Способ получения препарата "трансфер-фактора Советский патент 1980 года по МПК A61K35/16 

1

Изобретение относится к медицине а именно к иммунологии, и может быть использовано при получении иммунологических стимуляторов.

В современной терапии иммунодефицитных состояний, аллергических и аутоиммунных заболеваний, а также при лечении хронических инфекций и В онкологичес сой практике в качестве вспомогательного средства применяются низкомолекулярные (ниже 300GC10000 дальтон) компонены лимфоцитарных лизатов, называемые препаратами трансфер-фактора (фактора, переносящего реципиенту клеточный иммунитет от донора лимфоцитов). Подобный препарат может быть использован с диагностическими целями и в экспериментальной эммунологии.

Известны способы получения препарата трансфер-фактора из лимфоцитов донорской крови, лимФоидных органов , например миндалин, из которых тем или иным способом (замораживание и оттаивание, фенольная экстракция, экстракция детергентами) готовят экстракт или лизат. Полученные лизаты или экстракты подвергают диализу или ультрафильтрации для выделения низкомолекулярной Фракции, которую затем лиофилизируют 1.

Известен также способ получения препарата трансфер-фактора для

5 индукции клеточного иммунитета:препарат экстрагируют с тритона Х-100 из культивированных лимфоцитов, разрушенных замораживанием и. оттаиванием, затем вьаделяют низкомоtO лекулярную фракцию экстракта с

помощью ультрафильтрации на полых волокнах ХМ-50, РМ-10 и М-2 (Амикон, США) и лиофилизируют 2.

Однако указанный способ предусматривает в качестве исходнО1 о сырья только лимфоциты, источники которых могут быть ограничены. Кроме того, применение детергента (тритона Х-100) для оптимизации условий

20 экстракции не обеспечивает получения препарата без привнесенных примесей: В конечном продукте остается тритон Х-100, обладающий побочной биологической активностью, поскольку способ не предполагает условий для его удаления.

Цель изобретения - расширение сырьевой базы для получения препарата. Поставленная цель достигается

30 тем, что В предлаг аемом способе получения препарата трансфер-фактора в качестве биологического материала используют плазму донорской крови, экстракцию проводят этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,5% и насыщении раствора двуокисью углерода, а. в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации, исJrloльзyют двуокись углерода при рабо чем движении его 0,15-0,20 МПа.

Пример . После обычной подготовки к ультрафильтрации (центрифуги рования и фильтрации через мембранный фильтр Владипор МФА-0 55) 482,5 см плс13мы донорской-крови помещают в ячейку для ультрафильтрации. При постоянном перемешивании без вспенивания прибавляют см этанола

(9. Воздух из ячейки вытесняют с помощью сжатой углекислоты, после герметизации ультрафильтрационной системы устанавливают рабочее давление углекислоты 0,2 МПа. Ультрафильтрацию ведут в течение 4 ч {мембрана Владипор УЛМ-150, рабочая площадь 150 см ). Содержащийся в фильтрате активный продукт разливают по 2 см в ампулы и лиофилизируют.

Тестирование полученного препарата проводят по измерению его цитоиммобилизующей активности.

Результаты реакции торможения ,активной миграции макрофагов морской свинки представлены в табл.1, а изменение электрофоретической подвижности индикаторных клеток - в табл,2.

Таблица 1

Перитонеальные

клетки

морской

свинки ;Прединкубация, -1 препаратом трансфер90 мин при комнатной температуре. Миграция из капилляров в течение 18 ч

Клетки PPD Стабилизикрови ту- туберку- рованные беркулин- лина эритроциты негативного донора

Прединкубация, как б опыте, представленном в табл.1 Оценка реакции с помощью цитоферометра (Оптон).

7(f;fc

Стафилокок- Макрофаги ковый анти- морской фагин свинки

14 фактора in vitro культивирования. Твблица2

Как видно из приведенных результатов тестирования, препарат трансфер-фактора , полученный по предлагаемому способу, сообщает лимфоцитам нормальной морской свинки и туберкулин-негативного донора способность вьщелять лимфокины в ответ на антиген (антифагин - в реакции торможения миграции макрофагов морской свинки и PPD - в реакции замедления электрофоретической подвижности индикаторных клеток).

Использование предлагаемого способа получения препарата трансферфактора позволяет привлечь дополнительный источник сырья, свободный от микробной контаминации (например, по сравнению с лимфоцитами миндалин) Препарат трансфер-фактора может быть добавочным продуктом при производстве донорского гамгла-глобулин а и антилимфоцитарного глобулина, формула изобретения

Способ получения препарата трансфер-фактора путем экстракции биологического материала с последующей ультрафильтрацией экстракта под давлением газов, отличающий с я тем, что, с целью расширения сырьевой базы, в качестве биологического материала используют плазму донорской крови, экстракцию проводят этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,5% и насыщении раствора двуокисью углерода, а в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации используют двуокись углерода при рабочем далвении его 0,15-0,20 МПа.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

2.Патент Великобритании 1443948,-кл. А 61 К 45/00, 20.10.1972.