при комнатной Tc.vincpr,T)pe с псслсдующим B3aii.:o;efiCTi3 ioM полу генного имидйзольного производного с адгнозинтр1 :)осфатом п выделением целевого продукта колоночной хроматографией с использованием в качестве адсорбента силикагеля, очищенного от органических веществ, а в качестве элюеита - системы н-бутаиол : водь : уксусная кислота в соотиошепии 5:3:2 соответственно. В качестве апротонпого растворителя обычно используют диметилформамид.
Пример. Получение 21(3)-0-(1-оксил-2,2, 5,5 - тетраметилпирролидин - 3-карбоиил)аденозиитрифосфата (I).
К смеси 745 мг 1-оксил-2,2,5,5-тетраметил-3-карбоксиперролидина ммоль) и 649 мгЫ,К-карбонилдимидазола
(4 ммоль) приливают 1,5 мл безводиого диметилформамида (бурно выделяетея двуокись углерода). Через 30 мин к этому раствору имидазолида при комнатной температуре добавляют раствор 623 мг АТФ (1 ммоль) ди-Ыа-соль, 4П2О) в 1,5 мл воды. Через 45 мии темножелтую эмульсию (сначала два слоя, через несколько мин образуется однородный вязкий раствор) разделяют на 4 порции в центрифужные пробирки и приливают по 5 мл ацетона в каждую пробирку. Выпавшие осадки центрифугируют 5 мин при 5000 оборотов в мииуту, желтый раствор декантируют, а светложелтый осадок растворяют в 2 мл воды. Выделение целевого продукта проводят колоночной хроматографией на силнкагеле 0,05-0,2 мк фирмы «Merk, обработанном 2н. соляной кислотой (2 ч при кипении с последзющей промывкой водой, системой и-бутаиол : вода : уксусная кислота 7:2:1 и сушкой). Элюирование спин-меченого АТФ (I) проводят системой н-бутаиол : вода : уксусная йислота 5 : 3 : 2. Контроль фракций осуществляют спектрофотометричееки и методом ЭПР.
Фракции элюируют диэтиловым эфиром после добавления воды, водную фазу упаривают в вакууме и остаток лиофклизуют. Получено 250 мл спин-меченого аденозинтрифосфата (I) (43%): Rr 0,35 (Rf АТФ 0,20) целлюлоза, импрегнированная полиэтиленимином 0,4 М КН2РО4 рН 3,5, Хмлх 257 ПМ (е--14900), ак 16,1 гс вода, отноп:с П1с адеиин : фосфат -0,35 : 1,0 (теор. 0,:35 : 1,0).
Предлагаемый способ позволяет полуить целевой продукт (I) в одну стадию
без нагреваиия в препаративном масштабе в 3-5 раз быстрее, чем по известному способу получают аналоговые соединения. Получаемый нродукт етабилен и может храниться при -4°С в течение нескольких месяцев.
Формула изобретения
Способ получения спин-меченого производного аденозинтрифосфата
NH2
О О О
OPOPOPOCHj -О О О
О
И
но О-С
отличающийся тем, что 1-оксил-2,2,5,5тетраметил-3-карбоксипирролидин в апротонном растворителе подвергают взаимодействию с М,М-карбоиилдиимидазолом при комнатной температуре с последующим взаимодействием полученного имидазольиого производного с аденозинтрифосфатом
и выделением целевого продукта колоночной хроматографией с использованием в качестве адсорбента силикагеля, очищенного от органических веществ, а в качестве элюента - системы н-бутанол : вода : уксусная кислота в соотношении 5:3:2 соответственно.
2. Снособ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве апротонного растворителя используют диметилформамид.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Петров А. И., Сухоруков Б. И. Спин50 меченые нуклеозид-моио-, ди- и трнфосфат. - «Биофизика, N° 20, 1975, с. 965- 966.
