Диметиловый эфир 2, 4, 6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты в качестве ингибитора ДНК-зависимого синтеза РНК Советский патент 1992 года по МПК C07D265/38 A61K31/538 A61P35/00 

Изобретение относится к новому биологически активному соелинению, а именно к лиметиловому эфиру 2,k,6триамино-3 оксЬфеноксазин-1,9-Ликарбоновой кислоты формулы

СООСНз СООСН NH

Ш2 Mi

в качестве ингибитора ДНК-зависимого синтеза РНК,

Указанное свойство позволяет прелполагатк возможность применения этого соелинения в мелицине.

Известен противоопухолевый антиCD О О5 биотик (актиномицин D), являющийся BeuiecTBOM, продуцируемым грибом ,Actinomyces chrysomallus, который наиболее часто применяют лля подавле

сл ния РНК-полимеразной реакции.

оо

Целью изобретения является расширение ассортимента соединений, которые могут найти применение в качестве противоопухолевого веществ.

Предлагаемое соединение используют в качестве вещества, являющегося ингибитором ДНК-зависимого синтеза РНК.

Его получают путем взаимодействия 2-нитро-З-окси-А-аминобензойной кислоты с карбобензоксихлоридом в среде безводного бензола в присутствии триэтиламина с последуюьцим восста новлением образующегося метилового эфира 2-нитро-3 окси-Агкарбобензокс аминобензойной кислоты гидросульфитом натрия в.среде метанола до мети лового эфира .-амино.-3-окси- -карбобензоксиаминобензойной кислоты, взаимодействием --с феррицианидом калия в фосфатном буфере {рН 7,2), в среде метанола, гидрированием образующегося диметилового эфира ,6-дикарбобензоксиаминоцианнабориновой кислоты в присутствии паллади евой черни и окислением образующе гося при этом лейкосоединения кисло родом воздуха. Пример. Раствор 2 г метилов го эфира 2-нитро-3 окси- -аминобензойной кислоты и 5 мл триэтиламина. 35 мл безводного бензола нагревают до кипения и добавляют 2 г карбобен зоксихлорида я 3 мл безводного бензола, смесь кипятят 3 ч, Отфильтровывают осадок гидрохлорида триэтиламина, фильтрат упаривают досуха,, остаток обрабатывают абсолютным спи том -1 выделяют 2 нитро-3-карбометок си-6-карбобензоксиаминофенолят три этиламмониЯо Т.„пл, 120°С (с разл„). Оранжевые кристаллы из смеси бензол петролейный эфир. Найдено,: С 59,32; И 6,84; N 9,38, CZI Z- N O Вычислено,%: С 59,05; Н 6,53; N 9,39о Метиловый эфир 2-нитрО 3 окси- карбобензоксиаминобензойной кислоты получают обработкой водного раствора полученного фенолята разбавленной соляной кислотой Т.пл. u9 С (из смеси бензол - петролейный эфир Найдено,%; С 55,88; Н 4,16; N 8,14. 0,611 N,07 Вычислено,-;;: С 55,49; И 4,08; N 8,09.. К раствору 1 г метилового эфира 2-нитро-3 Окси- -карбобезоксиаминобензойной кислоты в 100 Мл метанола добавляют 30 мл насыщенного раствор гидросульфита натрия при комнатной температуре и перемешивании. Через 1 ч реакционную массу разбавляют водой до 100 мл и отфильтровывают метиловый эфир 2-амино-3-окси-- -кар бобензоксиаминобензойной кислоты. Выход 0,59 г (Р.. Т.пл. 1ПЯ-10Я° Найдено,: N 8,69. г г Вычислено,-;: N 8,86. Для получения диметилового эфира ,6-дикарбобензоксиаминоцианнабариновой кислоты раствор 0,3 г метилово го эфира 2-амино-З-окси- -карбобензоксиаминобензойной кислоты в 100 мл метанола по каплям добавляют при перемешивании в 250 мл фосфатного бу фера (рН 7,2), нагретого до 50°С. Полученный раствор по каплям при энергичном перемешивании добавляют к раствору 4,5 г феррицианида калия в 50 мл фосфатного буфера (рН 7,2) перемешивают 2 ч при 50°С и оставляют на ночь при комнатной температуре.- Отфильтровывают осадок, промывают его последовательно водой, спиртом, эфиром. Выход близок к количественному. Т.пл. 23б-237°С, красные кристаллы из водного диметилформамида).Аддд,с , ни (б-.Ю) (метанол): 1(28 (2,10) (плечо), hh (2,2б). Найдено, С 61,08; Н 4,46; N 9,03с )l)2(( Вычислено,i: С61,34; Н4,18; N 8,94. К суспензии 0,3 г диметилового эфира ,6-дикарбобензоксиаминоциннабариновой кислоты в 30 мл диоксана добавляют равное количество све- неприготовленной палладиевой черни и гидрируют при атмосферном давлении в течение нескольких дней, периодически продувая систему водородом для удаления образующегося углекислого газа. Окончание гидрирования контролируют методом тех на пластинахСилуфол в системеизоамиловый спирт муравьиная кислота вода,3:2:1. Светло-желтый раствор отфильтровывают от катализатора, катализатор промывают 15 мл воды, объединяют фильтрат и промывные -воды и оставляют на воздухе на 1. ч. Отфильтровывают темнокоричневые хлопья диметилового эфира 2 ,ii ,6-триамино-3 оксофеноксазин-1 ,9дикарбоновой кислоты. Т.пл. , Аллакй , нм (-10-) (метанол): 260 (3,Й5), П (2,26). Найдено,%: С 51,68; Н 4,50. . . Вычислено,%: С 51,07; 4,29. При добавлении к раствору диметилового эфира 2, ,6-триамино-З-оксофеноксазин-1 ,9-Дикэрбоновой кислсуь

