Способ получения антигена для диагностики вирусного гастроэнтерита Советский патент 1980 года по МПК A61K39/225 A61B10/00 

Изобретение относится к медицин-. ской вирусологии и может найти применение для диагностики вирусного гастроэнтерита.5

Известен способ получения антигена для диагностики вир сного гастроэнтерита путем выращивания обезьяннего вируса SA-11 в культуре клеток с последующим выделением вируса из 10 инцифированной культуры клеток 1.

Однако известный способ не обеспечивает высокой гемагглютинирующей активности антигена.

Целью изобретения является повы- 5 шение гемагглютинирующей активности агнтигена.

Эта цель достигается тем, что после выращивания инфицированную культуру клеток отделяют от питательной 20 среды центрифугированием и выделяют вирус путем добавления к полученному осадку воды в количестве 1/20-1/25 к объему осадка и отделения жидкой фракции.25

Способ осуществляют следующим образом.

Культуру клеток почек зеленой мартышки, или клеток перевиваемой линии Vero заражают вирусом обезьян 30

SA-11. На третий день после заражения, т.е. до наступления полного цитопатического эффекта, клеточный слой механически (пастеровской пипеткой с загнутым концом) отделяют от стекла, и вместе с культуральной жидкостью центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку для разрушения оболочки клеток и концентрации вируса добавляют цвадцати-двадцатипятикратно уменьшенный объем дистиллированной воды (по сравнению с объемом надосадочной жидкости). Затем центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин для осаждения разрушенных клеток и насадочную жидкость используют как антиген в реакции торможения гемагглютинации.Приготовленный препарат можно хранить при температуре-10-15 С несколько месяцев или при +4 С в течение одного месяца и использовать по мере надобности как гемагглютинирующий антиген в реакции торможения гемагглютинации.

Способ позволяет повысить гемагглютинирукяцую активность антигена вируса SA-11 до такой степени, что

он может быть использован в реакции гемагглютйнации с целью серологической диагностики вирусного гастроэнтерита.

Способ не требует специального лабораторного оборудования и доступе для широкой сети вирусологических лабораторий.

Кроме того,он позволяет проводить Ьыструю Диагностику вирусного гастроэнтерита, в течение одного рабочего дня. Это имеет большое значение для своевременной диагностики и лечения острых вирусных л астроэнтеритов, особенно у детей грудного возраста.

Сыворотка больного ребенка испытывается в минимальном количестве поэтому кровь берут из пальца, не травмируя ребенка манипуляциями венозного забора крови. Основной компонент диагностики вирусного гастроэнтерита - антиген-прост в изготовлении, достаточно стабилен, его длительно сохраняют при -10-15 С в повседневной работе размороженный антиген можно хранить при +4°С в течение одного месяца. Гемагглютинирующая активность антигена довольно высокая, титр его достигается 1:160 - 1:320. Поэтому расход антигена в рабочем разведении минимальный. При хранении в замороженном состоянии длительное время гемагглютинирующая способность его сохраняется без снижения титра, чем и обеспечивается надежность способа.

Формула изобретения

Способ получения антигена для диагностики вирусного гастроэнтерита путем выращивания обезьяннего вируса SA-11 в культуре клеток с последующим выделением вируса из инфицированной культуры клеток, о тличающийся тем, что, с целью повышения гемагглютинирую11ей активности антигена, после выращивания инфицированную культуру клеток отделяют от питательной среды центрифугированием и выделяют вирус путем добавления к полученному осадку воды в количестве 1/20-1/25 к объему осадка и отделения жидкой фракции.

5Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе 1. Archiv Gesambe Virusforchung, 1967, 22, 235-245.