Способ получения тетрапептидов Советский патент 1980 года по МПК C07K5/107 C07K5/87 A61K38/07 

или его защищенно.е производное, где значения для В и С указаны выше, с последующим удалением защитных групп и выделяют целевой продукт, случае когда

X: NMe или NMePh, при желании окисляют перекисью водорода или метахлорпербензойной кислотой, для получения соединения формулы 1, где X: N(0)Mez, N(0)MePh. В тексте использованы следующие сокращения:

-трет-бутилоксикарбонил

вое

8и

-трет-бутил

JBCF - изобутилхлороформат Z - бензилоксикарбонил OCCJ - дициклогексилкарбодиимид оси - дициклогексилмочевина HONSu N-оксисукцинимид NMM - N-метилморфолин OMF - диметилформамид ОМЕ - 1,2-диметоксиэтан THF - тетрагидрофуран МГ - метиленгликоль Различные соединения и промежутоные веществаисследуют способом тонкослойной хроматографии (тс.х.) на силикагелевых пластинках (Кизельгель CF254 ) в следующих системах ЗЕ - метанол,хлороформ 1:2 3F - метанол,хлороформ 1:19 2В - хлороформ, метанол, уксусная кислота 19:9:1 ЗА - хлороформ, метанол,уксусная кислота, вода60:18:2:3 (1) вое - Phe-NHCH2.CH2.NHCOCH3К охлажденному до -20е раствору BOe-Ph-OH (2,65 г) в 20 мл хлористого метилена добавляют н-метилморфолин (1,01 г) и изобутилхлорформиат (1,37 г), после чего через 2 мин вво дят H2NCH,jCH2NHCOCH3(l/2 г). Температуру реакционной смеси поднимают до комнатной и смесь перемешивают при этой температуре в течение 21 ч, после чего растворитель отгоняют, а смолу растворяют В хлороформе. Раствор промывают насыщенным раствором NaHCO.j, 10%-ной водной лимонной .кислотой, водой до полной нейтрализации и, наконец, насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушат нгзд суль фатом натрия и упаривают досуха, тв дый остаток кристаллизуют из этилаи

за - хлороформ, метанол,уксусная

30: 18:4:6 кислота, вода ЗС - хлороформ, метанол, уксусная

90:27:2:3 кислота, вода 30 - хлороформ, метанол, уксусная кислота,

30:20:2:3 вода

4А -. изобутанол, этилацетат, уксусная

1:1:1:1 кислота, вода 5В - изобутанол,

3:1:1 уксусная кислота,вода 7В - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,

60:20:6:11 вода

7с - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,

120:20:6:11 вода

7 О - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,

240:20:6:11

вода

7F - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,

480:20:6:11

вода

8А - хлороформ, изо3:1

пропанол

8В - хлороформ, изо9:1

пропанол

Пример 1. 1-Тирозил-0-алаилглицил-1-фенилаланин-2-ацетамидотиламид.

Его получают согласно следующему пособу OHNHaCHgCHaNH-COCIfj -ISIHCHaCHaNFfCOCHj ккснгСН2:ынсосНз ШГСН2С Н2МГСОСШз .:N HCH:gC3i2KHcocH5 тата, получают амид 1 (3,0 г), RI 7F 0,35. () се-H Ph-NHCH CHaNHCOCH 3 г BOC-Ph-NHCH CH NHCOCH растворяют в 5 М неС в этилацетате (20 мл) и 2,6 М неб в уксусной кислоте (5 мл), и раствор перемешивают при температуре окружающей среды в течение 30 мин. Растворитель отгоняют и остаток несколько раз растирают с безводным диэтиловым эфиром. Гидрохлорид (2) получают в виде гигроскопического твердого вещества (0,45 г), Rf ЗБ J0,5) . (4) вое GCy Ph NHCH CHxNHCOCHj. Это соединение получают любым из следующих способов. А. К раствору BOe-GCy-Ph-OH (1,0г) и H2,NCH2 CH NHCOCH5(0,4 г) в диметилформамиде, озСпажденному в ледяной бане с сольк, добавляют 0,78 г N-оксисукцинимида и 0,668 г дициклогексил карбодиимида. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и пр должают перемешивание в течение ноч отфильтровывают выпавший в осадок оси и фильтрат упаривают. Остаток растворяют в хлороформе, промывают насьлденньом раствором бикарбоната на рия {250 мл), 10%-ной водной лимон ной кислотой ( мл) и водой до полной нейтрализации, а затем насыщенным солевым раствором. Органичес кую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Остаток хромато графируют на колонке с силикагелем (,4 см). Элюируют сначала смесь хлороформа изопропанола в соотношении (19:1), затем в соотношении (4:1). Названное соединение получаю в виде смолы (0,60 г) Rr 8В 0,4;Rp 7F 0,2. Б. К охлажденному в бане с твердой углекислотой в смеси с четыреххлористым углеродом раствору 1,072 ВОС-СЕу-ОН в хлористом метилене добавляют 0,618 г N-метилморфолина и 0,836 г изобутилхлорформиата. При этой же температуре через 2 мин до бавляют С Н. Ph МНС HgCH NH СОСН 3 (1,75 г) и 0,618 г М-метилморфолина и температуру поднимают до комнатно Реакционную смесь обрабатывают посл перемешивания в течение ночи так, как описано для соединения 1. Остаток чистят согласно А. Продуктполу чают в виде смолы (0,65 г). Rr. 8В 0,4; Rn 7F 0,2. (5) БОС - Туг (BLJ -D-ABa-Gey-Ph NHCH2.CH2.NHCOCH3 (i) обрабатывают 0,64 г ВОС-С у-Ph-NHCH CHaNHCOCHT,. 5,5 М нее в этилацетате (5 мл) и 2„6 М нее в уксусной кислоте (5 м при температуре окружающей среды. Тур DAla Через 45 мин растворитель отгоняют и остаток растворяют в диэтиловом эфире. Гидрохлорид дипептидный получают Б виде гигроскопического твердого вещества (0,54 г), R 3D 0,45. (М) BOC-Tyr(Bu-t )-ОАба-ОН ( г) и СЕ H Gey-Ph-NHCH2CH2lJHCOCH(0,5 г) растворяют в 3 мл диметилформамида и охла эдают в ледяной бане с солью. Затем к раствору добавляют 0,355 г N-оксисукцинимида и 0,303 г дициклогексилкарбодиимида, а потом 1,48 г N-метилморфолина. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и перемешивание продолжают в течение ночи. Выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают растворитель отгоняют и остаток распределяют между этилацетатом и водой. Органический слой промывают насыщенным вoдньuvI раствором бикарбоната натрия (2x50 мл), 10%-ной водной лимонной кислотой ( мл), водой до нейтрализации, наконец насыщенным солевым раствором. Органический слой сушат над сульфатом натрия и упаривают . Тетрапептид получают в виде смолы (0,65 г) Rf 7С 0,65; R 3D 0,8. (6) Н-Туr-D-Aea-GEy-Ph-NHCH2CH2NHCOCH 30,65 г BOC-Tyr(Bu)-D-Aea-GEy-Ph NHCHgCH2NHCOCH3(0,65 г) обрабатывают 2,6 М HCF в уксусной кислоте взятой в избытке, в течение 45 мин при температуре окружающей среды. Растворитель отгоняют и остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (,5 см) в системе ЗА. Полученную смолу сушат лиофилизацией, получают названное соединение(О,45 г). R ЗА 0,3,ci -6,95°(, OMF). Пример 2. и-Тирозил-1-аланилглицил-М-метил-1-фенилаланин-3-диметиламинопропиламид.