в натрийфосфатном буфере (|цО,1; рН 7,0) раствора ДНК из селезенки крупного рогатого скота марки А) наблюдаются характерные изменения в спектре поглощения указанного диметилового эфира, свидетельствующие оего комплексоЪбразовании с ДЯК. Полоса поглощения (Л.л.,.,, +55 нм) гипохром NC

но смещается в длинноволновую часть спектра на 30 нм. По данным спектрофотометрического титрования константа комплексообразования К 1,510 величина В, характеризующая количество молекул комплексона, приходящееся на пару оснований ДНК, составляет 0,7-0,8.

Для полученного целевого диметилового эфира Л 50 т.е. доза, вызывающая торможение синтеза суммы нуклеиновых кислот в системе краткосрочных 20 ч клеточных культур С-37, L , опухоли Эрлиха и NK/IV составляет 10, 10-50, 10-50 и 10-50 мкг/мл соответственно.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что диметиловый эфир.,4, 6-триамино-3-оксофеноксазин-1,9-дикарбоновой кислоты на четырех изученных культурах клеток показал способность подавлять синтез нуклеиновых кислот о

На основании изучения включения метки (Н уридина) в нуклеиновые кислоты культуры эмбриональных диплоидных фибробластов человека в присутствии диметилового эфира Я,,-триамино-З-оксофеноксазин-i,9-Дикарбоновой кислоты установлено, что названное вещество является высокоэффективным ингибитором РИК-полимеразной реакции (см.таблицу).

10

15

20

25

. Примечание. Усредненные

30 сданные из трех параллельных опытов.

Как следует из приведенных данных диметиловый эфир 2,4,6-триамино-З-оксофеноксазин-1,9-ДикарЬоновой кислоты является более эффективным ингиби35тором дик-зависимого синтеза РНК, чем актиномимин Вгобладает значительной широтой действия (эффективен в низких и высоких концентрациях).

Диметиловый эфир 2,,6-триамино-3 оксофеноксазии-1,9-ликарбоновой кислоты формулы СООСНз (JOOCRi, .м Шг в качестве ингибитора ДНК-зависимого синтеза РНК. (Л