Штамм -68-продуцент леваназы Советский патент 1980 года по МПК C12K1/02 C12D13/10 

Известны различные штаммы микроорганизмов, у которых обнаружена фруктозаназная активность. Ферменты проявляли спегщфичность по отношению к инулину и левану. Продуктами гидролиза этих полисахаридов были фруктоза, леванбиоза, левантриоза, леваатетраоза, а также олигосахара более высокого молекулярного веса. Известен штамм Streptomuces griseus - продуцент леваназы, который после выращивания микроорганизмов в течение трех дней на качалке в реде содержащей щелочной гидролизат соевой муки - 1%, дрожжевой экстракт 0,1%, KHnPO j - 0,1%, леван в концент рации 1% и культивировании при температуре продуцирует леваназу, которая разлагает леван на фруктору, леванбиозу и ряд олигосахаридов. Выход фермента не указан. Целью изобретения является вьвделе ние штамма гриба - продуцента левана зы, отвечающего производственным тре бованиям получения ферментных препаратов: высокой леванозной активность высокой интенсивностью размножения, возможностью культивирования на прос тых питательных средах при использо-, вании обычного микробиологического оборудования. Штамм гриба Fusarium so anI-68 выделен в Красноярском крае в 1973 г. из пораженных гнилью тканей всходов пшеницы. Штамм зарегистрирован в кол лекции Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений, коллекционный номер 135, Морфологические и культуральные признаки штамма. На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-20 колонии гриба достигают в диаметре 3-4 см. Воздушный мицелий беловатый (по шкале А.С. Бондарцева, 1954, -д-1), войлочный. Обратная сторона колоний со слабой синевато-зеленоватой (6-2) пигментацией. Спороношение обильное, первоначально преимущественно в мицелии : микро- и макроконидии. Макроконидии с тремя перегородками 22,4-33,6 X 5,6-7,0 мкм. Микроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные, конечные или промежуточные. На 15-20 сутки под воздушным мицелием образуются синевато-зеленоватые спородохии. На картофельном агаре на шестые сутки к.олонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый. Колонии рыхлые, слегка порошащие. Обратная сторона колоний без пигментации. На пятнадцатые сутки спороношение обильное, преимуществен микроконидии. Макроконидии с тремя перегородками, несколько длинее и ;тоньше, чем на агаре Чапека 28,039,4 X 4,2-5,6 мкм. Хламидоспоры единичные. На зернах риса (по Райло, 1950) окраска культуры серовато-розово-лиловая. Спороношение слабое. Отношение к источнику углерода. Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха розу, лактозу, крахмал, хуже - целлю лозу. Спородохии обильнее -всего образуются на средах с лактозой. Отношение к источнику азота. Гриб почти одинаково успешно использует источники аммонийного и нитратного азота (азотнокислый аммоний и азотнокислый натрий), а также мочевину. Под воздействием гриба среды с азотнокислым аммонием или мочевиной при обретают розовато-Фиолетовую (Н-4) пигментацию. Штамм продуцирует леваназу во время культивирования гриба в питательной среде, содержащей леван. Пример. Культуру F, so I aniвыращивают на первом этапе в пробир ке со скошенной средой следующего состава, %: агар-агар 2,0, пивное су ло крепостью 8° Баллинга. Для синтеза леваназы гриб выращивали при температуре 25 или 30°С в питательной среде, содержащей, %: леван 0,8, КСС 0,62; Ма,НРОд0,25, пептон 0,2{ дрожжевой экстракт 0,3, Среды стерилизовали при 1 атм в течение 30 мин, растворы левана стери лизовали отдельно путем дробной сте рилизации при нейтральном значении рН и добавляли в питательные среды перед постановкой опыта. Культивирование производили в течение двух суток в колбах емкостью 0,5 л на качалке или в 1 л питательной среды с стеклянных сосудах для глубинного культивирования микроорганизмов, По сев в эти питательньге среды произво дили водной суспензией культуры, полученной на первом этапе. Активность готовой культуры сост ляет 11-15 единиц леваназы в 1 мл культуральнойжидкости (за единицу леваназной активности принято количество фермента, которое катализиру ет уменьшение оптической плотности реакционной смеси на 0,01 при 450 н за 1 мин инкубации при следующих условиях: концентрация левана в реа ционной системе 6,7-7,0 мг/мл, испо зуется 0,05 М фосфатный буфер с рН 6,0, температура инкубирования ) Выделение препарата леваназы из кул уральной жидкости производили после тделения от нее биомассы гриба. ля этого к культуральной жидкости обавляли сульфат аммония до 80% асыщения и выпавшие осадки отделяли ентрифугированием, Штамм Fusarlum solani-68 - может айти применение для получения леваазы-фермента, гидролизуюадего полиахариды леван и инулин. Продукт идролитического действия леваназыруктоза используется в пищевой проышленности, в медицине и научных сследованиях. Леванаэа может быть спользована для профилактики зубноо кариеса, так как она гидролизует олисахариды, содержащиеся в зубных ляшках. Фермент может быть испольован для исследования структуры поисахаридов . Формула изобретения Штамм гриба Fusarium solani-68 продуцент леваназы. Штамм хранится в коллекции культур Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений, коллекционный номер 135. Морфологические и культуральные признаки штамма. На агаризованной среде Чапека на шестые сутки при температуре 18-20 колонии гриба достигают в диаметре 3-4 см. Воздушный мицелий беловатый войлочный. Обратная сторона колонии со слабой синевато-зеленоватой (6-2) пигментацией. Спороношение обильное, первоначал1зно преимущественно в мицелии: микро- и макроконидии. Макроконидии с тремя перегородками 22,4-33,6 X 5,6-7,0 мкм. Микроконидии от 3 до 6 мкм. Хламидоспоры единичные, конечные или промежуточные,. На 15-30 сутки под воздушным мицелием образуются синевато-зеленоватые спородохии. На картофельном агаре на шестые сутки колонии достигают 3,5-4,5 см в диаметре. Воздушный мицелий беловатый. Колонии рыхлые, слегка порошащие. Обратная сторона колоний без пигментации. На пятнадцатые сутки спороношение обильное, преимущественно микроконидии. Макроконидии с тремя перегородками, несколько длинее и тоньше, чем на агаре Чапека 28,039,4 х 4, мкм. Хламидоспоры единичные. На зернах риса окраска культуры серовато-розово-лиловая. Спороношени.е слабое. Отношение к источнику углерода. Гриб хорошо усваивает глюкозу, саха 7751246

розу, лактозу, крахмал, хуже - цел- .гриба среды с азотнокислым аммонием

люлозу. Спородохии обильнее всегоили мочевиной приобретают розоватообразуются на средах с лактозой.фиолетовую (Н-4) пигментацию.

Отнесение к источнику азота. ГрибШтамм продуцирует фермент леванозу

почти одинаково успешно используетпри культивировании микроорганизмов

аммонийные и нитратные формы азота,в питательных средах, содержащих леа также мочевину. Под воздействием ван в качестве источника углерода.