(1) BOC-MePh-NHCHiCHiCHaNMe.

Раствор N-хрет-бутилоксикарбонил-N-метилфенилаланин (2,79 г) 1,01 г. N-метилморфолина в дихлорметане 0. (20 мл) при перемешивании охлаждают до -20с, затем к нему добавляют 1BCF (1,-37. г) и спустя 5 мин NH2CH2 CH2 CH,jNMe2.(l,02 г). Перемешивание продолжают 1 ч при -20с, за- 5

тем температуру поднимают до комнатной и продолжают перемешивание в течение 12 ч. Смесь упаривают, остаток растворяют в этилацетате (50 мл). Этилацетатный раствор промывают водным раствором бикарбоната натрия (насыщенный, 50 мл), водой (2x50 мл) fi 10%-нсй водной уксусной кислотой 12x50 мл) . Кислые экстракты объединяioт подщелачивают насьпценным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом ( мл). Этилацетатньае экстракты объединяют, сушат над сульфатом натрия и упаривают, получают названное соединение в виде масла, Ко IE 0,24; Rn ЗА 0,37. (2)H-MePhe-NHCH2CH2.CH2NMe,. 2НСЕ. Масло, получение которого описано в стадии (.1), растворяют в этилацетате (10 мл), добавляют НСС в уксусной кислоте (6,63 М, 6 мл) и НС в этилацетате (5,7 М, 6 мл). Раствор перемешивают в течение 2 ч, упариваю получают продукт в виде дихлористоводородной соли (2,2 г), Ro IE 0,02; Rr- ЗА 0,08. (3)BOC-GCy-MePh-NHCHjCH CHjNMe. Раствор трет-бутилоксикарбонилглицича (1,05 г) и 0,606 г N-метилморфолина в дихлорометане (12 мл) при перемешивании охлаждают до -20 С Добавляют 0,819 г (6 ммоль) изобути хлорформиата и смесь перемешивают в течение 5 мин перед добавлением (2), указанного выше (2,02 г) в 5 мл диметилформамида. Раствор перемешивают в течение 1 ч при -20С и в течение 12 ч при комнатной температуре, затем упаривают. Остаток растворяют в смеси этилацетата (50 мл) и водного раствора бикарбоната натрия (10%-ный 50 мл). Органическую фазу отделяют, промывают водным бикарбонатом натрия (10%-ный, мл) и водой (Зл50 мл) Этнлацетатный раствор сушат над суль фатом натрия упаривают, получают наз ванное соединение в виде масла. R IE 0,21; R ЗА 0,37. (4) И - b t- у - М е Р h - N Н С Н 2 С Н 2 С Н N Н с Защищенный дипептид (з) обрабатывают указанным способом (2), получаю дихлористоводородную соль (4) (2,0 г 3 виде белого твердого вещества, Rr IE 0,03; Rr ЗА 0,03. , (5) BOC-Tyr ()-DAEa-Cey-MePh-NHCH2 CH2CH,2NMe2 . Раствор BOC-Tyr(BU)-D-Ata-OH (1,22. r) , H-Gey-MePh-NHCH2CH2CH2NMe2 V2HCe (1,18 r), 0,345 г N-оксисукцинимида и 0,30 г N-метилморфолина в 20 мл безводного диметилформамида охлаждают до . Добавляют ССС (0,680 г), смесь перемешивают в течение 18 ч, затем выпаривают. Остаток растворяют в этилацетате (50 мл и пpp 1Ь Iвaют водным бикарбонатом натрия (10%-ный, 2-.50 мл), водой ( 50 мл) , отделяет этилацетатный слой, сушат, его над сульфатом натрия Т DAla Gly и упаривают досуха. Остаток раствояют в метаноле, выносят в колонку с силикагелем (35 к 2 см) и продукт элюируют системой IF. Фракции, содержащие нужное соединение, собирают, упаривают и остаток растворяют в этиацетате (100 мл). Этилацетатный раствор промывают водным бикарбонатом натрия (10%-ный, 3X100 мл), сушат, упаривают, получают названное тетрапептидное соединение (5) в виде белого твердого вещества Кл IE 0,18; RO ЗА 0,39..т (6) H-Tyr-D-AEa-Cey-MePh-NHCH2.CH-2CH2NMe2. К раствору 500 мг защищенного тетрапептида(5) в 5 мл этилацетата при перемешивании добавляют раствор хлористого водорода Б этилацетате(5,7 М, 2,5 мл). Спустя 1 ч реакционную смесь фильтруют и остаток промывают петролейным эфиром, сушат и лиофилизируют из воды, получают продукт (380 мг) в виде белого твердого вещества. Rr 4А 0,27, Rr ЗВ О , 47 , oL J Jl + + 23,6 (, 0,1 М нее). Пример 3. 1-Тирозил-0-аланилглицин-N-L-фенилаланин-2-диметиламинопропиламид-М-окись. (1)ВОС-Туг(Ви)-0-Аеа-СЕy-MePh-NHCH2CH2.CH2N(0)Me2. К раствору 500 мг БОС Ту г ( Ви) - D-Aea-GEy-MePhe-NHCH2.CH2.CH2NMe.,(500 мг) в 10 мл метанола добавляют водный раствор перекиси водорода (30%-ная, 0,16 мл) и раствор перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре. Отфильтровывают выпавший осадок, маточник упаривают, получают нужную защищенную N-окись в виде смолы. Rr- IE 0,08; Rf ЗА 0,41. (2)HTyr-O-Ata-GSy.-MePh-NHCH2CH2CH2N(0)Me2. Смолу, полученную в стадии (1), растворяют в 5 мл этилацетата и к раствору добавляют раствор HCg в этилацетате (2,63 М, 1 мл). Раствор перемешивают в течение 1 ч, отфильтровывают , сушат твердое вещество и лиофилизируют из воды, получают нужный продукт (240 мг) в виде белого твердого вещества. R 4А 0,56, Rj3B 0,52,roiJ/ + + 18,8° (с l; 0,1 М нее). Пример 4. 