Способ определения псоралена Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 G01N21/78 

4

со

ас Изобретение относится к клиничес кой биохимии,а именно к способу опредапения псоралёна, и может.быть при менено для анализа этого вердества в различных материалах для клиничес ких, фармацевтических, санитарных и токсикологических исследований. Известен способ определения псор лена методом нейтрализации после взаи модействия его с 0,5 н.спиртовым раствором гидроокиси калия с порошк окиси цинка и нагревании с последую щим титрованием 0,1 н. раствором се ной кислоты в присутствии индикатор фенолового красного l . Heдocтaткa ш способа являются ег низкая чувствительность, так как дл определения берут навеску 0,3 г, и неиэбирательность, поскольку многие органические соединения определяютс методом нейтрализации. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаем л1у результату является способ количественного определения псоралёна, включающий обработку анализируемой. пробы химическим реагентом с последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси , Недостатки способа состоят в его низкой избирательности, так как ана логичным образом реагиру рт фенолы, флавоноиды, оксикоричные кислоты и другие природные соединения,и неBbicoKott точности(относительная сяиибка составляет ±4%. Чувствительность способа, позволя:Ю1цего определять псорален в чистом виде и только пос ле хроматографирования в растительном сырье, составляет 20 мкг/мл. Целью изобретения является повышение чувствительности и селективности способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения псоралёна, заключающеглуся в обработке анализируемой пробы химическим реагентом с последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси, анализируе мую пробу обрабатывают водно-спирто выми растворами брома и гидроокиси аммония с последующим измерением флуоресценции полученной смеси. Способ осуществляют следующим -образом. Точную навеску или исследуемый раствор обрабатывают этиловым спиртом доводят этиловым спиртом до метки 100 мл в мерной колбе, аликвот данного раствора обрабатывают ным раствором брома и гидроокиси аммония и исследуемый раствор флуорИ метрируют по отношению к стандартному раствору. Подобной реакции не дают -близкие ho структуре соединения: кумарин, ксантотоксин, 7-оксикумарин келлин, карбокромен, ксантготоксол и изопимпинеллин./ Сгюктр возбуждения флуоресценции полученного раствора находится в об.ласти от 320 до 420 нм с максимумом 383 нм, а спектр излучения флуоресценции от 400 до 540 нм с максимумом 462 нм. Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и концентрацией псоралёна лежит от 0,01 до 10 мкг/мл (табл.1.) . Зависимость интенсивности флуоресценции псоралёна ( мкг/млJ от количества раствора брома и гидроокиси аммония показана в табл.2 и 3. Результаты флуориметрического определения, псоралёна в таблетках по 10 мг представлены в табл.4. Интенсивность флуоресценции псоралёна после взаимодействия его с бромом и гидроокисью аммония не изменяется 2 ч. Чувствительность предлагаемого способа составляет 0,01 мкг/мл. пример 1. Определение псоралёна в таблетках по 0,01 г. Точную навеску (0,05 г) порошка Мелко измельченных таблеток переносят в мерную колбу на 100 мл прибавляют 80-90 мл этилового спирта и энергично встряхивают 3 мин. Затем добавляют этилового спирта до метки. К 1 мл раствора прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды, 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и добавляют 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают. Флуориметрируют исследуемые растворы по отношению к стандартному раствору с содержанием 5 мкг/мл, для чего к 1 мл стандартного раствора, содержащего 50 мкг/мл псоралёна, прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды, 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и прибавляют 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония. Ф;туориметрирование проводят одновременно с растворами исследуемых образцов. Пр и м е р 2. Определение псоралёна в 0,1%-ном растворе псоралёна. nepisHocHT 0,5 мл исследуемого раствора в мерную колбу на 100 мп, прибавляют дистиллированной воды до метки. К 9,В мл раствора прибавляют 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают, прибавляют 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают и флуориметрируют одновременно против стандартного раствора, содержащего 5 мкг/мл псоралёна, для чего к 1 мл стандартного раствора, содержащего 50 мкг/мл псораёна, прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды, 0,1 мл насыщенного водного аствора брома и 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси , перемешивают

И флуориметрируют одновременно с об. разцами испытуемых растворов.

Результаты флуориметрического определения псоралена в 0,1%-ном растворе на определение взято 0,5 мл 0,1%- ного- раствора псоралена представлены в табл.5

Пример 3. Определение псора-(Лена в лекарственном растении псорапее; - Мелко измельченные плоды псоралеи 1(2 г) экстрагируют со 100 мл смеси этилового спирта и хлороформа (3:7). Этот раствор (0,1 нп) наносят на хроматограмму в тонком слое (закрепленном) силикагеля марки oCS 5/40/и 15 +13% гипса. Пластинку с нанесенной пробой В1лсуц1ивают на воздухе в течение 10 мин., помещают в камеру с системой растворителей диэтиловый эфи - петролейный эфир - этилаце- 20 тат (9:9:1) и хроматографируют восходяцшх методом. После высушивания

хроматограмм в течение 5 мин на воздухе, в ультрафиолетовом свете устанавливают локализацию пятна псоралена. Пятно с Я 0,56, отмеченное по стандарту псоралена, количественно переносят в пробирку, прибавляют 9,8 мл дистиллированной воды, встряхивают и прибавляют 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и добавляют 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония. Флуориметрируют исследуемые образцы по отношению к стандартному раствору

с содержанием О ,1 0 ,5 jl,0 и 5,0 мкг/мп псоралена, для чего к 9,8 мл стан- ... дартного раствора прибавляют 0,1 мл насыщенного 1В9ДНОГО раствора брома, перемешивают и прибавляют в,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония..

Флуориметрирование проводят одновременно с растворами исследуемых образцов. .

таблица 1

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПСОРАЛЕНА, включающий обработку анализируемой пробы химическим реагентом с .последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси, о т л и ч а ю ад и и с я тем, что, с целью пошлиения чувствительности и селективности способа, анализируемую пробу обрабатывают водноспиртовыми растворами брома и гидроокиси аммония, с последующим измерением Флуоресценция полученной смеси. (П С

Количество насыщенного брома, МП

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25

,Кдлй4ество 25%-ного раствора гидроокиси

0,05 0,10 0,15 0,20

66 85 85 82 80

Таблица 3

Относительная интенсивность флуоресценции

80 80 80 78 liacTBopa .1 Относительная интенсивность флуоресценции

1049809

продолжение табл. 3