрб. контроля биосинтеза пенициллина при глубинном способе производства, отличающийся тем, что контроль производят путем определения моментов прохождения стадий ферментации (стадии наиболее активного роста плесени, стадии деградации клеток плесени, стадии наибольщего накопления антибиотики) микроскопическим исследованием нативных препаратов.

2.Прием выполнения способа ло п. 1, от л и ч а ю щ и и ся тем, что, с целью более точного установления стадий развития продуцирующих пе1;ициллнн препаратов и наблюдения за накоплением и изменением содержания в мицелии жиров и липоидов, нативные препараты окрашивают красителем.

3.Прием выполнения способа по пп. 1-2, отличающийся тем, что в качестве красителя применяют метиленовую синюю в комбинации с окран ивающей жир краской, например Суданом III или масляно-желтой.

4.Прием выполнения способа по пп. 1-2, отличающийся тем, что для прижизненной окраски нативного препарата применяют нейтральный коасный краситель.

5.Прием выполнения способа но пн. 1-2, отличающийся тем, что окоашивапие нативного препарата производят лейкосоединениями метиленовой и толуидиновой синьки, азура 1,тионина и т. п.