1-Тирозил-0-аланилглицил-М-метил-1-фенилаланин-2-диметиламиноэтилам-ид. Это соединение получают согласно следующему способу. MeRh. (1)BOC-MePh-NHCH CH NMe. BOC-MePh-OH и N,N-диметилэтилендиамин конденсируют в условиях описанных в примере 1 (1), получают амид в виде масла. (2)HMePhe-NHCH2.CH2NMe2. 2НСе . М-Защищенный амид из указанной стадии (1) деблокируют в условиях, описанных в примере 1 (2), получают целевую хлористоводородную соль в виде масла, (3) BOC-Tyr(Bu--t-)-D-Ala-Gly-MePh-NHCHxNHCH CHjiNM.. К раствору 700 мг (1,5 ммоль) BOC-Ter(Bu)-DAla-Gly-OH в 7,5 мл безводного тетрагйдрофурана добавляют 15.2 мг.(1,5 ммоль) N-метилмррфолина,. раствор охлаждают до -15°С, не., прекращая перемешивания добавляют 205 мг (1,5 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 5 мин вводят раствор 2НС IH.-MeP.h-NHCH.CH2NMe (568 мг, 1,5 lмoль) , а затем 303 мг (3 ммоль) М-метил1у1Орфолина, Спустя 18 ч реакцио,нную смесь упаривают и остаток распределяют между 50 мл этилацетата и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл Отделяют этилацетатный слой, промывают его насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл), водой (2 X 50 мл) и рассолом (50 мл) сушат над сульфатом натрия;упариваю Остаток хроматографируют на силикаг ле, используя систему 7В.,Подходящие фракций, содержащие продукт,объ единяют, упаривают, получают целево тётрапептидный амид (700 мг) в вид стеклоподобного твердого вещества. (4) 2НС I HTyr-DAIa-Gly-MePh-NHCHjCHjNMCj, Защищенный пептид, полученный ка описано в стадии (З), деблокируют в условиях примера 2(6), получают целевой продукт. После лиофилизации, получают тёт рапептидный амид (200 мг) в виде бе лого твердого вещества, R 7В 0,04; Rr ЗА 0,07; Rf 4А 0,23. ,2° (с 0,50, DMF). Пример 5. и-Тирозил-О-аланилглицил-L - фенил алани нтиоморфолин амид-S-окись. . BOC-P 1-N J Раствор 1,32 г BOC-Ph-OH и 680 м изобутилхлорформиата в 10 мл димети формамида, охлаждают до -2Q°C и при перемешивании добавляют к нему 520 N-метилморфолина. Спустя 2 мин ввод холодную суспензию, состоящую из 690 мг тиоморфолин гидрохлорида (690 мг) и 520 мг N-метилморфолина в 8 мл диметилформамида. Перемешива ние продолжают в течение 30 мин при -20°С, а затем при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель отгоняют, полученный материал распределяют между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Этилацетатный слой отделяют и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, дважды 10%-ным раствором лимонной кислоты в воде, а затем водой и, наконец, насыщенным раствором хлористого натрия. Этилацетатный jpacTBOp сушат над сульфатом натрия, упаривают, получают тиоморфолинамид в виде смолы (1,5 6)г . /- (2) H-Pii-:t js При перемешивании к раствору /-Л 1,05 г S в 3 мл уксусной кислоты при комнатной температуре добавляют раствор, хлористого водорода в уксусной кислоте(2,6 М, 3 мл) и через двухчасовые интервалы добавляют еще 3 мл двумя порциями. Растворитель и хлористый водород отгоняют, остаток растирают с безводным диэтиловым эфиром, эфир декантируют, а остаток растирают со свежеперегнанным безводным эфиром, получают фенилаланинтиоморфол.инамид в виде твердого вещества (788 мг). (3)BOC---Gly-Ph --Gly-Ph-N S 384 г BOC-Glv-OH (384 мг) конденсируют с.Ph-N S-HC (572 мг) собом, описанным выше дляВОС-Pti-N S, используя 258 мг изобутилхлорформиата и 424 мг N-метилморфолина. Получают 774 мг дипептидного амида, (4)ВОС - Tyr(Bu) -БА1а- Oly-Ph- I 697 мг BOO -O y-Ph-7 S смешивают с водной трифторуксусной кислотой (вода : трифторуксусная кислота 1:9,9 мл) в течение 1 1/2 ч.Кислоту отгоняют и остаток растирают с диэтиловым эфиром, получают порошок, который растворяют в 5 мл безводного 1 мг (5 мл) и доводят рН до 8 с помощью N-метилморфолина (влажная индикаторная бумага). Добавляют BOC-Tyr(Bu)-DAIa-OH (680 мг) , N-оксисукцинимид (211 мг) в 3 мл диметилформамида, а затем 377 мг дициклогексилкарбодиимида и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Твердое вещество отфильтровывают и фильтрат упаривают осуха. В остатке получают смолу,которую распределяют мелоду этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Этилацетатный лой дважды промывают насыщенным одным бикарбонатом.