Способ получения @ -аминомасляной кислоты Советский патент 1982 года по МПК C07C227/14 A61K31/197 C07C229/08 C12P13/00 

xipOMHODO .носителя иопользуют амиеоироиилаилохром.

Непрерьшный процесс ведут в ироточ«ом перем€(ши1вабмо.м реакторе, в котарый подают .раствор субстрата (.L-плутамимовой кислоты) и однОВременно от водят часть реакциодной смеси, содержащей продукт. CiKopocTb протока устанавливают таковой, чтобы среднее время контактирования было достаточным Для степени ко1Н1вер€и)и оубстрата около 0,95. Реакщию гароводят при )рН и TeMiCTepiaType,- со.отвбтст1вующих области стабилыности иммо6ил1изов.аиного эизима: рН 3,5i-6,0, преимущественно 4,0- 4,6, (И температура 20-60°С, преимуществеЕно 35;-50° С. Продукт - -амииомасляную жислоту - выделяют известными методами.

П р и .м е .р 1. Получение й;м.мобилизованной /.-глутаматдекарбоисилайы. И.ммобилизов.а«ную L-глyтaмaтДlelKa)pбoкcилalзy получают .ковалентлым присоеди1иен1ие1м фермента к носителю, содержащему брома1цетильиы1е группы. Исходный носитель - аминопрошилсилохром СХ-2,5 с размером траяул 0,3il5-0,400 мм. Для вдедения бромащетильных i piynn 5 г носителя суспендируют в 40 мл дио ксана, вакуумифуют 10-15 1МБН (вакуум 1водоструйно1Ю насоса), лрибавляют 0,45 г бромуксусной йислоты И эквивалентное кол1И1чество - 0,6 г ЫуМ-дициклогексилкарбодиимщ1а. Реакционную смесь перемешивают на качалке при ко.мнатной TeiMnepiaType ,в течение 3 ч. Затем носитель промывают диоксаном, )водой и 0,05 М фосф.атным буферным раствором, |рН 7,2. Для иммо билизащии спо.льзуют препарат 1.-глутаматде;кар)бо.ксилазы ,из Escherichia соИ щт 600, с акти1В1ностью 33 Elm: белка (f-.MiKiM-мин ). В 50 мл раствора L-глута.матдекарбоксилазы (KOIHцентрация 2 мг/м.л) в упомядутом буферном растворе суспендируют 5 г активированного бромацетильными остатками 1носителя и смесь .перем1ешивают на качадке 5 20 ч nipiH 4° С. Затем носитель со Овязаадным ферментом промывают 0.05. М фосфатным буфером, рН 6,0, 1 М .раствором N.aCl 1И снова тем же фосфатным буфером. Активность иммобил1изован«ого лрепара0 та - 396 Elf, выход по активности 60%.

Иммобилизованный препарат хранят в холодильнике (4° С) в виде суспензии .в фосфатном буфере, рН 6,0, содержащем 0,026 мт/мл пиридокоальфосф.ата.

15,

Пол|учен:ный указанным методом препарат им1мобилизован1ной Ь-глутаматдежарбоксилазы по стабильности в проточном режиме существенно превосходит препараты, полученные, другими методами иммобилизации. Для определения стабильности используют тест стабильности в колонке при следую|Щих условиях: 0,025 М раствор А-глутаминовой ;кисл1оты,

5 рН 4,6, содержащий 0,i013 мг/мл иИридоксалъфоаф.ата, прокачивают микронасосо:м через термостати.руемую П|ри 55° С колонку со /скоростью 50 мл/ч. В .определенные интервалы времени извлекают образец иммобилизованного препарата и измеряют остаточную активность методом рП-етата. Критериём стабильности является константа первого порядка скорости инактивации фермента при гл.у1бине превращения около

50%. Результаты ояред1ел:бН1И1Я начальной актЕвнасти .и стабильности в проточном режиме препаратов, пол-ученных различными методами, а имеюно, иммобилизованной L:глутам:атдекарбоксилазы, приведе1ны в таблице. Исходный нос:иггель - а.м-И1НО1Процилсилохром CX-i2,5.