Способ определения дозы облучения костного мозга живых организмов Советский патент 1980 года по МПК A61B10/00 

Изобретение.относится к медицине кой радиологии и может быть использовано в диагностических целях при обследовании пациентов, подвергшихся ра- 5 диационному облучению.

Известен .способ определения дозы облучения костного мозга живых организмов путем цитологического исследования клеточных повреждений в мазке Q костного мозга jl .

Однакоизвестный способ не позволяет определять дозы и диагностировать лучевые поражения в ранние сроки после облучения,

Целью изобретения является определение дозы на ранней стадии облучения.

Эта цель достигается тем, что в мазок вводят антитела к однотяжевой ДНК и по процентному содержанию кле- jg ток,связанных с антителами, определяют дозу облучения..

Пример . Белых крыс весом 140-160 г облучают на аппарате РУМ-3, 197,KB, 10 ма, фильтр 0,5 мм С+1 мм 25 А 1, Рик 40 см, мощность дозы 31,6 р/мин.

Мазки костного мозга крыс, облученных в дозах 100, 400, 600, 800 и через 0; 0,5; 1,0; 3,0:ч после Q

облучения, с целью прекращения жизнедеятельности клеток, помещают в охлажденный ацетон () на 5 мин.

Затем на высуиХённые мазки наносят гамма-глобулиновую фракцию, содержащую антитела к однотяжевой ДНК, выделенную из сыворотки кроликов, иммунизированных комплексом однотяжевая ДНК-метилированный бычий сывороточный сшьбумин.

После этого, во избежание высыхания гамма-глобулина на препарате, мазки костного мозга - иммунный гамма- глобулин помещают во влажную камеру на 30 мин. Температура в камере поддерживается +37°СУ при которой за время инкубации (30 мин) происходит связывание антител с клетками, имс ющими однотяжевые участки ДНК,

Затем для удаления несвязавшихся антител мазки промывают фосфатным буфером 0,01 М, рН 7,5 на физиологическом растворе с последующим просушиванием на .воздухе.

На. мазки наносят смесь /ослиной сыворотки против глобулинов кролика, окрашенную ФИТЦ, с бычьим альбумином , меченным радаминсульфофторидом, в .разведении обоих компонентов 1:4,

помещают мазки во влажную амеру на 30 мин при +31°С для обеспеения взаимодействия ослиной сывороти с глобулинами кролика. После чего ля удаления несвязавшейся меченной сыворотки мазки промывают фосфатным буфером 0,01 М, рН 7,5 с последующей сушкой на воздухе.

В подготовленных указанным образом мазках клетки, содержащие однотяжевые НК, с которыми прореагировали антитеа к однотяжевой ДНК, приобретают способность флюоресцировать при их наблюдении под люминисцентным микроскопом,

Мазки наблюдают под микроскопом МЛ-2. Фильтры ФС-1-1, ОЗС14-4, БС-8-2.

При этом наблюдают по 12 мазков с одинаковой дозой облучения и на каждые ЮЪ клеток мазка считают -про;цент .флюоресцирующих клеток.

Для выяснения иммунологической специфичности используют контроли: мазки необлученных крыс, обработанные антителами к однотяжевой ДНК (AT к ОДНК); мазки облученных крыс, обработанных гамма-глобулином, выделенным из сыворотки неиммунизированных кроликов (Донорский) мазки облученных крыс, обработанные истощенной иммунной сывороткой (без AT к ОДНК).

При наблюдении под микроскопом в мазках облученных крыс, обработанных ,АТ к ОДНК, интерфазные ядра флюоресцируют, в то время как в других контролях наблюдают- неспецифичную флюореценцию цитоплазмы, а в первом контроле - незначительную флюоресценцию ядер. Это свидетельствует о том, что AT к ОДНК специфично связывается преимущественно с клетками, имеющими поврежденные ДНК.

Данные наблюдений сведены в табл. Как видно из таблицы, число флюоресцирующих клеток в мазке облученных крыс пропорционально дозе облучения.

Путем статистической обработки получены уравнения регрессии

У А + Вх,

где У - процент флюоресцирующих клеток;

X - доза облучения, р А и В - постоянные коэффициенты.

В табл. 2 приведены .полученные уравнения регрессии, соответствующие различному времени после облучения.

Таким образом, исследуя мазок костного мозга живого организма,подвергнутого радиационному облучению, можно, определив процентное содержание клеток с поврежденной ДНК, связашихся с антителами, судить о дозе облучения, а следовательно, и о степени радиационного поражения.

Предлагаемый способ позволяет определить степень поражения в ранние сроки после облучения - от нескольких минут до трех часов.

Таблица

О 20iO,6 ,6 100 31tl,7 ,8 ,9 400 45tl,l ,4 2311,6 600 ,83 16t2,,7 800 68tl,l 1011,2 1210,7 1000 73tO,9 I7il,8 1941,6 32tO,9 7,,615il,8 2210,8 9il,4 8,5iO,7 ,212ti,0316 0,9 4541,06 ,715±1,6. 3641,8 1310,9 18il,6 ,712iO,,8 5911,2 1041,18JO,6 35 1, 7 11 t 0,7 I2il, 4 33tl,312tO,,6. 6811,,5940,7 53±1,6 10iO,4 12±0,5 ,,51340,5 72+0,9 1310,,2 64±1,5 8ri,03 1040,6 47t2,,88±0,6

Формула изобретения

Способ определения дозы облучения костного мозга живых организмов путем цитологического исследования клеточных повреждений в мазке костного мозга, отличающийся тем, что, с целью определения дозы на ранней стадии облучения, в мазок вводят антитела к однотяжевой ДНК и по

процентному содержанию клеток, связанных с антителами определяют дозу оОлучения.

Источники информации, принятые ас внимание При экспертизе 5 I, Основы цитогенетики человека. Под ред. А. А. Прокофьевой -Бельговской. М. ,едицина7 1969, с. 186192 (прототип).