натрия, затем рииоды 10%-ной лимонной кислотой в воде, потом водой и насьш енным раствором хлористого натрия. Сушат над сульфатом натрия; упаривают и получают защищенный тетрапентидтиоморфо линамид (1,09 г). , . (5) Tyr-BAla-Gly-Fh-J S;: Защищенный тетрапептидтиоморфол амид {1,0 г) перемешивают в водной трифторуксусной кислоте (Н20:CFgCOO 1:9,9 мл) в течение. 11/2 ч..После упаривания и. растирания, с диэтиловы эфиром получают твердое вещество,ко торое чистят хроматографически на силикагеле (хлороформ:метанол:уксу ная кислота 60:18-1:1,5), а затем ионообменной хроматографией (смола Сефадекс SP, пиридиниевая форма используя градиент от 2% пиридина в воде до 5%. пиридина и 1%-ную уксусную кислоту в воде). Продукт лиофилизируют, получают тетрапептид тиоморфолинамид (495 мг). Туг-БА1а -1, /-V Тур -М1а - С1у -Pii- (10 О мг) в этаноле (50 мл),.обработанный пос ледовательно тремя порциями (20% по объему) перекиси водорода (0,3 мл каждая) с интервалами в 45 мин при перемешивании при комнатной температуре. После дальнейшего перемешивания в течение 1 ч раствор упаривают досуха, остаток растворяют в воде (20 мл) и лиофилизируют, полу чают белое твердое вещество (98 мг R ЗА 0,25} R 1C 0,06; R . 5В 0,38 „5 --+53,1(с 0,47, в 0,1 H.-I-ICI ) . Примере. 1-Тирозил-0-алани глииил-1-фенилаланин-2-аминоэтилами Tyr-DAIa-Gl у-MePhe-NH Cfl. CH2NH Z (полученный способом, описанным в мере 4) (350 ME) растворяют в 20 метанола и добавляют к суспензии 10% палладия на угле (100 мг) в 10 мл воды. Водород барботируют в течение 4 ч при . Катализатор тем отфильтровывают и растворитель отгоняют при пониженном давлении.О таток растворяют в небольшом количестве 1% пиридина в воде и вносят ,в колонку с Сефадексом ЗР (элюирую градиентом 1% водны.й пиридин - 1 водный пиридин ацетат-я 5% вод ный пиридин аде тат) . Соответствую-. щие фракции объединяют и растворитель отгоняют в вакууме, Продукт (220 мг) сушат вымораживанием из воды, Ri ЗВ 0,45; Ri 4А 0,56; +22,22 (с 0,98; 0,1 M HCI). Пример.. 1-Тирозил-0-aлaнилглицил-N-мeтил-L-фeнилaлaни н-3-тpимeтилaмIvIoний пропил амид ацетат-. - .. .(1) BQ.C;-;T:y r(-:B-u% D А la-Gly-HePhe.-NHCH-2 CH;2;:c;H2;NHej-OAf.. К раствору;: б 4 6 мг В О С - Т у г ( В и ) -DA I a-G.i:y.-MePh..-NHC(:l2;CH.;2.CHiNMe2 (640 мг). .в 5.;мл эт.анола добавляют йодистый мети.л; (5;72 :Мг.) /и раствор перемешн.вают. .при. .комнатной температуре, в течение-.-48. ч. Затем, раствор упаривают , ост.аток раствор.яют в этилацетате и .хроматографируют на колонке, с силикагелем (40x2 см), продукт элюируют смесью этилацетат .: Пиридин : уксусная кислота : : вода 90 : 20 : 6 : 1.1. Объединяют фракции, содержащие целевое соединение,, .упаривают, . получают твердое вещество (320:мг.) . R. ЗА 0,17; R ЗВ 0,74;. ;R. 4А .0,47. (2) .Н-Ту r-D.AI a-GLy-MeP.he- N НС И . СН, С Н Н е ,,. .АЦет ат Растворяют- .Указанный, защищенный тетрапептид (ЗОО мг) в эт.илацетате (10 мл) и. краствору .при перемешивании добавляют раствор HCI в этилаи,ётате (3 , 9 М , 4. мл). Через 1 чсмесь упаривают, остаток, растворяют в воде и. вносят на колонку с целлюлозой СМ 52 (35 X. 3 см), продукт элюируют. линей.ным градиентом концентрации от 0,05 -ного водного пиридина до 1%-ного-водного пиридинса1етата. .Объединяют фракции, содержащие целевое.соединение, упаривают. и остаток лиофилизируют из воды, получают целевой продукт (110 мг) в виде белого твердого вещества. R. ЗВ 0.17; R 4А 0,13; Rr 5В 0,05; ci ,./, -37,75°(с. 0,5,DMF). Пример 8. 1-Тирозил-0-метиоНИЛглицил-N-метил-L-фенилал ани в- 2-димётиламиноэ тиламид-N-окись. (1) вое-Giy-MePh-NH (01-12)2 N (О ) Meg . Краствору BOC-Gly.-MePh-NH (СНа) NMe-j, в 200 мг метанола добавляют 1,23 г м-хлоронадбензойной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при 22°С в течение 2 ч, затем оставляют при на 18 ч. . Растворитель отгоняют при пони- , женном давлении и остаток растворяют в 150 мл этилацетата, раствор промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2x30 мл), над сульфатом натрия и упаривают, получают . N-OKHCb (1,9 г); Rr ЗА 0,76 ; R 4А 0,64. .(2) НС 1 HGI y-MePh-NH (042)2.(0) Указанную .защищенную N-окись (1,8 г) растворяют в 10 мл этилацетата и краствору добавляют уксусную кислоту (10 мл). Затем в раствор вводят раствор хлористого водорода в этилацетате (3,9М, 12 мл) и смесь перемешивают при 21 С в течение 30 мин. Растворитель отгоняют в вакууме и полученное твердое вещество, растирают с безводным диэтиловым эфиром (2 X 40 мл), Хлористоводородную соль М-окиси (1,5 г) отфильтровывают, R 4А 0,40.

(3) BOC-Tyr(But)-DMet-GI y-MePh-NH(CH,, )2 N(0)Me2.

К раствору 1,8 г ВОС-Ту г (Bu)-DMet-OH в 10 мл безводного THF добавляют 0,87 г N-оксисукцинимида,

1,5 г HCI-HGIy-MePhe-NH(CH2)2N(0)Me2 и и, 84 мл N-метилморфолина растворяют в 2 мл безводного THF. Оба раствора смешивают,охлажда до -10°С и добавляют к смеси 0,87 г дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают при -10°С в течение 2 ч, затем при 20°С в течение 18 ч.

Реакционную смесь отфильтровываю и прозрачный маточник упаривают под вакуумом. Полученную смолу распределяют между этилацетатом (60 мл) и водой (10 мл), органическую фазу отделяют и промывают 10%-ным водным раствором бикарбоната натрия (1x10 мл), а затем экстрагируют 10%-ным водным раствором лимонной кислоты (5x15 мл). Величину рН водной фазы доводят до 7, используя твердый бикарбонат натрия, и продукт экстрагируют этилацетатом (3x40 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают, получают смолу (1,35 г). Rn ЗА 0,48

(4) HCI -H-Tyr-OMet-Gly-MePh-NH(CH2 )2.N(0)Me2.

1,11 г BOC-Tyr()-DMet-GI у.-MePh-NH(CH2)2 N(0)Mea растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (36 мл) и воды (4 мл), содержащей анизол (0,2 мл). Смесь перемешивают в течение 30 мин при 22°С, затем упаривают в вакууме. Продукт чистят хроматографией на силикагеле используя градиентную систему (система растворителей ) в качестве элюента. Материал после очистки на колонке Q силикагелем переносят в колонку с карбоксиметилцеллюлозой, элюируют градиентом от 0,1%-ного водного пиридина до 1,5%ного водного пиридинацетата.

Соответствующие фракции объединяют, выпаривают, остаток высушиваю повторным вымораживанием из разбавленной HCI, получают целевой гидрохлорид (341 мг).

.Rf ЗВ 0,31; R 4А 0,44;Rf 5S 0,19;Cd::; g +29,30° (с 0,99, О , 1 н . Н С I ) .

.Пример 9. L-Тирозил-О-метионил (сульфоксид) глицил-М-метил-L-фенилаланин-2-диметиламиноэтиламид-Н-окись.

К раствору 418 мг HCl-H-Tyr-DMet-Gly-MePh-NH(CH2)2N(C)Me2 в 150 мл этанола добавляют 1,46 мл перекиси водорода. Раствор перемешивают при 21°С в течение 24 ч, после чего растворитель отгоняют при пониженном давлении и полученный материал чистят хроматографически на целлюлозе СМ,. используя градиент,ное элюирование от 0,1%-ного водного I пиридина до. 1,5%-ного водного пири дин- ацетата.

Материал, полученный после очистки на колонке, высушивают повторным вымораживанием из HCI, -получают целевой гидрохлорид (354 мг).

R ЗВ 0,32; Rf 4А 0,43; R 5В 0,32;Со(.ъ° +9,16° (с 1,05; 0,1 н- HCI ) .

В табл.1 указаны подробности получения других соединений формулы I способами, описанными в указанных примерах.

Ниже перечислены другие типичные соединения по настоящему изобретению:

)Wa-Cib-Me,PVi(napa-ce,)-NHCH2CH2N(oMej H-T4r-D№Q-Qt -Ph(nQpa-Ct)-NHCHaCH2.N(.

H-lVn-MU- Gly-KePh-NC

(о)Мвг

J it-tpef if

H-Tyr - DAla - Cly-TTePJi-N:

СНгСН2М(0)Мег

H - Тур - DAla - Cty -ИГеРЙ- К fJ

CH2CHzN(0)Me2

Л - Туг - D Ala - Cly N

ОН2СНгТ Р(о)Мег

СНгСНг

H-Tyjp - HAIa- Cly -MePh TV

CIH2CH2N(0)Me2

H-Typ-DAla-Oly-MePh N

iH-tyr-DAla-OIy-MePh N

CHgCHaWtOjKee

CHgCHs

/

H-Typ-HAla-Ciy-WePh

CHaCHsNfOlMeg

СПгСНе H-TyP-DAla-Gly-MeFh Nci

CHgCHaNlOlMea

CHg снг Cly - KePh IT

СНгОТг 10)Ме2

СНаСНгGly-WrePJh. ISTОИ

С 2СЛ2Т 1о)Гег caijCHa OH25 H Tyi - DAla - GJy -MePn N, CH2GH2N(o) ,-л СНзСНа-С У-ОМ( |.1.,А1а-О у-МеР1да 30 CH2CH2N(0)M.2 СН2СН2Н-ТуР -DAla - Oly -MePli--N - оме CH2CH2N(0)M-e2 СЯгСТз И -Туг - DVU а - 0 y- TePh-K. оКе С1Г2СН2ТЧ(о)Меа Н - Тут - БА1а- Gly - IePh- WiCH2.CH2K(0)MeCH2CH2 aij f- ТУР GlY-MePh-ЖСНо СМгШзРЯ Н-Tyr-UAla- Cly-MeFH -NHOtia cHaWicoTfiicHs HzCiij. H - Туг -DAla - Cly-Ph -N SOg H- Туг-DAla- Cly-KeFh- . li Тур HAla - Cly -HePti -(/

Me

-N N

e

H-T f-DA a-Gbv-Ph

CH,.COO

J

дле

H-T4r-DAEa-Ge.4-ANepti-N::;; 2C2P

н-т г-вАеа-йеу-меРЪ чнсн2Сн,н( H-Tyr-DVae. -GeN-MePhNHCH,.(.o)Me2 H -D-Ley-cey -MePti NHCH2 CH2H(.o)Me2

H-Tvr-DNbe.u-Ge-y N e,PViNHCH2 CHjNCOW62,

H-Tyr--DTra-c,ey-Me,PhNviCH.jCH2N(o),. H -Tsr -DAta - Qe.i -Wepti NHCH- CH NHMe

20 H-jyv-D )- eph lнcн2al,.,)

H-T jr-ВКШ- aE -MePVi ННСН2 СН2 Ю:; -Ь2 Q 50 55 Q й5 H-T r-Dfkta -Gt -MePti NHCH2CH, H-T l--DA&a-GE-J-N ePliKHCH2CH,.t2 Исходные амины формулы HNRgRX, используемые при получении соедине ий/ описанных в вышеуказанных при Р ®сли они не являются коммерчески доступными, могут быть получены известными способами, либо так как описано в нижеследующих примерах. П р и м е р А. N-Изoaмил-NN-диметилэтилендиамин. (1) Me,CHCH5CONHCI-U CH2NH2: . По каплям при перемешивании добавляют раствор 5 г (38 ммоль) хлористого изовалероила в дихлорометане к- раствору N ,N-диметилэтилендмамина (3,38 г, 38 ммоль) и N-метилморфолина (7,75 г, 76,7 ммоль) в дихлорметане, при 0°С. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и продолжают перемешивание в течение 4 ч, затем растворитель отгоняют. Остаток растворяют в 50 мл 5 М едкого .натра и экстрагируют этилацетатом (2x100 мл). Этиладета1Т промывают насьш енным водным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в диэтиловом эфире добавляют к нему 10 мл 5 М НС I в этилацетате Выпавший в осгщок продукт отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром (5x10 мл) к сушат в глубоком вакууме. Выход 5,43 г; R ЗА 0,40. (2) Me2 CHCH2,CH2.NHCH2,. Раствор ука занного амида (5 г) в безводном тетрагидрофуране (50 мл) по каплям, при перемешивании добавляют к суспензии LiА 1Нд (4) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) при

комнатной температуре. Затем реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч,по9ле чего, используя хроматографию в тонком слое, обнаруживают отсутствие исходного материала. Избыток LiAIH гасят насыщенным водным раствором сульфата натрия. Полученную суспензию фильтруют, маточник подкисляют 10 мл 4 М HCI. Рартворитель отгоняют,остаток растирают с диэтиловым эфиром,фильтруют и осадок высушивают.

Выход 5,51 г.

Пример В. N-Фeнэтил-N,N-диметилэтилендиамин

(1) PhCH CONHCHj CH NH - НС I.

Указанное соединение получа(рт способом, описанным в примере А{1), путем сочетания фенацетил хлорида (1,0 ,47 ммоль) с N,N-димeтилэтилендиамином (0,42 г,б,47 ммоль) в присутствии N-метилморфолина.

Выход 1,38 г; R ЗА 0,80.

(2

PhCH2 CH2NHCH,CH2NH.- HCI,

Целевое соединение получают восстановлением вышеуказанного амида (10 г) с помощью LiА IN4 , как описано в примере А(2). Полученный продукт чистят хроматографией на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента систему ЗА.

Выход 4,.

Пример С. N -(2-Аминоэтил)-Nм-диметилмочевина.

(1)PhCHjiOCONHCH CH NHCONMe .

Раствор хлористого диметилкарбамоила (1,39 г) в диэтиловом эфире (15 мл) добавляют по каплям к перемешиваемому раствору N-метилморфолина (1,57 г) и 2-бензилоксикарбнил минозтиламина (3,02 г) в 110 мл диэтилового эфира. Смесь перемешивают 4 ч, затем оставляют на два дня. Эфир отгоняют, твердый продукт распределяют между 10%-ной водной лимонной кислотой и этилацетатом. Этилацетатный слой отделяют и промывают 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором хлористого натрия, а затем сушат над сульфатом натрия и упаривают, получают твердое вещество (1,7 г). После перекристаллизации из смесей.этилацетата и петролейного эфира (т.кип. 60-80с) , получают продукт с т.пл. 81-82 с.

(2)H2NCH2CH2NHCONMe2.

1,06 г N-бензилоксикарбонильного соединения растворяют в 30 мл этанола, содержащем 2,1 мл 2 н. водной соляной кислоты и подвергают гидрогенолизу над 10%-ной (100 мг)

в течение 1,5 ч. Смесь фильтруют, маточник упаривают, получают целевое соединение в виде хлористоводородной соли, которую используют без дополнительной очистки.

- Пример D. N-Изoaмил-N-мe тилэтилендиамин.

11) BOC-Gly-N(Me)CH.jCH2 СНМе .

К раствору 17,5 (0,1 моль) BOC-GlyOH в 100 МП безводного хлоQ ристого метилена, добавляют 10,1 г (0,1 моль) N-метилморфолина и 13,7 г (0,1 моль) JBCF при -15°С. Спустя 2 мин добавляют 13,7 г (0,1 моль) М-метилизоамиламингидрохлорид и

10,1 г N-метилморфолина. Реакционную смесь перемешивают при в течение 15 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель отгоняют и масло растворяют в этнлацетате, экстрагируют насыщенньп-- бикарбонатом натрия (2x100 мл), 10%-ной водной лимонной кислотой (2x100 мл), промывают водой до нейтральной реакции, сушат над сульфатом натрия и упаривают.

5 Получают масло. Выход 27 г (количественный) ; RO 70 0,79.

(2) H2NCH.(Me)CH2CH CHMe2 .

0 12 г BOC-GIy-N(Me)CH2CH2CHMe2

растворяют в 90%-ной водной трифторуксусной кислоте ( : СРт,СООН 1:9,35 мл). Через 2 мин растворитель отгоняют, оставшееся масло раствое ряют в 50 мл свежевысушенного тетрагидрофурана и добавляют к диборану в тетрагидрофуране (1М, 150 мл) в атмосфере азота при -20°С. Температуру поднимают до комнатной и реакционную смесь перемешивают в течение, ночи. Осторожно добавляют 100 мл

метанола для разложения избытка диборана, растворитель отгоняют, получают масло. Затем масло обрабатывают 50 мл 6 М HCI. Реакционную 5 смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч и смесь упаривают. Полученное масло обрабатывают 2М NaOH в течение 1 ч, подкисляют и упаривают. Маслообразный остаток чистят 0 колоночной хроматографией на силикагеле (колонка 2,5 х 80 см), элюируя целевой продукт системой растворителей ЗА.

Выход 4,4 г, R ЗА 0,20. г Пример Е. Диметил-(2-aминo-4-мeтилпeнтил ) -амин .

(1) BbC-Leu-NMe2.

К раствору 4,62 г (20 ммоль) ВО С-Leu-ОН-в хлористом метилене,

0 охлажденному до -20°С, добавляют 2,25 мл (20 ммоль) N-метилморфолина и 6,0 г (20 ммоль) хлордифенилфосфатоксид (6,0 г, 20 ммоль), спустя 15 мин добавляют 5,6 г

5 (125 ммоль) диметиламина. Через

3 ч при раствор упаривают и остаток распределяют между этилацетатом и водой (50 мл каждого). Органическую фазу отделяют и промывают 10«-ной водной лимонной кислотой, водным бикарбонатом натрия и насыщенным рассолом, сушат над сульфатом натрия и остаток упаривают, получают целевой амид (5,15 г

(2) Me2,NCH2CH(NH2,)CH2.CHMe2 .

Раствор 1,3 г (5 ммоль) BOC-Leu-NMe 2. в водной трифторуксусной кислоте ( : 9:1,20 мл) перемешивают в течение 1 ч. Растворитель отгоняют и остаток растворяют в безводном тетрагидрофуране. Перемешиваемый раствор охлажд,ают до -20°С в атмосфере азота и добавляют раствор диборана в тетрагидрофуране (1м, 30 мл), Через 5 ч при комнатной температуре добавляют 10 мл метанола, раствор перемешивают в течение 12 ч и затем упаривают. Остаток растворяют в 15 NUI водной 2м соляной кислоты и перемешивают еще в течение 12 ч, реакционную смесь упаривают. Остаток чистят хроматографически на силикагеле (система ). Соответствующие фракции объединяют, упаривают, получают целевой диамин в виде масла которое при стоянии - кристаллизуется . При биологических испытаниях полученных препаратов самцов или самок морских свинок (штамма Дункан Хартли) убивают ударом по голове, удаляют часть илеума и помещают в баню для отдельных органов объемо 50 МП. Получают судорожную реакцию при низкочастотной (0,1 Гц)

HTyr-DAIa-GI y-Ph-NH (СН2)э CONH-j,

HTyr-DAIa-Gly-HePh-NH(CH),CONMe2

HTyr-DAla-Gly-MePh-NH(CH)2NH

HTyr-DAIa-Gly-MePh-NH(CH2)COOMe

HTyr-DAIa-GIу -MePh-NH(CH)COOH

СТИГ4УЛЯЦИИ прямоугольными импульсами 0,5 мс. Исследуемое соединение растворяют в дистиллированной воде ,цля получения исходного раствора в концентрации 1 мг/мл. Делают последовательные разбавления, используя раствор Кребса, чтобы иметь концентрации 10 мг, 1 мг и 0,1 мг/мл. Соединение испытывают посредством добавления от 0,1 до О,3 мл растворов к бане для органов. Затем определяют зависимость реакции от дозы и сравнивают с зависимостью для метенкефалина.

При испытаниях с отдергиванием хвоста крысы в качестве ноцицептив5 1-ю го раздражителя используют горячую воду (поддерживаемую при ).

Результаты представлены в табл.2, получают при испытании соединений по изобретению с помощью илеума морской свинки , активность по сравнению с метенкефалином при испытании по Гендершоту с сотр. и в испытании с надавливанием крысиного хвоста.

Фармацевтические составы могут быть, например, в форме, пригодной для парентерального введения , такой , как стерильные водные или масляные растворы или суспензии для инъекций. Дозированные парентеральные формы, пригодные для внутривенного, внутри 1ьнIIeчнoгo или подкожного введения, содержат от 0,1 до 50 мг/мл соединения по изобретению (или эквивалентное количество фармацевтически допустимой его соли). Уровни дозы будут, как правило, для облегчения боли, в пределах от 0,1 до 100 мг в зависимости от пути введения.

Таблица 1

+52,8 (c 1,04;0,1 H.

HC I )

Гс/.3в° -43,3

(с 1; DMF)

+26,1

(с 1,0;0,1 н.

НС I )

n

Wljo +23,0

(с 0,85;0,1 н.

НС))

, +25,5

(с 1,07;0,1 н.

НС )

Продолжение табл.1

Продолжение таблГТ

25

Примечание. А- гидролиз прим.11.

Формула изобретения Способ получения тетрапептйдов общей формулы

R -Tyr-BtGly-C-N-CCHj), Х (.j-j

R2 где R/1 - водород, метил;

26 Продолжение

793386

табл. 1

Таблица 2

В-о-А1а. 0-Het, D-Met (0) , D-NVa I , . D-Ser, d-Thr; D-Val, 0-Leu;

C-Phe, MePh; R, - водород, алкил C, , фенэтил;

МJ

X-NHa- , NHCOCH,, NHCOOC H,,. NHCOOCHjPh, NHCONHa, NHCONMe,,

NMeiN{0)Mej, NMePh, N(O)MePh, COOCH;, , .COOH, CONHg,, CONHMe, CONMe, CONMePh, OCONHj, -М-(СН2)„Х является группой:

Ri

. -/.

S-О

Л

1/ иаи -N ГГ;

Xph

отличающийся тем, что соединение формулы

,(II)

где Y - соответствующая N-защитная

группа;

Ми - соответствующая защищенная аминокислота или пентидный остаток, конденсируют с соединением формулы

Н-Мг-у-( , Рг

где Й2 к X имеют указанные значения :

М - подходящая аминокислота или пептидный остаток, при условии, что М/( и М вместе означают TyrBGIyC- или его защищенное производное, где значение для В и С указаны выше, с последующим удалением защитных групп и выделяют целевой продукт или в случае, когда X:NMe или NMePh, при желании окисляют перекисью водорода или метахлорпербензойной кислотой для получения соединения формулы I, где X:N(0)Me2, N(0)MePh.

Приоритет по признакам: 15.12„77 при R, В, D,R , п - вс значения; X - NH NHCOCH 3, NHCOOCg H , NHCOOCHaPh, NHCONH-j, NHCONMej, NMejN(0)Me2., NMePh, N(0)MePh, COOCH COOH, CONHg, CONHMe, CONMe, , CDNMeP h , OCONH. .

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Шредер Э., Любке К. Пептиды, ч. I., М., Мир, 1967, с. 116.